一种的免疫层析联合检测卡的制作方法

本实用新型涉及一种的免疫层析联合检测卡。

背景技术：
：

横向流动检测法也被称为横向流动免疫层析测定，是用于检测样品中目标分析物的是否存在的便携装置，可以在不需要专门的和昂贵的设备的情况下使用，可以配备小巧便携的检测设备作为支持;通常情况下，这些试剂设备用于家庭测试，急诊或实验室的医学诊断;一个最为广泛传播和众所周知的应用实例是家庭用怀孕测试卡。

免疫层析中的样品垫起到海绵的作用，容纳了过量的样品液体;一旦被浸透，液体流动迁移到标记物垫中，在标记物垫中存储着的标记物，是干燥的具有生物活性的颗粒形式，在盐和糖等基质中保持活性，这些活性物质可以与被检测的目标物分子发生特异性的反应，如抗体抗原的免疫结合，这些反应的复合物已被固定在颗粒表面上。当样品液体溶解盐糖基质时，它也会将颗粒溶入其中，并且在流过多孔结构膜的同时，与预先固定在上面的另外的配体结合，形成在固定位置上的条带，条带一般有两种，检测条带显示被检测的目标物的含量情况，质控条带表示出流动反应状态是否良好。最终液体流动进入吸收相中，测试完成。

C-反应蛋白是炎症反应中典型的急性期蛋白;它由肝合成并由五条相同的多肽链组成，其形成分子量为105000道尔顿的五元环;CRP是急性期反应物中最敏感的，在炎症过程中其浓度迅速增加;复合CRP激活以C1q开始的补体系统；然后CRP启动入侵细胞的调理作用和吞噬作用，但其主要功能是结合和解毒由组织损伤产生的内源性有毒物质；CRP检测用于检测全身性炎症过程；评估用抗生素治疗细菌感染；检测宫内感染同时伴有早期羊膜破裂；区分同时感染的活性和非活性形式的疾病，例如在患有SLE或溃疡性结肠炎的患者中进行；治疗性地监测风湿性疾病并评估抗炎疗法；确定在早期阶段存在手术后并发症，如感染伤口，血栓形成和肺炎，并区分感染和骨髓移植排斥反应；高敏CRP测试已被用于早期检测儿科感染和冠心病风险评估。一些研究得出的结论是，高度敏感的CRP检测可以用作预测明显健康人群冠心病风险的指标，并作为预测复发事件的指标； CRP值的增加是非特异性的，不应该在没有完整临床病史的情况下进行解释。

白细胞介素-6（IL-6）是具有广泛功能的多效性细胞因子；它首先被描述为干扰素-β2，浆细胞瘤生长因子和肝细胞刺激因子；后来被描述为人B细胞刺激因子2（BSF2）。在1988年，有人提出将其命名为IL-6，因为进一步的研究已经证明该蛋白质不仅显示B细胞的活性，而且显示T细胞，造血干细胞，肝细胞和脑细胞的活性；一个编码212个氨基酸产物的单一基因，在N-末端被切割产生一个分子量在22-27 kDa之间的184个氨基酸的肽。1989年，据报道还有一些60-70kDa的免疫活性复合物在急性细菌感染患者的体液中被检测到；在与损伤，创伤，压力，感染，脑死亡，瘤形成和其他情况相关的急性炎症反应过程中，IL-6被快速诱导产生；检测创伤患者的IL-6浓度可以预测更多的手术应激的后期并发症，或者指示漏诊或并发症；入住ICU的患者的血清或血浆中IL-6的连续测量，显示可用于评估SIRS（全身炎症反应综合征），脓毒症和感染性休克的严重程度，并预测这些患者的预后； IL-6也可用作早期预警指标用于检测新生儿败血症；IL-6在慢性炎症中也起作用，例如类风湿关节炎。

降钙素原（PCT）是由116个氨基酸组成的激素原，分子量大约为12.7 kD；PCT由神经内分泌细胞（包括甲状腺、肺和胰腺组织的C细胞）表达，经酶切分解为（未成熟）降钙素、羧基端肽和氨基端肽。健康人血中仅含有少量的PCT；已发现细菌感染后PCT会明显升高。动物模型试验显示机体发生脓毒血症时，多种组织均可能表达PCT；脓毒血症患者体内的PCT只含有114个氨基酸，缺少氨基末端的Ala-Pro；PCT水平升高见于细菌性脓毒血症，尤其是重症脓毒血症和感染性休克；PCT可作为脓毒血症患者的预后指标；它也是急性重症胰腺炎及其主要并发症的可靠指标；对于社区获得性呼吸道感染和空调诱导性肺炎患者，PCT可作为抗生素选择以及疗效判断的指标。

