本发明涉及一种分辨盐晶与蛋白质晶体的方法，通过交联的方式，在不损坏蛋白质晶体的前提下高效区分盐晶与蛋白质晶体。
背景技术
蛋白质结晶是一个非常重要的过程，它可以实现高纯蛋白质样品的规模制备，用于生物药物、生化试剂等领域的工业生产；它也可以为生物大分子特别是蛋白质分子结构解析提供晶体样品，实现高分辨率的分子结构信息获取；此外，该过程也能够在纳米材料制备、生物传感器研发、酶催化剂研制、结晶形核与生长理论研究等领域获得重要应用。为实现成功的蛋白质结晶，通常需要首先进行结晶条件筛选。由于在该筛选过程中，往往可能会获得盐晶。由于盐晶和蛋白质晶体从外形上看，其几何特征比较接近，因此仅根据显微镜下的光学观察，不能确认获得的晶体是盐晶还是蛋白质晶体。为了区分蛋白质晶体与盐晶，人们发展了一些技术，如利用紫外光照射观察荧光照片，根据荧光强弱判断、或利用x射线衍射直接衍射，根据衍射花样判断。另外还有一些技术如染色法、沉降法、机械破坏法等。这些已有技术中，最为明确的是衍射法，其他技术或多或少存在误判、或损坏晶体的可能。而衍射法则存在需要衍射仪衍射的问题，耗时费力，同时在没有衍射条件下，存在难以开展工作的问题。因此，进一步发展新的分辨技术，非常必要。
技术实现要素：
要解决的技术问题
为了避免现有技术的不足之处，本发明提出一种分辨盐晶与蛋白质晶体的方法，能够简易、快速、高效分辨盐晶与蛋白质晶体，并且对蛋白质晶体不会造成损害，彻底解决盐晶与蛋白质晶体分辨方法的准确、高效、使用方便性等问题。
技术方案
盐晶与蛋白质晶体外观和偏光极其相似，利用x-射线衍射仪进行衍射区分会损坏蛋白质晶体并且x-射线衍射仪及其耗材使晶体区分实验成本昂贵、推广不便，为解决区分盐晶与蛋白质晶体方法的准确、高效、使用方便性问题，本发明提供一种利用交联途径提高盐晶与蛋白质晶体区分效率，降低区分成本的区分方法。使用这种方法可以有效区分盐晶与蛋白质晶体，在结晶实验中采用此方法可以有效降低研究者的时间成本，实现高效工作。
一种分辨盐晶与蛋白质晶体的方法，其特征在于步骤如下：
步骤1、配制交联溶液：将交联剂和二蒸水分别置于温度为4～20℃控温箱中，当温度为4～20℃时，将交联剂溶液加入二蒸水中，并搅拌形成温度为4～20℃、体积比为0.5-10％的交联剂溶液；
步骤2、用交联溶液区分盐晶与蛋白质晶体：
a)在显微镜下观察蛋白结晶板上生长出的晶体；
b)在4～20℃温度下将交联溶液与蛋白结晶体系溶液按体积比1:1混合，或吸取2μl交联溶液置于结晶板上，然后用捞晶体环将晶体捞入交联溶液中；
c)若晶体在交联液滴中溶解或者消失说明晶体是盐晶，若晶体未溶解则是蛋白质晶体。
所述交联剂为化学交联剂或生物交联剂。
所述交联剂戊二醛或乙酸酐。
有益效果
本发明提出的一种分辨盐晶与蛋白质晶体的方法，在4-20℃温度下将交联溶液与蛋白结晶体系溶液按体积比1:1混合。或者吸取2μl交联溶液置于结晶板上，然后用捞晶体环将晶体捞入交联溶液中；显微镜下观察1-10分钟，若晶体在交联液滴中溶解或者消失说明晶体是盐晶，若晶体未溶解则是蛋白质晶体。
1.本发明所采用的交联溶液为戊二醛、乙酸酐等溶液，制备方法简单，原料易得。制备的交联剂溶液温度与晶体生长、成熟温度相同，使晶体不会因为所处环境温度的变化，而造成损害，有效避免环境温度因素对实验结果准确性的影响。
2.本发明中盐晶在交联剂溶液中会很快溶解或者消失，但蛋白质晶体不会，由此可实现简易的晶体类型辨别。蛋白质晶体在交联剂的溶液中会发生交联反应，该反应使蛋白质晶体中的蛋白质分子发生交联，提高蛋白质晶体的稳定性，交联后的蛋白质晶体可稳定存在于常温环境并且可适应ph等外界条件的变化。
本发明为分辨盐晶与蛋白质晶体提供一种高效、简便、快捷的方法。直接使用x-射线衍射仪区分盐晶与蛋白质晶体，需要极高的实验条件，增加实验者人力和时间成本。x-射线衍射仪产生的冷冻和电子辐射对蛋白质晶体造成的损伤是不可逆的，而采用交联溶液对盐晶与蛋白质晶体进行区分的方法实验条件简单，对蛋白质晶体的损伤低，交联后的蛋白质晶体仍然可以用于衍射仪解析蛋白质的三维结构。
具体实施方式
现结合实施例对本发明作进一步描述：
本发明提出一种简易分辨盐晶与蛋白质晶体的方法。具体方案主要包括以下两个方面：1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液；2.利用交联溶液对蛋白质结晶板上的盐晶与蛋白质晶体进行分辨实验。
1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液主要包括以下两个步骤：
第一步：二蒸水和交联剂溶液恒温处理；
第二步：将二蒸水与交联剂溶液进行混合，即可制得用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。
2.利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验：
第一步：用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验。第二步：用显微镜观察盐晶与蛋白质晶体的变化。
实例1
检测利用交联溶液戊二醛对蛋白质结晶板上的磷酸镁盐晶与蛋白酶k蛋白质晶体进行分辨。
检测一种简易分辨盐晶与蛋白质晶体的方法。具体方案主要包括以下两个方面：1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液；2.利用交联溶液对蛋白质结晶板上的盐晶与蛋白质晶体进行分辨实验。
1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液主要包括以下两个步骤：
第一步：二蒸水和戊二醛溶液恒温处理。将戊二醛和二蒸水放置于20℃控温箱中，恒温处理24小时，待戊二醛和二蒸水温度至20℃。
第二步：制得用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。把戊二醛溶液慢慢倾倒于二蒸水中，并用转子不断的进行搅拌，最终形成体积比为5％的戊二醛溶液，即为用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。
2.利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验：
