一种核酸检测装置的制作方法

本实用新型涉及核酸检测技术领域，具体涉及一种核酸检测装置，即一种基于y型dna纳米结构的microrna快速检测的微流控芯片。

背景技术：

由于microrna与疾病的发生发展密切相关，所以microrna作为一种重要的生物诊断标志物，对于肿瘤等疾病的诊断及预后具有重要的参考意义。然而现阶段针对microrna的检测方法多为逆转录pcr，northernblot或者原位杂交等，其操作流程繁琐，容易引入污染使得结果不够准确，且需要有经验的专业人员进行操作，难以在临床诊断中实际开展，尤其是在中小医院由于经营规模有限，难以承担检测过程中所需的人力及设备成本。

技术实现要素：

本实用新型的目的在于提供一种核酸检测装置。本实用新型所述装置能够实现microrna检测的封闭操作，减少操作流程，避免外界干扰的引入，降低对仪器及人员的要求，便于在中小医院开展microrna检测技术

本实用新型提供了一种核酸检测装置，所述微流控芯片包括芯片底层(7)和与所述芯片底层贴合的玻片(8)；所述芯片底层包括进液通道(1)、反应腔(2)和出液通道(3)；所述反应腔底部修饰有y型核酸探针(6)。

优选的是，所述芯片底层的整体材料为pdms。

优选的是，所述微流控芯片的长度为3～5cm，宽度为1.5～2.5cm，高度为0.5～1cm。

优选的是，所述反应腔(2)的长度为0.6～1.5cm，宽度为0.6～1.5cm，高度为0.2～0.5cm。

优选的是，所述进液通道(1)和所述出液通道(3)的长度独立的为0.5～1.5cm，直径独立的为0.1～0.2cm。

优选的是，所述进液通道(1)的进液口(4)直径为0.15～0.25cm。

优选的是，所述出液通道(3)的出液口(5)直径为0.15～0.25cm。

优选的是，所述y型核酸探针(6)通过化学反应修饰在反应腔底部。

优选的是，所述化学反应包括酰胺化反应。

优选的是，每个所述y型核酸探针(6)的长度为8～12nm。

本实用新型提供了一种核酸检测装置。本实用新型所述装置中的微流控芯片，通过将y型核酸探针固定在反应腔内，能够实现待测microrna的捕获，通过y型核酸探针的设计，保持探针的直立状态，能够提高检测的灵敏度，从而捕获待测microrna产生荧光信号。本实用新型所述装置能够实现microrna检测的封闭操作，减少操作流程，避免外界干扰的引入，降低对仪器及人员的要求，便于在中小医院开展microrna检测技术。

附图说明

图1为本实用新型提供的核酸检测装置结构图。

具体实施方式

本实用新型提供了一种核酸检测装置，所述装置包括微流控芯片，所述微流控芯片包括芯片底层7和与所述芯片底层贴合的玻片8；所述芯片底层包括进液通道1、反应腔2和出液通道3；所述反应腔底部修饰有y型核酸探针6。本实用新型所述核酸检测装置在常温下即可进行。在本实用新型中，所述微流控芯片为两层结构，下层为芯片底层，上层为玻片，两层优选贴合而成，本实用新型所述进液通道1和出液通道3和反应腔2都是做在芯片底层表面上的，玻片相当于是个盖，用于密封。y型探针与芯片底层的反应腔底部连接。

本实用新型所述核酸检测装置如图1所示。其中，1为进液通道，2为反应腔(修饰有y型核酸探针的部分)，3为出液通道，4为进液口，5为出液口，6为y型核酸探针，7为芯片底层，8为玻片。

在本实用新型中，所述芯片底层的整体材料为pdms，聚二甲基硅氧烷。本实用新型对所述pdms的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售pdms即可。

在本实用新型中，所述微流控芯片的长度为3～5cm，优选为4cm，宽度为1.5～2.5cm，优选为2cm，高度为0.5～1cm，优选为0.8cm。

在本实用新型中，所述反应腔2的长度为0.6～1.5cm，优选为1cm，宽度为0.6～1.5cm，优选为1cm，高度为0.2～0.5cm，优选为0.3cm。

在本实用新型中，所述进液通道1和所述出液通道3的长度独立的为0.5～1.5cm，优选为1cm，直径独立的为0.1～0.2cm，优选为0.1cm。

在本实用新型中，所述进液通道1的进液口4直径为0.15～0.25cm，优选为0.2cm。

在本实用新型中，所述出液通道3的出液口5直径为0.15～0.25cm，优选为0.2cm。

在本实用新型中，所述y型核酸探针6通过化学反应修饰在反应腔底部。在本实用新型中，所述化学反应优选包括酰胺化反应(氨基和羧基的缩合反应)。在本实用新型中，每个所述y型核酸探针6的长度为8～12nm，更优选为10nm。本实用新型对所述y型核酸探针的来源没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规y型核算探针制备方法进行制备即可。

本实用新型对所述微流控芯片的制备方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规芯片制备方法即可。具体的如：采用标准软刻蚀工艺加工，即在玻璃基板上旋涂光胶，继而遮蔽含有微通道图形的掩膜，曝光及显影后得到阳模。聚二甲基硅氧烷(pdms)基质/固化剂(常规市售即可)按10/1比例混合均匀后真空脱气15min，再将得到的pdms预聚物浇注于经硅烷化处理后的阳模上，置于100℃干燥箱中热处理15min，在含有光刻胶结构的基板上浇注pdms，获得微结构。将三条互补的dna序列95℃变性5min后缓慢降温至室温，组装成y型dna探针，其可以在反应腔表面维持相对直立的状态，利于捕获待测的microrna。在无菌条件下，将反应腔表面用无水乙醇和超纯水清洗后，置等离子清洗机中处理1min，产生硅羟基，同时，等离子处理后的玻片立即与pdms层贴合，向键合好的芯片中加入aptms无水乙醇溶液，使其发生硅烷化反应，清洗后烘烤30min得到修饰有氨基的芯片。向合成好的浓度为10μm的y型核酸探针中加入edc/nhs活化羧基后，将其缓慢加入芯片至淹没反应腔底部，使其固定在反应腔表面，得到完整芯片。本实用新型所述装置的使用方法优选为：将待测microrna加入芯片中，37℃孵育1小时后清洗两次，将芯片置于荧光显微镜下观察结果。

下面结合具体实施例对本实用新型所述的一种核酸检测装置做进一步详细的介绍，本实用新型的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

依据mir-25设计y型核酸探针，序列见表1，将三条分别标记有荧光基团cy3和猝灭基团bhq-1的dna序列95℃变性后缓慢降至室温，然后利用edc/nhs处理后使羧基活化，将10μm活化后的探针缓慢加入微流控芯片中，轻摇15min通入pbs清洗，然后将待测mir-25加入芯片中，37℃孵育1小时后清洗两次，将芯片置于荧光显微镜下观察结果。可以观察到反应区发出明显的红色荧光。

表1mir-25基因及y型核酸探针合成用序列

以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本实用新型的保护范围。