一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡的制作方法

本发明涉及检测卡技术领域，尤其涉及一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡。

背景技术：

在奶牛的繁育过程中,奶牛的早期妊娠诊断非常重要。早孕因子(earlypregnancyfactor,epf)是目前所知最早确认妊娠的生物化学标志物之一,是显示胚胎成活力的敏感标志。尿液中早孕因子的检测可以预测胚胎的形成,监测胎儿生长状态,检测胚胎的早期消失。如果能在奶牛上利用epf进行早期妊娠诊断,可以在配种后很短的时间内鉴别奶牛是否受孕,此技术缩短产犊间隔,节约生产成本,提高奶牛的繁殖率,同时也有利于育种员及时掌握配种情况,在实际生产中具有重要意义。本研究运用基因工程技术克隆奶牛epf基因,构建原核表达载体,获得奶牛早孕因子重组蛋白,然后用纯化的早孕因子重组蛋白免疫小白鼠，获得奶牛早孕因子配对单抗，依此研发成功奶牛早孕因子快速检测卡。

胶体金免疫层析技术是一种将胶体金标记技术和免疫检测技术等多种方法结合在一起的固相标记免疫监测技术。胶体金技术具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、结果判断直观等优点,因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检测和大面积普查等,具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。

技术实现要素：

本发明提供了一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡，旨在解决上述问题。

根据本申请实施例提供的一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡，包括壳体和试纸条，所述壳体包括上壳体和下壳体，所述上壳体和所述下壳体形成容纳所述试纸条的容纳腔；所述试纸条包括底板、样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸；所述样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次设置在所述底板上；所述硝酸纤维素膜上包被有奶牛早孕因子蛋白特异性单抗和兔抗鸡igg抗体，所述奶牛早孕因子蛋白特异性单抗，所述兔抗鸡igg抗体为检测t线和为质控c线，所述检测t线和质控c线平行间隔设置；所述金标垫上设有胶体金标的奶牛早孕因子特异性单抗和胶体金标记的鸡igg抗体，所述上壳体上设置有正对所述硝酸纤维素膜设置的观察孔和正对所述样品垫设置的加样孔。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述下壳体上排布有多个定位凸台，所述定位凸台上设置有定位凹槽，所述上壳体与所述定位凹槽匹配的位置处设置有插入所述定位凹槽的定位柱。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述下壳体的底面设有放置所述试纸条的卡合槽，所述卡合槽包括支撑筋和至少一组卡壁组；所述底板放置于所述支撑筋上，所述卡壁组包括间隔设置有两个卡壁，所述间隔大于所述试纸条的宽度。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述上壳体与所述吸水纸相对的位置处设置有至少一个定位针部，所述定位针部与所述吸水纸抵接。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述定位凹槽为正方形凹槽，所述定位柱内切于所述正方形凹槽。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述加样孔上靠近所述样品垫的一端与所述样品垫抵接。

在本发明的快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡中，所述样品垫为玻璃纤维。

本申请实施例提供的技术方案可以包括以下有益效果：本申请设计了一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡，本申请通过观察检测t线和质控c线就可以预测奶牛是否怀孕，检测速度快，灵敏度高；若检测t线出现一条红色的条带，就表明该奶牛体内有较高的早孕因子含量，说明该头奶牛已经怀孕；若检测t线不出线就表明该奶牛没有怀孕。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明实施例的试纸卡的结构示意图；

图2是本发明实施例的试纸卡的剖面图；

图3是本发明实施例的试纸卡的部分结构示意图；

图4是本发明实施例的上壳体的结构示意图。

标号说明:

10、壳体；11、上壳体；111、观察孔；112、加样孔；113、定位柱；114、定位针部；115、定位筋；12、下壳体；121、定位凸台；1211、定位凹槽；122、卡合槽；1221、支撑筋；1222、卡壁组；20、试纸条；21、底板；22、样品垫；23、金标垫；24、硝酸纤维素膜；241、检测t线；242、质控c线；25、吸水纸。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

