一种瘦肉精三联快速检测卡的制作方法

1.本实用新型涉及免疫化学快速检测技术领域，尤其是涉及一种瘦肉精三联检测卡。


背景技术：

2.瘦肉精是一类药物的统称，任何能够抑制动物脂肪生成，促进瘦肉生长的物质都可以称为“瘦肉精”。能够实现此类功能的物质主要是一类叫做β-受体激动剂(也称β-兴奋剂)的药物，其中较常见的有盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等。
3.盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇进入牲畜体内后能够改变养分的代谢途径，促进动物肌肉生长，尤其是促进骨骼肌蛋白质的合成，加速脂肪的转化和分解，提高牲畜的瘦肉率。所以一些不法商贩为了促进动物生长、提高饲料转化率和动物的瘦肉率而把盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇做为饲料添加剂使用，致使动物体内的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇含量超标。而人们长期食用盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇含量超标的畜肉，会导致身体出现不良反应，严重时甚至危及生命。因此，人们需要提高警惕，对畜类体内的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇含量进行严格监察。
4.目前盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇的检测方法有多种，例如：气相色谱－质谱法、高效液相色谱法、酶联免疫法以及胶体金法。其中，胶体金法因其检测流程简单、成本低等优点而成为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇检测的最主流方法。但是，胶体金检测时有可能存在c线不成立(生产事故等导致)和缺乏质控品的现象。因此，急需一种新型的能保证c线成立(降低无效检测率)和内置质控品的胶体金。


