一种中链甘油三酯的气质检测方法与流程

1.本发明涉及食品安全化学分析技术领域，尤其是涉及一种中链甘油三酯的气质检测方法。


背景技术：

2.中链甘油三酯即中链脂肪，天然存在于棕榈仁油、椰子油等食品和母乳中，是膳食脂肪的来源之一，主要成分是“辛，癸酸甘油酯”，一般认为，典型的mct是指饱和辛酸甘油三酯或饱和癸酸甘油三酯或饱和辛酸-癸酸混合的甘油三酯，可作为药品、食品或化妆品等生产的原料，以及乳化剂、润滑剂或稳定剂广泛使用。
3.在医学食品中，凡是添加mct的产品，均将mct作为功能成分，对产品功能起到至关重要的作用，然而，医学食品的基质复杂，内部油脂成分较多，在对医学食品中mct的含量进行测定时，需要先提取出医学食品中的总油脂，然后从总油脂中提取出mct，经水解形成脂肪酸和甘油，并对脂肪酸进行甲酯化处理，然后利用气相色谱法测定其甲酯衍生物的含量，从而计算出产品中mct的含量，检测过程极其繁琐、复杂，且检测过程中多步反应的选择与条件控制，将直接影响检测的准确度与重现性。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供一种中链甘油三酯的气质检测方法，该检测方法操作简便、实用性强，实现了中链甘油三酯的非衍生化检测，解决了现有检测方法准确度和重现性低的问题，能够准确有效地测定样品内中链甘油三酯的含量，具有较高的重现性。
5.本发明提供一种中链甘油三酯的气质检测方法，包括以下步骤：
6.s1.样品液的制备：取样品进行预处理，取预处理后的样品加入正庚烷，充分振荡，使其成为乳浊液，取乳浊液于离心管中，进行冷冻离心处理，取上清液，过滤，获得样品液，备用；
7.s2.空白试验：除不加样品外，处理方法同步骤s1，获得空白液，备用；
8.s3.标准液的制备：取辛酸甘油三酯标准品和癸酸甘油三酯标准品，加入正庚烷溶解并稀释，配制成不同浓度的辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的混合标准液；
9.s4.检测分析：将样品液、空白液和不同浓度的混合标准液分别注入气相色谱-质谱联用仪，进行质谱分析，保留时间定性，按外标法计算样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的含量。
10.采用气相色谱-质谱联用仪检测样品内中链甘油三酯的含量，操作简单、实用性强，通过将样品液的谱峰与标准液的谱峰进行对比，利用外标法计算样品内辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的含量，能够准确有效地测定样品内中链甘油三酯的含量，并具有较高的重现性，解决了现有检测方法准确度和重现性低的问题，同时通过设置空白试验，与样品按照相同的方法、步骤进行定量分析，将所得的结果作为空白值，从样品的分析结果中扣除，从而消除检测过程中由于试剂不纯或试剂干扰等所造成的系统误差，确保检测结果的准确
性。
11.优选地，步骤s1中，样品液的制备：对于固体样品，取固体样品加水溶解并定容至刻度，形成稀释液，取稀释液加入正庚烷，充分振荡，使其成为乳浊液，取乳浊液于离心管中，加入硫酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液，依次进行涡旋振荡和冷冻离心处理，取上清液，过滤，获得样品液，备用；
12.对于液体样品，将液体样品混合均匀，取液体样品加入正庚烷，充分振荡，使其成为乳浊液，取乳浊液于离心管中，进行冷冻离心处理，取上清液，过滤，获得样品液，备用；
13.对于油脂类样品，取油脂类样品加入正庚烷稀释并定容至刻度，形成稀释液，取稀释液加入正庚烷，充分振荡，使其成为乳浊液，取乳浊液于离心管中，进行冷冻离心处理，取上清液，过滤，获得样品液，备用。
14.医学食品的类型主要分为固体、液体和油脂三种类型，本发明针对不同类型的样品按照不同的方法进行预处理，并在预处理后的样品中加入正庚烷，充分振荡后进行冷冻离心处理，取上清液过滤，即可得到样品液，样品处理步骤简单，无需进行水解、甲酯化等繁琐处理，实现了中链甘油三酯的非衍生化检测，避免使用毒性较强的衍生试剂，减少了对环境的污染。
15.优选地，步骤s1中，样品液的制备：对于固体样品，取10g固体样品，加入100ml水溶解并定容至500ml，形成稀释液，吸取50ml稀释液加入50ml正庚烷，振荡1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，加入2ml硫酸锌溶液和2ml亚铁氰化钾溶液，在8000r/min下涡旋振荡1min后，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用；
16.对于液体样品，将液体样品混合均匀，取1.0g液体样品加入50ml正庚烷，振荡1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用；
17.对于油脂类样品，取10g油脂类样品，加入正庚烷稀释并定容至100ml，形成稀释液，取50ml稀释液加入50ml正庚烷，振荡1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用。
18.传统的检测方法将甘油三酯断链生成脂肪酸，再将脂肪酸甲酯化得到脂肪酸甲酯进行检测，容易使样品中残留的游离脂肪酸参与反应，从而无法保证测试结果的准确性，本发明通过直接提取样品中的中链甘油三酯进行检测，能够准确测定样品内中链甘油三酯的含量，且通过加入硫酸锌溶液和亚铁氰化钾溶液沉淀固体样品中的蛋白，避免干扰检测，影响检测结构的准确性。
19.优选地，步骤s3中，标准液的制备：取辛酸甘油三酯标准品和癸酸甘油三酯标准品，加入正庚烷溶解并定容至刻度，配制成辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯浓度各为5mg/ml的混合标准贮备液；
20.取混合标准贮备液，加入正庚烷稀释，配制成浓度范围为0.1μg/ml-100.0μg/ml的混合标准液。
21.优选地，步骤s3中，混合标准液的浓度为0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml。
22.优选地，步骤s3中，气相色谱的条件：