还应当理解，在此本发明说明书中所使用的术语仅仅是出于描述特定实施例的目的而并不意在限制本发明。如在本发明说明书和所附权利要求书中所使用的那样，除非上下文清楚地指明其它情况，否则单数形式的“一”、“一个”及“该”意在包括复数形式。

还应当进一步理解，在本发明说明书和所附权利要求书中使用的术语“和/或”是指相关联列出的项中的一个或多个的任何组合以及所有可能组合，并且包括这些组合。

请参照图1-图4所示本发明公开了一种快速检测奶牛早孕因子的检测试纸卡，壳体10和试纸条20，试纸条20放置在壳体10内。具体地壳体10包括上壳体11和下壳体12，上壳体11和下壳体12形成容纳试纸条20的容纳腔。试纸条20包括底板21、样品垫22、金标垫23、硝酸纤维素膜24和吸水纸25。样品垫22、金标垫23、硝酸纤维素膜24和吸水纸25依次设置在底板21上。在硝酸纤维素膜24上包被有奶牛早孕因子特异单抗和兔抗鸡igg抗体。其中奶牛早孕因子特异单抗为检测t线241，兔抗鸡igg抗体为质控c线242，检测t线241和质控c线242平行间隔设置。在金标垫上设有胶体金标的奶牛早孕因子特异性单抗和胶体金标记的鸡igg抗体。在上壳体11上设置有观察孔111和加样孔112，观察孔111正对硝酸纤维素膜24设置，加样孔112正对样品垫22设置。底板的材质可以选择pvc材料。

在使用本申请的检测试纸卡时，将待检样本100μl加入到样品孔后，与金标垫23上的奶牛早孕因子单抗胶体金复合物沿层析膜移动。若待检血样本中存在奶牛早孕因子时，与金垫上胶体金标记的奶牛早孕因子单抗结合，早孕因子-胶体金标记的早孕因子单抗结合物继续沿层析膜移动，当流经检测t线241时，早孕因子-胶体金标记的早孕因子单抗结合物被固定在硝酸纤维素膜24上的检测t线241上的早孕因子配对单抗捕获，形成“早孕因子配对单抗-早孕因子蛋白抗原-胶体金标记的早孕因子单抗”复合物，由于胶体金标记的早孕因子单抗上的胶体金颗粒聚集而显示红色线条，形成的“早孕因子配对单抗-早孕因子蛋白抗原-胶体金标记的早孕因子单抗”复合物越多，颜色就会逐渐变深，只要达到肉眼可见的线条时就表明奶牛体内有足够量的早孕因子，已经怀孕。如果检测线t线没有线条，就表明还没有怀孕。

请参照图3和图4所示，在一个可选的实施例中，在下壳体12上排布有多个定位凸台121，在每个定位凸台121上均设置有定位凹槽1211，在上壳体11与定位凹槽1211匹配的位置处设置有定位柱113，定位柱113的数量与定位凸台121的数量相同，定位柱113插入到定位凹槽1211中，将下壳体12与上壳体11安装在一起。在本实施例中，定位凸台121和定位柱113的数量设置为6个。

在一个可选的实施例中，定位凹槽1211为正方形凹槽，定位柱113内切于定位凹槽1211，在安装上壳体11时，将定位柱113插入到定位凹槽1211中，通过此结构使得定位柱113的尺寸小于定位凹槽1211的尺寸，方便了定位柱113插入到定位凹槽1211中，提升了安装的效率。

在一个可选的实施例中，下壳体12的底面设置有放置试纸条20的卡合槽122，卡合槽122包括支撑筋1221和卡壁组1222，卡壁组1222至少设置有一组，卡壁组1222包括两个间隔设置有卡壁，在放置试纸条20时，将试纸条20的底板21放置在支撑筋1221上，并且试纸条20放置在两个卡壁之间，两个卡壁起到了定位的作用，两个卡壁沿着壳体宽度的方向间隔设置，所以两个卡壁定位试纸条20的宽度方向。在下壳体12上还设置有定位试纸条20长度方向的定位壁，这两个定位壁之间的长度大于试纸条20的长度，以此方式来定位试纸条20的长度方向。

