本发明涉及生物试剂技术领域，特别涉及一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液及复溶方法。
背景技术：
毒性弥漫性甲状腺肿是一种自身免疫性疾病，临床表现并不限于甲状腺，而是一种多系统的综合征，包括高代谢症候群、弥漫性甲状腺肿、眼征、皮损和甲状腺肢端病。由于多数患者同时有高代谢症和甲状腺肿大，故称为毒性弥漫性甲状腺肿，又称graves病，亦有弥漫性甲状腺肿伴功能亢进症、突眼性甲状腺肿、原发性甲状腺肿伴功能亢进症、basedow病等之称。甲状腺以外的表现为浸润性内分泌突眼，可以单独存在而不伴有高代谢症。
促甲状腺激素受体(thyrotropinreceptor，tshreceptor，tshr)是一种接受促甲状腺激素(thyrotropin)信号，刺激细胞生成甲状腺激素(t4)和三碘甲状腺激素(t3)的跨膜受体。tshr是膜内在蛋白中g蛋白偶联受体超家族的一员，与gs蛋白相连接。
在体外诊断技术领域，促甲状腺素受体被用于trab(促甲状腺素受体抗体)的诊断测定，对graves病的鉴别诊断具有重要的价值。由于促甲状腺素受体在高于冷冻温度下很不稳定，液态基质中很难长时间保存，常采用冻干的形式延长促甲状腺素受体的保存期限。由于受促甲状腺素受体在液态基质中不稳定，使用含促甲状腺素受体的液态试剂构建trab检测试剂盒，严重缩短试剂盒效期，对于试剂盒开发厂商而言，大大增加成本，降低经济效益，且不利于客户使用。
针对以上促甲状腺素受体在高于冷冻温度下稳定性较差，液态基质中很难长时间保存，用于构建trab检测试剂盒效期较短问题，发明促甲状腺素受体冻干品的溶解液的制备方法，不仅满足使促甲状腺素受体冻干品在较短时间内复溶至澄清透亮，而且大大延长促甲状腺素受体在高于冷冻温度下的保存时间，因此能够显著延长trab检测试剂盒开封后的使用效期，同时降低成本，满足客户方便使用。目前还未见有关促甲状腺素受体冻干品试剂的研究及产品。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明提供了一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液及复溶方法。该溶解液对促甲状腺素受体冻干品进行复溶，不仅可在较短时间内溶解得到澄清透亮的液态试剂，且得到的含有促甲状腺素受体的液态试剂可在约2-8℃稳定至少4周，约20～25℃稳定至少2周。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液，该溶解液由c2-c6多元醇、烷基磺酸钠、防腐剂和缓冲液组成。
作为优选，以质量百分含量计，该溶解液中各组分的含量为：c2-c6多元醇2％～60％，烷基磺酸钠0.01％～2％，防腐剂0.01％～1.0％，缓冲液补足至100％。
优选地，以质量百分含量计，该溶解液中各组分的含量为：c2-c6多元醇5％～50％，烷基磺酸钠0.1％～1.0％，防腐剂0.1％～0.2％，缓冲液补足至100％。
优选地，以质量百分含量计，该溶解液中各组分的含量为：c2-c6多元醇10％～50％，烷基磺酸钠0.5％，防腐剂0.12％，缓冲液补足至100％。
更优选地，以质量百分含量计，该溶解液中各组分的含量为：c2-c6多元醇10％，烷基磺酸钠0.5％，防腐剂0.12％，缓冲液补足至100％。
作为优选，c2-c6多元醇为乙二醇、丙二醇、甘油、赤藓醇、木糖醇、核糖醇、山梨醇、甘露醇中的一种或几种的组合。
作为优选，烷基磺酸钠为1-丁烷磺酸钠、1-戊烷磺酸钠、1-己烷磺酸钠、1-庚烷磺酸钠、1-辛烷磺酸钠、1-壬烷磺酸钠、1-癸烷磺酸钠中的一种或几种的组合。