23.色谱柱：cp-tcp毛细管色谱柱，规格为25m
×
0.25mm
×
0.36mm；柱温：初始温度300℃，以5.0℃/min的速度升温至330℃，保持10min；载气：氦气；载气流速：1.0ml/min；进样方式：以4:1的比例分流进样；分流量：10ml/min；进样口温度：320℃；进样量：1μl。
24.优选地，步骤s3中，质谱的条件：
25.质谱传输接口温度：300℃；质谱离子源类型：ei源；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；测定方式：选择mrm模式。
26.采用上述检测条件进行检测，能够更好地分离目标物，从而得到最佳的分离度、峰形和回收率。
27.优选地，步骤s3中，mrm测定条件：
28.辛酸甘油三酯：母离子327.2，子离子127.1碰撞能10ev；母离子327.1，子离子109，碰撞能15ev；母离子327.1，子离子57，碰撞碰20ev；
29.癸酸甘油三酯：母离子383.3，子离子155，碰撞能10ev；母离子383，子离子71，碰撞能20ev；母离子383，子离子57，碰撞能20ev。
30.通过采用高速中子击碎目标物分子，在众多质量碎片中选择能量较大的定性定量离子进行分析，从而得到目标物的含量，选择上述特征母子离子对能够提高检测方法的灵敏度。
31.优选地，步骤s3中，外标法的具体步骤：量取不同浓度的混合标准液注入气谱-质谱联用仪，测得不同浓度混合标准液的峰面积，以混合标准液的峰面积为纵坐标，以相对应混合标准液的浓度为横坐标，绘制标准曲线；
32.另量取样品液和空白液分别注入气谱-质谱联用仪，测得样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的峰面积，分别计算辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的含量。
33.优选地，对于固体样品和油脂类样品，辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯含量的计算公式为：
[0034][0035]
对于液体样品，辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯含量的计算公式为：
[0036][0037]
其中，ω为样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的含量，单位为mg/kg；v1为样品定容体积，单位为ml；v2为吸取稀释液的体积，单位为ml；v3为稀释液或液体样品中加入正庚烷的体积，单位为ml；a-样品液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；a
s-混合标准液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；m-样品质量，单位为g；ρ-混合标准液的浓度，单位为mg/ml。
[0038]
本发明的有益效果：
[0039]
(1)本发明采用气相色谱-质谱联用仪，操作简单、实用性强，样品无需经过水解、衍生化、酯化等繁琐步骤，实现了中链甘油三酯的非衍生化检测，并利用外标法计算样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的含量，结果准确，重现性好，解决了现有检测方法准确度和
重现性低的问题。
[0040]
(2)本发明检测方法灵敏度高，辛酸甘油三酯的检出限为0.1mg/kg，辛酸甘油三酯的定量限为0.2mg/kg；癸酸甘油三酯的检出限为1.00mg/kg，癸酸甘油三酯的定量限为2.00mg/kg。
[0041]
(3)本发明检测方法准确度高，辛酸甘油三酯添加浓度为0.1-10.0mg/kg时，平均回收率为85％；癸酸甘油三酯添加浓度为0.005-10.0mg/kg时，平均回收率为80-90％。
[0042]
(4)本发明检测方法精密度高，本发明检测方法的批内标准偏差小于10％，批间标准偏差小于15％。
附图说明
[0043]
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0044]
图1为本发明中辛酸甘油三酯标准品的离子流色谱图；
[0045]
图2为本发明中辛酸甘油三酯标准品的ei全扫描质谱图；
[0046]
图3为本发明中癸酸甘油三酯标准品的离子流色谱图；
[0047]
图4为本发明中癸酸甘油三酯标准品的ei全扫描质谱图。
具体实施方式
[0048]
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本技术所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0049]
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0050]
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0051]
实施例1
[0052]
一种中链甘油三酯的气质检测方法，包括以下步骤：
[0053]
s1.样品液的制备：取10g固体样品，加入100ml水溶解并定容至500ml，形成稀释液，吸取50ml稀释液加入50ml正庚烷，振荡1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，加入2ml硫酸锌溶液和2ml亚铁氰化钾溶液，在8000r/min下涡旋振荡1min后，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用；
[0054]
s2.空白试验：除不加样品外，处理方法同步骤s1，获得空白液，备用；
[0055]
s3.标准液的制备：取辛酸甘油三酯标准品和癸酸甘油三酯标准品各0.05g，放置
于同一容量瓶中，加入正庚烷溶解并定容至10ml，配制成辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯浓度各为5mg/ml的混合标准贮备液；
[0056]
取混合标准贮备液，加入正庚烷稀释，浓度为0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml的混合标准液；