血清淀粉样蛋白A（SAA）蛋白质包含一个小分子量的（12-14kDa，104-112个氨基酸残基）家族，是在脊椎动物中高度保守的差异表达的蛋白质； SAA蛋白参与急性期反应；这些反应是早期针对炎症的直接的宿主反应；在急性期，循环SAA水平增加100-1000倍，浓度达到每毫升1毫克； SAA还涉及几种疾病状态，包括类风湿性关节炎，动脉粥样硬化，AA淀粉样变性和冠状动脉疾病；肝脏是SAA合成的主要部位，肝外表达也有报道；人类SAA基因家族定位于11号染色体；在人体中，已经鉴定了四种SAA基因和三种蛋白质产物：人类SAA1和SAA2被指定为急性期SAA（A-SAA）同种型；而SAA4是组成表达型的，而SAA3是假基因；A-SAA属于一类急性期蛋白，这一类型中还包括C-反应蛋白（CRP），触珠蛋白，血浆铜蓝蛋白，补体成分C3和C4，α1-酸性糖蛋白，α1-蛋白酶抑制剂和纤维蛋白原。在人体中，CRP和SAA都是在急性期合成的；而在小鼠中，SAA是主要的急性期蛋白质。

作为炎症反应急性期的蛋白，C-反应蛋白、降钙素原、白细胞介素-6、血清淀粉样蛋白A在感染的早期和炎症的发展过程中有重要的辅助诊断意义；同时，在其它疾病状态中，这也标志物也会出现可测量的明显升高；因此，这些标志物的联合检测是十分有意义的；目前还没有试剂能够同时检测这四种标志物，临床上需要分开进行，甚至需要使用不同的检测方法的试剂进行，如降钙素原、白细胞介素-6使用免疫层析或者化学发光的方法，同时C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A使用免疫比浊的方法进行检测。即使是同样的检测方法，这四种标志物的检测也大部分需要分开进行，或者需要成本较高的全自动设备的配合。

技术实现要素：
：

本实用新型的目的是提供一种使用操作简单、检测过程快速、联合检测效率高的一种的免疫层析联合检测卡。

上述的目的通过以下的技术方案实现：

一种的免疫层析联合检测卡，其组成包括:塑料外壳，所述的塑料外壳的底部开有一号试纸槽和二号试纸槽，所述的一号试纸槽内放置试纸条一，所述的二号试纸槽内放置试纸条二，所述的塑料外壳的顶部开有一号进样孔、二号进样孔、一号检测窗口、二号检测窗口，所述的一号进样孔对应所述的一号试纸槽，所述的二号进样孔对应所述的二号试纸槽，沿着所述的一号进样孔和所述的二号进样孔检测降钙素原、白介素6、血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的试纸条一包括一号PVC板，所述的一号PVC板上放置一号硝酸纤维素膜，所述的一号硝酸纤维素膜上放置一号标记物垫，所述的一号标记物垫上放置一号样品垫，所述的一号硝酸纤维素膜上放置一号吸水纸。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的试纸条二包括二号PVC板，所述的二号PVC板上放置二号硝酸纤维素膜，所述的二号硝酸纤维素膜上放置二号标记物垫，所述的二号标记物垫上放置二号样品垫，所述的二号硝酸纤维素膜上放置二号吸水纸。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的一号标记物垫上的标记物为降钙素原抗体标记物和白介素6抗体标记物，所述的一号硝酸纤维素膜上分别包被有降钙素原抗体T1检测线、白介素6抗体T2检测线、二抗抗体C1质控线。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的二号标记物垫上的标记物为血清淀粉样蛋白A抗体标记物和C-反应蛋白抗体标记物，所述的二号硝酸纤维素膜上分别包被有血清淀粉样蛋白A抗体T3检测线、C-反应蛋白抗体T4检测线、二抗抗体C2质控线。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，一号标记物垫和二号标记物垫的材质为玻璃纤维素膜、聚酯或无纺布中的一种，抗体标记物上标记的示踪物为胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球中的一种或组合，胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球的含量分别为0.00005mg-0.05mg。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，二抗抗体C1质控线和二抗抗体C2质控线为针对胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球抗体的二抗，为抗鼠、抗羊、抗兔、抗鸡的二抗的一种或组合。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的一号硝酸纤维素膜和所述的二号硝酸纤维素膜上包被的四种抗体和二抗的含量分别为0.0001mg-0.01mg。