技术实现要素：

5.为了弥补现有技术的不足，本实用新型的目的是提供一种瘦肉精三联快速检测卡。
6.因此，本实用新型一方面提供了一种瘦肉精三联快速检测卡，所述瘦肉精三联快速检测卡包括盒体(1)，盒体(1)包含滴管存放区(2)、质控品存放区(3)、说明书存放区(4)、瘦肉精三联快速检测卡存放区(5)。
7.优选地，本实用新型所述瘦肉精三联快速检测卡存放区(5)存放有50袋瘦肉精三联快速检测卡；所述瘦肉精三联快速检测卡均包括一个盐酸克伦特罗试纸条、一个莱克多巴胺试纸条、一个沙丁胺醇试纸条；所述的盐酸克伦特罗试纸条、莱克多巴胺试纸条、沙丁胺醇试纸条均包括pvc板，在pvc板上按顺序依次固定有样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫；所述盐酸克伦特罗试纸条、莱克多巴胺试纸条、沙丁胺醇试纸条的金标垫分别为胶体金标记盐酸克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体；所述盐酸克伦特罗试纸条、莱克多巴胺试纸条、沙丁胺醇试纸条的硝酸纤维素膜表面均划有检测线和质控线，其中质控线均为兔抗鼠igg与活性蓝混合液，检测线分别为盐酸克伦特罗抗原、莱克多巴胺抗原、沙丁胺醇抗原。
8.优选地，本实用新型所述质控品存放区(3)存放有一支质控品，所述质控品为1.5ml/ 支；所述的质控品为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇混合抗原。
9.优选地，本实用新型所述盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇混合抗原中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇浓度均为20ppb。
10.优选地，本实用新型所述滴管存放区(2)存放有50支滴管。
11.本实用新型在瘦肉精三联检测卡中增加了质控品，一方面为瘦肉精的检测提供实时质控，另一方面方便客户在出现异常结果时的检验，以确定是样品或操作问题还是检测卡本身的问题，方便客户对异常情况的验证。
12.本实用新型在c线位置加入了活性蓝，使c线更均一、更稳定，同时不会对t线造成干扰，降低了由于c金造成的假阳的可能性。当样本跑到c线的时候，c线会有蓝色变成红色 (活性蓝随着液体上移，金标抗体与兔抗鼠igg结合形成红色条带)，同时也进一步检测了检测卡是否失效。另外，在检测卡生产过程中，方便判定是否生产正常、有无生产事故等。
13.本实用新型所提供的瘦肉精三联快速检测卡适用于动物尿液等中瘦肉精的检测，其特异性强、灵敏度高、稳定性好、检测速度快，可用于瘦肉精的筛查。
附图说明
14.图1瘦肉精三联快速检测卡的组装(大板制作)。
15.图2瘦肉精三联快速检测卡内包装成品图，其中c线为蓝色条带。
16.图3瘦肉精三联快速检测卡包装成品模式图，其中1是盒体，2是滴管存放区，3是质控品存放区，4是说明书存放区，5是瘦肉精三联快速检测卡存放区。
17.图4瘦肉精三联快速检测卡检测判定，其中阴性判定时c线和t线均为红色条带；阳性判定时c线为红色条带，t线无条带；无效判定时c线为蓝色条带或无条带，t线为红色条带或无条带。
具体实施方式
18.下面结合附图对本实用新型的较佳实施例进行详细阐述，以使本实用新型的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本实用新型的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例中未进行详细说明的实验方法，通常按照本技术领域常规操作或按照厂商建议的条件进行。实施例中涉及的试剂及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品。
19.实施例1瘦肉精三联快速检测卡的制备
20.1制造用材料pvc底板购自杭州峰航科技有限公司；硝酸纤维素膜购自润和生物医药科技(汕头)有限公司；玻璃纤维素膜购自杭州华润纸业技术开发公司；吸水纸购自杭州峰航科技有限公司；盐酸克伦特罗抗原、莱克多巴胺抗原、沙丁胺醇抗原均购自洛阳佰奥通实验材料中心；盐酸克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体均购自洛阳佰奥通实验材料中心；活性蓝购自上海吉至生化科技有限公司；兔抗鼠igg(1mg/ml)购自北京索莱宝生物科技有限公司。
21.2硝酸纤维素膜与质控品的制备
22.2.1包被缓冲液的配制将1g蔗糖加入到100ml的pbs(0.01mol/l，ph值7.2)中配制成包被缓冲液，0.22μm滤膜过滤除菌，置2～8℃保存备用。
23.2.2质控线(c线)溶液的配制将活性蓝加到超纯水中，配制成1mol/l活性蓝溶液备用。活性蓝溶液与兔抗鼠igg 1:9比例混匀，备用。
24.2.3硝酸纤维素膜的制备将硝酸纤维素膜贴于pvc底板的相应位置，用包被缓冲液将盐酸克伦特罗抗原、莱克多巴胺抗原、沙丁胺醇抗原分别稀释至1mg/ml，调整划膜机的划线位置及高度，划线为t线，即为检测线，t线靠近金标垫端，用质控线(c线)溶液，调整划膜机的划线位置及高度，划线为c线，即为质控线，c线靠近吸收垫，两线距离5～8mm。置37℃烘箱烘干15小时，装入放有干燥剂的铝箔袋中密封，2～30℃保存备用。