在一个可选的实施例中，在上壳体11与吸水纸25相对的位置处设置有至少一个定位针部114，在安装好上壳体11与下壳体12后，定位针部114与吸水纸25抵接，以此方式进一步定位试纸条20。在一些较优的实施例中，在上壳体11正对样品垫22对应的位置处设置有定位筋115，以此方式在试纸条20长度方向上增加以两个定位点，进一步增加了试纸条20的稳定性。样品垫22为玻璃纤维。

请再次参照图1和图2所示，在一个可选的实施例中，加样孔上靠近样品垫的一端与样品垫抵接。以此方式方便用户透过加样孔向样品垫添加样品，使得样品直接加入到样品垫上。具体地，加样孔向样品垫的一侧凸出，使得加样孔与与样品垫抵接。在一些较优的实施例中，在加样孔上设置有导向曲面116，此结构方便用户添加样品。

金标垫23上有与胶体金结合的奶牛早孕因子特异性单抗，和样本中的早孕因子抗原结合后，与硝酸纤维素膜24上的检测t线241结合显色。金标垫23上设置有于胶体金结合的鸡igg抗体，其用来和硝酸纤维素膜24上的质控c线242结合显色。上述的胶体金颗粒大小为25nm。

其中，上述的胶体金颗粒溶液的制备方法如下：

(1)配制1％的haucl4及1％的柠檬酸三钠。

(2)取300ml纯水加热到沸腾，再加入6ml的haucl4，加热5分钟并搅拌混匀。

(3)快速加入9.6ml的柠檬酸三钠，继续加热10分钟。

(4)关掉电源，自然冷却待用。

胶体金标记的奶牛早孕因子特异性单抗是将上述胶体金颗粒和奶牛早孕因子特异性单抗通过物理吸附链接而成，其具体步骤如下：

(1)奶牛早孕因子特异性单抗于0.01m的pbs中透析过夜；

(2)每毫升胶体金溶液中加入8μl0.02m的k2co3，调节ph；

(3)缓慢加入终浓度为10μg/ml的奶牛早孕因子特异性单抗，磁力搅拌器搅拌混匀40-60min；

(4)加入终浓度为1％的bsa，搅拌混匀40min。

(5)两步离心纯化金标抗原：5000r/min离心20min，收集管底沉淀，同时将上清再8500r/min离心30min，收集管底沉淀。所收集的沉淀用复溶液，按照标记胶体金体积的1/8重悬复溶。

胶体金标记的鸡igg抗体是将胶体金颗粒和鸡igg抗体通过物理吸附连接而成，其具体步骤如下：

鸡igg抗体于0.01m的pbs中透析过夜；

(2)每毫升胶体金溶液中加入10μl0.02m的k2co3，调节ph；

(3)缓慢加入终浓度为10μg/ml的鸡igg抗体，磁力搅拌器搅拌混匀40-60min；

(4)加入终浓度为1％的bsa，搅拌混匀40min。

(5)两步离心纯化金标抗体：5000r/min离心20min，收集管底沉淀，同时将上清再8500r/min离心30min，收集管底沉淀。所收集的沉淀用复溶液，按照标记胶体金体积的1/8重悬复溶，两种金标液按1：1的比例充分混匀后按30ml的量铺一张金垫，金垫宽度为25cm，长度为30cm，于干燥间过夜烘干。

(6)所用的复溶液为0.05mol/ltris-cl，ph8.0；加入1％牛血清白蛋白，2％的蔗糖，0.15％的吐温-20。

在本实施例中，硝酸纤维素膜24上的检测线t线上包被的是1.0mg/ml的奶牛早孕因子特异性单抗，质控线c线上包被的是0.5mg/ml兔抗鸡igg抗体。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到各种等效的修改或替换，这些修改或替换都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以权利要求的保护范围为准。