所述的一种的免疫层析联合检测卡，试纸条一和试纸条二的宽度为0.2cm-0.8cm，长度为5.5cm-10cm。

有益效果：

1.本实用新型能够将用于感染检测的的多个项目的整合在一种检测试剂中，提高了检测的效率，减少了浪费，方便灵活。

本实用新型降低了一种试剂结果由于非感染因素导致的升高产生的误判，通过方便快速的联合检测提升了临床应用的判定效率。一定程度上降低了人力、设备和时间成本。

附图说明：

附图1是本产品的结构示意图。

附图2是本产品检测卡的俯视图。

具体实施方式：

下面将结合本实用新型的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。

实施例1：

一种的免疫层析联合检测卡，其组成包括:塑料外壳1，所述的塑料外壳的底部开有一号试纸槽2和二号试纸槽3，所述的一号试纸槽内放置试纸条一4，所述的二号试纸槽内放置试纸条二5，所述的塑料外壳的顶部开有一号进样孔6、二号进样孔7、一号检测窗口24、二号检测窗口25，所述的一号进样孔对应所述的一号试纸槽，所述的二号进样孔对应所述的二号试纸槽，沿着所述的一号进样孔和所述的二号进样孔检测降钙素原、白介素6、血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白。

实施例2：

实施例1所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的试纸条一包括一号PVC板8，所述的一号PVC板上放置一号硝酸纤维素膜9，所述的一号硝酸纤维素膜上放置一号标记物垫10，所述的一号标记物垫上放置一号样品垫11，所述的一号硝酸纤维素膜上放置一号吸水纸12。

实施例3：

实施例1所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的试纸条二包括二号PVC板13，所述的二号PVC板上放置二号硝酸纤维素膜14，所述的二号硝酸纤维素膜上放置二号标记物垫15，所述的二号标记物垫上放置二号样品垫16，所述的二号硝酸纤维素膜上放置二号吸水纸17。

实施例4：

实施例2所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的一号标记物垫上的标记物为降钙素原抗体标记物和白介素6抗体标记物，所述的一号硝酸纤维素膜上分别包被有降钙素原抗体T1检测线18、白介素6抗体T2检测线19、二抗抗体C1质控线20。

实施例5：

实施例3所述的一种的免疫层析联合检测卡，所述的二号标记物垫上的标记物为血清淀粉样蛋白A抗体标记物和C-反应蛋白抗体标记物，所述的二号硝酸纤维素膜上分别包被有血清淀粉样蛋白A抗体T3检测线21、C-反应蛋白抗体T4检测线22、二抗抗体C2质控线23。

实施例6：

实施例2或3所述的一种的免疫层析联合检测卡，一号标记物垫和二号标记物垫的材质为玻璃纤维素膜、聚酯或无纺布中的一种，抗体标记物上标记的示踪物为胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球中的一种或组合，胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球的含量分别为0.00005mg-0.05mg。

实施例7：

实施例4或5所述的一种的免疫层析联合检测卡，二抗抗体C1质控线和二抗抗体C2质控线为针对胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球抗体的二抗，为抗鼠、抗羊、抗兔、抗鸡的二抗的一种或组合。

实施例8：

实施例2或3所述的一种的免疫层析联合检测卡，一号硝酸纤维素膜和二号硝酸纤维素膜上包被的四种抗体和二抗的含量分别为0.0001mg-0.01mg。

实施例9：

实施例1所述的一种的免疫层析联合检测卡，试纸条一和试纸条二的宽度为0.2cm-0.8cm，长度为5.5cm-10cm。

实施例10：

上述实施例所述的一种的免疫层析联合检测卡，由试纸条一、试纸条二和塑料外壳组成，试纸条由一号PVC板和二号PVC板、样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜、吸水纸组成。试纸条一中，标记物为降钙素原抗体标记物和白介素6抗体标记物，硝酸纤维素膜上分别包被有降钙素原抗体（T1检测线）、白介素6抗体（T2检测线）、二抗抗体（C1质控线）。试纸条二中，标记物为血清淀粉样蛋白A抗体标记物和C-反应蛋白抗体标记物，硝酸纤维素膜上分别包被有血清淀粉样蛋白A抗体（T3检测线）、C-反应蛋白抗体（T4检测线）、二抗抗体（C2质控线）。试纸条一和试纸条二放入塑料外壳的两个试纸槽中，分别有塑料外壳上的两个进样孔加样，同时检测降钙素原、白介素6、血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白。本联合检测卡具有使用操作简单、检测过程快速、联合检测效率高的特点。