利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验主要有两个步骤。第一步：向蛋白质结晶板的结晶孔中的结晶体系中添加2μl体积比为5％的用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。第二步：在显微镜下观察晶体形貌的变化。
观察发现，在盐晶的结晶体系中添加用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液后，磷酸镁盐晶开始溶解，并最终消失，而蛋白酶k蛋白质晶体未发生溶解现象。
实例2
检测利用交联溶液戊二醛对蛋白质结晶板上的硫酸铵盐晶与蛋白酶k蛋白质晶体进行分辨。
检测一种简易分辨盐晶与蛋白质晶体的方法。具体方案主要包括以下两个方面：1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液；2.利用交联溶液对蛋白质结晶板上的盐晶与蛋白质晶体进行分辨实验。
1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液主要包括以下两个步骤：
第一步：二蒸水和戊二醛溶液恒温处理。将戊二醛和二蒸水放置于20℃控温箱中，恒温处理24小时，待戊二醛和二蒸水温度至20℃。
第二步：制得用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。把戊二醛溶液慢慢倾倒于二蒸水中，并用转子不断的进行搅拌，最终形成体积比为5％的戊二醛溶液，即为用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。
2.利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验：
利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验主要有两个步骤。第一步：向蛋白质结晶板的结晶孔中的结晶体系中添加2μl体积比为5％的用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。第二步：在显微镜下观察晶体形貌的变化。
观察发现，在盐晶的结晶体系中添加用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液后，硫酸铵盐晶开始溶解，并最终消失，而蛋白酶k蛋白质晶体未发生溶解现象。
实例3
检测利用交联溶液戊二醛对蛋白质结晶板上的硫酸铵盐晶与葡萄糖异构酶蛋白质晶体进行分辨。
检测一种简易分辨盐晶与蛋白质晶体的方法。具体方案主要包括以下两个方面：1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液；2.利用交联溶液对蛋白质结晶板上的盐晶与蛋白质晶体进行分辨实验。
1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液主要包括以下两个步骤：
第一步：二蒸水和戊二醛溶液恒温处理。将戊二醛和二蒸水放置于20℃控温箱中，恒温处理24小时，待戊二醛和二蒸水温度至20℃。
第二步：制得用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。把戊二醛溶液慢慢倾倒于二蒸水中，并用转子不断的进行搅拌，最终形成体积比为5％的戊二醛溶液，即为用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。
2.利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验：
利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验主要有两个步骤。第一步：向蛋白质结晶板的结晶孔中的结晶体系中添加2μl体积比为5％的用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。第二步：在显微镜下观察晶体形貌的变化。
观察发现，在盐晶的结晶体系中添加用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液后，硫酸铵盐晶开始溶解，并最终消失，而葡萄糖异构酶蛋白质晶体未发生溶解现象。
实例4
检测利用交联溶液乙酸酐对蛋白质结晶板上的硫酸铵盐晶与葡萄糖异构酶蛋白质晶体进行分辨。
检测一种简易分辨盐晶与蛋白质晶体的方法。具体方案主要包括以下两个方面：1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液；2.利用交联溶液对蛋白质结晶板上的盐晶与蛋白质晶体进行分辨实验。
1.制备用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液主要包括以下两个步骤：
第一步：二蒸水和乙酸酐溶液恒温处理。将乙酸酐和二蒸水放置于20℃控温箱中，恒温处理24小时，待乙酸酐和二蒸水温度至20℃。
第二步：制得用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。把乙酸酐溶液慢慢倾倒于二蒸水中，并用转子不断的进行搅拌，最终形成体积比为5％的乙酸酐溶液，即为用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。
2.利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验：
利用分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液进行分辨实验主要有两个步骤。第一步：向蛋白质结晶板的结晶孔中的结晶体系中添加2μl体积比为5％的用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液。第二步：在显微镜下观察晶体形貌的变化。
观察发现，在盐晶的结晶体系中添加用于分辨盐晶与蛋白质晶体的交联溶液后，硫酸铵盐晶开始溶解，并最终消失，而葡萄糖异构酶蛋白质晶体未发生溶解现象。