25.2.4质控品的制备使用包被缓冲液稀释盐酸克伦特罗抗原、莱克多巴胺抗原、沙丁胺醇抗原，稀释后盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇浓度均为20ppb，定量分装，每支1.5ml， 2～8℃贮存备用。
26.3金标垫的制备
27.3.1胶体金配制取1％的氯金酸水溶液加热，搅拌均匀后加入1％的柠檬酸三钠水溶液煮沸。冷却后备用。加入盐酸克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体(按照1ml金水中加入5μg抗体)反应10分钟，再加入1％封闭剂(含1％bsa的pbs溶液)封闭20分钟。然后离心弃上清液，加入复溶液，震荡均匀。
28.3.2喷金将重悬好的胶体金溶液按照2μl/cm的量，用喷金机喷涂在玻璃纤维素膜上，置37℃烘干16～20小时，铝箔袋封装，置2～30℃保存备用。
29.4样品垫的处理
30.4.1样品垫处理液的配制称取酪蛋白、胆酸钠、表面活性剂s9、乙烯吡咯烷酮(pvp)、tris、proclin 300加到超纯水中溶解，待完全溶解后，混匀，调ph值，再加入超纯水定容，混合均匀后0.22μm微孔滤膜除菌，2～8℃保存备用。
31.4.2将样品垫处理液均匀的涂抹在玻璃纤维素膜上，置37℃烘干16～20小时，铝箔袋封装，置2～30℃保存备用。
32.5瘦肉精三联快速检测卡的组装如图1所示，将样品垫，金标垫，吸水垫裁剪成相应宽度依次粘贴到已粘有硝酸纤维素膜的pvc底板的相应位置，使金标垫、吸水垫分别与硝酸纤维素膜部分接触，样品垫与金标垫部分接触，制成大板。
33.6包装用切条机将大板切成3mm宽的试纸条，装上外壳(图2)，用铝箔袋密封包装，内含试纸条一个，吸管一个，干燥剂一包，2～30℃避光贮存备用，保存期暂定为24个月。
34.7检测卡的组装将检验合格的各检测卡组份按下表组装(图3)
35.组分数量规格瘦肉精三联快速检测卡50袋1组/袋滴管50支1个/袋质控品1支1.5ml/支说明书1份/
36.8检测卡用法与判定
37.8.1用法
38.8.1.1在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。
39.8.1.2从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内尽快地使用。
40.8.1.3将检测卡平放，用滴管吸取待检样品溶液(一般为尿液，也可为组织液)，垂直滴加2-3滴于加样孔中，加样后开始计时。
41.8.1.4结果应在3-5分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
42.8.2判定(图4)
43.8.2.1阴性(-)：两条红色条带出现，表示样品中不含有瘦肉精三联或其浓度低于检测限。
44.8.2.2阳性(+)：检测t线无条带，质控c线为红色条带，表示样品中瘦肉精三联浓度高于检测限。
45.8.2.3无效：质控c线一直是蓝色条带，未变成红色条带；或质控c线没有任何条带，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
46.8.3在对检测有歧义时，可以用质控品进行校正，若质控品检测结果为阴性，则该批检测卡已失效，不能在使用。
47.8.4对同一个样品使用三联检测卡检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇时，均独立按照8.2进行判定。
48.9检测卡使用注意事项
49.9.1检测卡请在保质期内一次性使用；
50.9.2检测时避免阳光直射和电风扇直吹；
51.9.3尽量不要触摸检测卡中央的白色膜面；
52.9.4采样滴管不可混用，以免交叉污染；
53.9.5如果待检样本出现沉淀或浑浊物，请离心后再检测；
54.9.6试验遇到的任何问题，请与供应商联系；
55.9.7若需直接检测标准品，请用混合的阴性猪尿进行配置。
56.10检测卡贮藏与有效期除质控品外的检测卡2～30℃阴凉干燥处保存，有效期为24个月；质控品2～8℃阴凉干燥处保存，有效期为24个月。
57.实施例2瘦肉精三联快速检测卡性能评价
58.1试剂条制备瘦肉精三联快速检测卡，参见实施例1制备，批号分别为批号为210605、 210606、210607。
59.2特异性评价将制备的3批检测卡检测10份盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇均为阴性的样品，结果显示所有样品检测均为阴性。
60.表1特异性检测结果
[0061][0062]
注：“+”表示检测结果为阳性，
“‑”
表示检测结果为阴性。
[0063]
3敏感性检验3批检测卡对不同浓度的瘦肉精三联质控品的检测结果显示(表2)，最低检出限均为3ppb。说明检测卡的敏感性较好。
[0064]
表2敏感性检测结果
[0065][0066][0067]
注：“+”表示检测结果为阳性，
“‑”
表示检测结果为阴性。
[0068]
4重复性评价三批检测卡均按照说明书检测强阳性样品、阳性样品、弱阳性样品和阴性样品，结果见表3。从表可见，3批检测卡检测强阳性样品、阳性样品、弱阳性样品和阴性样品的批内和批间都一致，表明以实验室方法制备的瘦肉精三联快速检测卡具有较好的重复性。
[0069]
表3重复性检测结果
[0070]
[0071][0072]
以上所述仅为本实用新型的实施例，并非因此限制本实用新型的专利范围，凡是利用本实用新型说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本实用新型的专利保护范围内。