实施例11：

上述实施例所述的一种的免疫层析联合检测卡，免疫层析联合检测卡的制备；使用胶体金标记四种标记用抗体，溶解于缓冲液中，具体为：蔗糖 2g/L，BSA 0.5g/L，20mM磷酸盐缓冲液溶液，pH ＝ 7.4；溶解浓度为2ug/ml；降钙素原、白介素6混合均匀涂布于玻璃纤维素垫上；血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白混合均匀涂布于另一玻璃纤维素垫上；烘干过夜后切割。

在一号PVC板上的硝酸纤维素膜的检测线T1和检测线T2、质控线C1位置上分别喷涂降钙素原抗体、白介素6抗体和二抗；在二号PVC板上的硝酸纤维素膜的检测线T3和T4、质控线C2位置上分别喷涂血清淀粉样蛋白A抗体、C-反应蛋白抗体和二抗；喷涂溶液的浓度为 1mg/ml，喷涂量为1ul/cm 。

将样品垫和吸水纸材切割后，与标记物垫一同粘贴在一号PVC板和二号PVC板上。

将粘贴好的一号PVC板和二号PVC板切割成试纸条，并放入塑料外壳试纸槽中，压紧塑料外壳。

将装好的检测卡与干燥剂一同封装，储存待用。

实施例12：

上述实施例所述的一种的免疫层析联合检测卡，由试纸条一、试纸条二和塑料外壳组成，试纸条由PVC板、样品垫、标记物垫、硝酸纤维素膜、吸水纸组成。

所述的塑料外壳具有两个放置试纸的槽和与其对应的两个进样孔，试纸条一和试纸条二放入两个试纸槽中，分别由塑料外壳上的两个进样孔加样，同时检测样本中的降钙素原、白介素6、血清淀粉样蛋白A和C-反应蛋白。试纸条的宽度为0.2cm-0.8cm，长度为5.5cm-10cm。

优选地，标记物垫的垫材质为玻璃纤维素膜、聚酯或无纺布中的一种。

优选地，抗体标记物上标记的示踪物为胶体金、荧光素、荧光微球、彩色微球中的一种或组合，更加优选地，示踪物为荧光素、荧光微球中的一种或组合。

所述的试纸条一中，标记物为降钙素原抗体标记物和白介素6抗体标记物，硝酸纤维素膜上分别包被有降钙素原抗体（T1检测线）、白介素6抗体（T2检测线）、二抗抗体（C1质控线），优选地，抗体标记物的含量分别为0.00005mg-0.05mg，二抗抗体为针对四种标记物抗体的二抗，为抗鼠、抗羊、抗兔、抗鸡的二抗的一种或组合，硝酸纤维素膜上包被的四种抗体和二抗的含量分别为0.0001mg-0.01mg。

所述的试纸条二中，标记物为血清淀粉样蛋白A抗体标记物和C-反应蛋白抗体标记物，硝酸纤维素膜上分别包被有血清淀粉样蛋白A抗体（T3检测线）、C-反应蛋白抗体（T4检测线）、二抗抗体（C2质控线），优选地，抗体标记物的含量分别为0.00005mg-0.05mg，二抗抗体为针对四种标记物抗体的二抗，为抗鼠、抗羊、抗兔、抗鸡的二抗的一种或组合，硝酸纤维素膜上包被的四种抗体和二抗的含量分别为0.0001mg-0.01mg。

本产品实用到的所有试剂、材料均为市售商品，较容易获得，如抗体C-反应蛋白和白细胞介素-6、二抗可在Meridian Life Science公司获得，如抗体降钙素原和血清淀粉样蛋白A可在Hytest公司获得，如荧光素和荧光微球可在LIFE公司获得，如其它材料全部可在MILLIPORE公司获得，如其它试剂全部可在Sigma公司获得，或者分别在不同公司获得。

本产品所述的免疫层析联合检测卡可由如下步骤制得：

将用于标记的抗体分别与示踪物标记结合，涂布于标记物垫材上，干燥后切割。

将硝酸纤维素膜粘贴在PVC板（一号PVC板和二号PVC板）上，将用于包被的抗体分别包被在硝酸纤维素膜的相应位置上，并干燥。

将样品垫和吸水纸材切割后，与标记物垫一同粘贴在PVC板上。

将粘贴好的PVC板切割成试纸条，并放入塑料外壳试纸槽中，压紧塑料外壳。

将装好的检测卡与干燥剂一同封装，储存待用。