[0057]
s4.含量测定：气相色谱的条件：
[0058]
色谱柱：cp-tcp毛细管色谱柱，规格为25m
×
0.25mm
×
0.36mm；柱温：初始温度300℃，以5.0℃/min的速度升温至330℃，保持10min；载气：氦气；载气流速：1.0ml/min；进样方式：以4:1的比例分流进样；分流量：10ml/min；进样口温度：320℃；进样量：1μl；
[0059]
质谱的条件：
[0060]
质谱传输接口温度：300℃；质谱离子源类型：ei源；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；测定方式：选择mrm模式，辛酸甘油三酯(母离子327.2，子离子127.1碰撞能10ev；母离子327.1，子离子109，碰撞能15ev；母离子327.1，子离子57，碰撞碰20ev)；癸酸甘油三酯(母离子383.3，子离子155，碰撞能10ev；母离子383，子离子71，碰撞能20ev；母离子383，子离子57，碰撞能20ev)；
[0061]
量取不同浓度的混合标准液注入气谱-质谱联用仪，测得不同浓度混合标准液的峰面积，以混合标准液的峰面积为纵坐标，以相对应混合标准液的浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0062]
另量取样品液和空白液分别注入气谱-质谱联用仪，测得样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的峰面积；
[0063]
s4.定性分析：
[0064]
在进行测试时，样品液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间与标准液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间偏差在
±
0.05min以内，在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的监测离子丰度比与标准液的离子丰度比一致，(相对丰度＞50％，允许
±
10％偏差；相对丰度＞20％～50％，允许
±
15％偏差；相对丰度＞10％～20％，允许
±
20％偏差)，则可判读样品中存在辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯；
[0065]
s5.结果计算：
[0066]
样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯含量的计算公式为：
[0067][0068]
其中，ω为样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的含量，单位为mg/kg；v1为样品定容体积，单位为ml；v2为吸取稀释液的体积，单位为ml；v3为稀释液中加入正庚烷的体积，单位为ml；a-样品液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；a
s-混合标准液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；m-样品质量，单位为g；ρ-混合标准液的浓度，单位为mg/ml；
[0069]
计算结果扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。
[0070]
实施例2
[0071]
一种中链甘油三酯的气质检测方法，包括以下步骤：
[0072]
s1.样品液的制备：将液体样品混合均匀，取1.0g液体样品加入50ml正庚烷，振荡
1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用；
[0073]
s2.空白试验：除不加样品外，处理方法同步骤s1，获得空白液，备用；
[0074]
s3.标准液的制备：取辛酸甘油三酯标准品和癸酸甘油三酯标准品各0.05g，放置于同一容量瓶中，加入正庚烷溶解并定容至10ml，配制成辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯浓度各为5mg/ml的混合标准贮备液；
[0075]
取混合标准贮备液，加入正庚烷稀释，浓度为0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml的混合标准液；
[0076]
s4.含量测定：气相色谱的条件：
[0077]
色谱柱：cp-tcp毛细管色谱柱，规格为25m
×
0.25mm
×
0.36mm；柱温：初始温度300℃，以5.0℃/min的速度升温至330℃，保持10min；载气：氦气；载气流速：1.0ml/min；进样方式：以4:1的比例分流进样；分流量：10ml/min；进样口温度：320℃；进样量：1μl；
[0078]
质谱的条件：
[0079]
质谱传输接口温度：300℃；质谱离子源类型：ei源；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；测定方式：选择mrm模式，辛酸甘油三酯(母离子327.2，子离子127.1碰撞能10ev；母离子327.1，子离子109，碰撞能15ev；母离子327.1，子离子57，碰撞碰20ev)；癸酸甘油三酯(母离子383.3，子离子155，碰撞能10ev；母离子383，子离子71，碰撞能20ev；母离子383，子离子57，碰撞能20ev)；
[0080]
量取不同浓度的混合标准液注入气谱-质谱联用仪，测得不同浓度混合标准液的峰面积，以混合标准液的峰面积为纵坐标，以相对应混合标准液的浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0081]
另量取样品液和空白液分别注入气谱-质谱联用仪，测得样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的峰面积；
[0082]
s4.定性分析：
[0083]