作为优选，缓冲液为pbs、bis-tris-propane、bis-tris、hepes或tris中的一种，其ph值为6.0～7.5。
作为优选，防腐剂为bronidox、叠氮钠、p-300、硫柳汞中一种或几种的组合。
本发明还提供了一种促甲状腺素受体冻干品的复溶方法，采用上述溶解液溶解促甲状腺素受体冻干品。
本发明提供了一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液及复溶方法。该溶解液由c2-c6多元醇、烷基磺酸钠、防腐剂和缓冲液组成。本发明具有的技术效果为：
本发明将c2-c6多元醇与烷基磺酸钠组合得到的特制溶解液对促甲状腺素受体的冻干品进行复溶，不仅可在较短时间内溶解得到澄清透亮的液态试剂，且得到的含有促甲状腺素受体的液态试剂可在约2-8℃稳定至少4周，约20～25℃稳定至少2周。含有促甲状腺素受体的冻干品及溶解液用于构建trab检测试剂盒，可满足试剂盒开封后载机至少4周。
具体实施方式
本发明公开了一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液及复溶方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明涉及一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液的制备方法，还涉及用于检测样本(如患者血清)中促甲状腺素受体抗体(trab)的方法、试剂盒，在一些实施例中，本发明更具体的涉及促甲状腺素受体液态试剂的制备方法以及在高于冷冻温度下的储存稳定性。在一些实施例中，本发明更具体的涉及提高trab检测试剂盒的效期稳定性。
针对促甲状腺素受体在高于冷冻温度下稳定性较差，液态基质中很难长时间保存，用于构建trab检测试剂盒效期较短的问题，本发明所要解决的技术问题在于提供一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液的制备方法，本发明所采取的技术方案是：
在液体介质中将c2-c6多元醇和阴离子表面活性剂组合。其中所述c2-c6多元醇和阴离子表面活性剂的量可以使得冻干品中促甲状腺素受体经所述溶解液复溶后在约2℃～25℃的温度下维持稳定和活性。
根据本发明所述原理的一些实施例涉及包含ph约6.0-7.0的缓冲液、按重量约2％-60％的c2-c6多元醇、按重量约0.01％-2％的烷基磺酸钠和按重量约0.01％-1％的防腐剂的组合物。
所述一种促甲状腺素受体冻干品的溶解液，每100ml溶解液中，各组分含量为2-60gc2-c6多元醇、0.01-2g烷基磺酸钠，0.01-0.1g防腐剂，余量为缓冲液。
作为优选，溶解液中c2-c6多元醇选自乙二醇、丙二醇、丙三醇(甘油)、赤藓醇、木糖醇、核糖醇、山梨醇、甘露醇中的一种或几种组合。
作为优选，溶解液中烷基磺酸钠选自1-丁烷磺酸钠、1-戊烷磺酸钠、1-己烷磺酸钠、1-庚烷磺酸钠、1-辛烷磺酸钠、1-壬烷磺酸钠及1-癸烷磺酸钠中的一种或几种组合。
所述溶解液中缓冲液的ph约6.0-7.5，各种缓冲液可以用于达到所需的ph并保持介质的ph。作为优选缓冲液包括pbs、bis-tris-propane、bis-tris、hepes或tris。
作为优选，溶解液中防腐剂选自bronidox、叠氮钠、p-300、硫柳汞中一种或几种组合。
由于促甲状腺素受体在高于冷冻温度下半衰期较短，不易保存，虽以冻干形式进行用于长期保存，但仅以纯化水复溶后仍难以在高于冷冻温度下进行长时间保存，更无法满足用于构建具有较长开封效期的trab检测试剂盒。本发明中制备一种含有2％-60％c2-c6多元醇、0.01％-2％的烷基磺酸钠组合物的特制溶解液对促甲状腺素受体的冻干品进行复溶，不仅可在较短时间内溶解得到澄清透亮的液态试剂，且得到的含有促甲状腺素受体的液态试剂可在约2-8℃稳定至少4周，约20-25℃稳定至少2周。含有促甲状腺素受体的冻干品及溶解液用于构建trab检测试剂盒，可满足试剂盒开封后载机至少4周。