在进行测试时，样品液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间与标准液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间偏差在
±
0.05min以内，在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的监测离子丰度比与标准液的离子丰度比一致，(相对丰度＞50％，允许
±
10％偏差；相对丰度＞20％～50％，允许
±
15％偏差；相对丰度＞10％～20％，允许
±
20％偏差)，则可判读样品中存在辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯；
[0084]
s5.结果计算：
[0085]
样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯含量的计算公式为：
[0086][0087]
其中，ω为样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的含量，单位为mg/kg；v3为液体样品中加入正庚烷的体积，单位为ml；a-样品液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；a
s-混合标准液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；m-样品质量，单位为g；ρ-混合标准液的浓度，单位为mg/ml；
[0088]
计算结果扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数
字。
[0089]
实施例3
[0090]
一种中链甘油三酯的气质检测方法，包括以下步骤：
[0091]
s1.样品液的制备：取10g油脂类样品，加入正庚烷稀释并定容至100ml，形成稀释液，取50ml稀释液加入50ml正庚烷，振荡1-2min，使其成为乳浊液，取20ml乳浊液于离心管中，在8000r/min下冷冻离心3min，取上清液，采用0.45μm有机相滤膜过滤，获得样品液，备用；
[0092]
s2.空白试验：除不加样品外，处理方法同步骤s1，获得空白液，备用；
[0093]
s3.标准液的制备：取辛酸甘油三酯标准品和癸酸甘油三酯标准品各0.05g，放置于同一容量瓶中，加入正庚烷溶解并定容至10ml，配制成辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯浓度各为5mg/ml的混合标准贮备液；
[0094]
取混合标准贮备液，加入正庚烷稀释，浓度为0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml、50.0μg/ml、100.0μg/ml的混合标准液；
[0095]
s4.含量测定：气相色谱的条件：
[0096]
色谱柱：cp-tcp毛细管色谱柱，规格为25m
×
0.25mm
×
0.36mm；柱温：初始温度300℃，以5.0℃/min的速度升温至330℃，保持10min；载气：氦气；载气流速：1.0ml/min；进样方式：以4:1的比例分流进样；分流量：10ml/min；进样口温度：320℃；进样量：1μl；
[0097]
质谱的条件：
[0098]
质谱传输接口温度：300℃；质谱离子源类型：ei源；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；测定方式：选择mrm模式，辛酸甘油三酯(母离子327.2，子离子127.1碰撞能10ev；母离子327.1，子离子109，碰撞能15ev；母离子327.1，子离子57，碰撞碰20ev)；癸酸甘油三酯(母离子383.3，子离子155，碰撞能10ev；母离子383，子离子71，碰撞能20ev；母离子383，子离子57，碰撞能20ev)；
[0099]
量取不同浓度的混合标准液注入气谱-质谱联用仪，测得不同浓度混合标准液的峰面积，以混合标准液的峰面积为纵坐标，以相对应混合标准液的浓度为横坐标，绘制标准曲线；
[0100]
另量取样品液和空白液分别注入气谱-质谱联用仪，测得样品中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的峰面积；
[0101]
s4.定性分析：
[0102]
在进行测试时，样品液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间与标准液中辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的保留时间偏差在
±
0.05min以内，在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的监测离子丰度比与标准液的离子丰度比一致，(相对丰度＞50％，允许
±
10％偏差；相对丰度＞20％～50％，允许
±
15％偏差；相对丰度＞10％～20％，允许
±
20％偏差)，则可判读样品中存在辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯；
[0103]
s5.结果计算：
[0104]
样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯含量的计算公式为：
[0105]
[0106]
其中，ω为样品中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的含量，单位为mg/kg；v1为样品定容体积，单位为ml；v2为吸取稀释液的体积，单位为ml；v3为稀释液中加入正庚烷的体积，单位为ml；a-样品液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；a
s-混合标准液中辛酸甘油三酯或癸酸甘油三酯的峰面积；m-样品质量，单位为g；ρ-混合标准液的浓度，单位为mg/ml；
[0107]
计算结果扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留2位有效数字。
[0108]
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。