多元醇常用于蛋白质的稳定保护剂，例如甘油通过降低水的极性，增加水的粘稠度，减少生物分子的反复冻融达到保护蛋白的作用。在本发明中所提供的溶解液中含有0.01％-2％的烷基磺酸钠，属于阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂主要包括羧酸盐、磺酸盐、硫酸酯盐和磷酸酯盐四大类，功能主要表现在改变液体的表面、液-液界面和液-固界面的性质，常用于石油行业作为分散剂、防锈剂、抗静电剂、乳化降粘剂等；农业改良土壤；建筑业改良混凝土；化妆品行业作乳化剂、增溶剂、润湿剂和活效组分增效剂等。其中，磺酸盐具有较强的表面活性和低温水溶性，主要用作纺织、印染助剂和液体洗涤剂，氯乙烯聚合用乳化剂等。而本发明所述的溶解液，通过在水性介质中组合0.01％-2％的烷基磺酸钠和2％-60％的c2-c6多元醇，复溶促甲状腺素受体冻干品后，产生了既能够非常明显的加快复溶速度，又能够有效地维持促甲状腺素受体在高于冷冻温度下稳定保存的效果。
本发明所提供的溶解液，以复溶促甲状腺素受体冻干品后试剂清澈透亮为复溶完全，本发明溶解液可显著缩短复溶时间从约5min-1.5h缩短至约1-20min，且复溶后试剂仍满足在2-8℃稳定至少4周，20-25℃稳定至少2周。利用本发明方法制备一种含有促甲状腺素受体冻干品及溶解液的试剂用于构建trab检测试剂盒，可满足试剂盒开封前至少1年的效期，开封后载机至少4周。
本发明提供的促甲状腺素受体冻干品的溶解液及复溶方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1～3：促甲状腺素受体冻干品的溶解液的制备方法
表1实施例1-3和对照组溶解液的制备
注：/表示无。
将对照组1-7及实施例1-3溶解液复溶促甲状腺素受体的冻干品，评价不同组复溶外观、复溶时间；复溶后含促甲状腺素受体的液态试剂构建trab检测试剂盒的效价、约2-8℃、约20-25℃及仪器内载机周期。各组重复5次，结果详见表2。
复溶后效价评估方法：利用上述方法构建trab检测试剂盒，平行检测含有一系列用校准品稀释液稀释得到的刺激性促甲状腺素受体抗体浓度0iu/l、2iu/l、5iu/l、10iu/l、20iu/l、40iu/l的校准品，在安图生物全自动化学发光仪a2000plus系统上进行测定，得到各组的发光值，以对照组1衡量实施例1-3的效价。
在高于冷冻温度环境下稳定性的评估方法：将对照组1-7和实施例1-3溶解液复溶促甲状腺素受体的冻干品得到液态试剂，在高于冷冻温度如2-8℃或20-25℃或在仪器中载机，以溶解液复溶促甲状腺素受体冻干品后立即检测得到的校准品信号值为对照，以信号值降幅≤10％视为稳定性较好，以独立5次重复实验得到的信号值均值作比较，结果详见表2。
表2对照组和实施例的评价结果
注：/表示无。
以上结果显示，相比对照组2-4，在实施例1-3所述溶解液中0.5％1-庚烷磺酸钠明显缩短溶解液复溶冻干品时间从约4-8min到约1min；或从15-20min到5-8min，或从约80-90min到约25-30min。
所述溶解液复溶促甲状腺素受体的冻干品后的液态试剂的效价，实施例1-3取得较好结果(校准品信号值相比对照组1变幅≤10％)。
实施例1-3溶解液能够显著改善促甲状腺素受体在液态基质中的保存时间，均可满足约2-8℃稳定至少28d；约20-25℃稳定至少14d；载机周期至少28d。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。