度，使第一分束镜5的反射光经液流系统6、第一放大镜8、第一反射镜9、第三透镜10到达第二分束镜11的光程等于所述第一分束镜5的透射光经过第三分束镜12、第二反射镜13、第二显微放大镜14、第四透镜15到达第二分束镜11的光程。
[0023]本实施例中的第一分束镜5、第二分束镜11和第三分束镜12均均以45度放置，且镀有45度入射时半透半反的介质膜，透射光与反射光的强度各为入射光强度的50%，确保干涉光路的效果。
[0024]第一显微放大镜8和第二显微放大镜14的参数一致，放大倍率均为50倍、且焦距为4cm，以保证光束通过后的光程一致，并且使得最终到达第二分束镜11的两束光束直径一致，使得干涉图像的信息完全，精确。
[0025]通过第三分束镜12垂直向上的反射光到达第三反射镜16后，经过反射改为水平方向，成为光散射光路系统的入射光，所述样品7位于第五透镜17的焦平面上，所述入射光经过第五透镜17后聚焦于液流系统6中的样品7上，照射到样品7上的光经细胞散射，其中前向散射光经过会聚透镜18聚焦于光电二极管19的接受面上，聚焦光斑的直径和待测样品7中血细胞直径接近，为10?20 μ m，大多数白细胞和红细胞的直径为10-15 μ m，例外的单核细胞直径可以达到20μπι，淋巴细胞部分小于ΙΟμπι，病变细胞的折射率、直径会与正常细胞有巨大差别。细胞越大，前向散射光越强，利用该原理实现对细胞分类。光电二极管19所得到的信息可以将测定样品7所含有的血细胞进行初步分类并且从中分选出直径显著大于或者小于正常血细胞直径的血细胞。
[0026]常规流式细胞仪中对于直径显著不同的病变细胞通常采用两种方法进行检测，一种直接以废液的通道流掉，通过检测不同类型细胞的比例实行监测，对血样的浪费过多，另一种是采用荧光染色的方法进行检测，会对细胞造成损伤。本实施例中利用细胞前向散射光实现对大量细胞的即时监测与分类，即节省样品同时不会对样品造成损伤。
[0027]本实施例的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统工作时，首先让含有血细胞的测定样品7在液流体统6中流动，检测出通过液流系统6的血细胞照射的散射光并获取检测信号，根据检测信号将测定样品7所含有的血细胞进行初步分类，并且从中分选出直径显著大于或者小于正常血细胞直径的血细胞；同时向通过液流系统6的血细胞照射的光所获得的物光和参考光的干涉后，获取测定样品7的信息，得到测定样品7的光学干涉图，依据光相位恢复技术，根据相位与细胞厚度的关系，得到均质细胞的形态。
[0028]所述实施例为本发明的优选的实施方式，但本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情况下，本领域技术人员能够做出的任何显而易见的改进、替换或变型均属于本发明的保护范围。
【主权项】
1.基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于:包括光相位光路系统和光散射光路系统； 所述光相位光路系统用于采集待测样品的光学干涉图，包括激光器(I)、扩束准直系统、第一分束镜(5)、液流系统(6)、样品(7)、第一反射镜(9)、第二分束镜(11)、第三分束镜(12)、第二反射镜(13)、和面阵CCD (20)，所述扩束准直系统、第一分束镜(5)、第三分束镜(12)和第二反射镜(13)依次放置在激光器(I)的光路上，所述样品(7)盛放在液流系统(6)中，所述样品(7)与第一反射镜(9)依次放置在第一分束镜(5)的反射光路上，所述第二分束镜(11)和面阵CCD(20)依次放置在第一反射镜(9)的反射光路上，且所述第二分束镜(11)同时位于第二反射镜(13)的反射光路上； 所述光散射光路系统用于采集样品的散射光信号，包括第三反射镜(16)、第五透镜(17)、会聚透镜(18)和光电二极管(19)，所述第三反射镜(16)位于第三分束镜(12)的反射光路上，所述第五透镜(17)、样品(7)、会聚透镜(18)和光电二极管(19)依次放置在第三反射透镜(16)的反射光路上。
2.根据权利要求1所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述扩束准直系统包括依次放置在激光器(I)光路上的第一透镜(2)、针孔滤波器(3)和第二透镜(4)。
3.根据权利要求2所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 还包括第一显微放大镜(8)、第三透镜(10)、第二显微放大镜(14)和第四透镜(15)，所述第一显微放大镜(8)位于液流系统(6)与第一反射镜(9)之间的光路上，所述第三透镜(10)位于第一反射镜(9)与第二分束镜(11)之间的光路上，所述第二显微放大镜(14)和第四透镜(15)依次放置在第二反射镜(13)与第二分束镜(11)之间的光路上。
4.根据权利要求3所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述第三透镜(10)的物方焦点与所述第一显微放大镜(8)的像方虚焦点重合，所述第四透镜(15)的物方焦点与所述第二显微放大镜(14)的像方虚焦点重合。
5.根据权利要求4所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述第一显微镜(8)与第二显微镜(15)的放大率均为50倍，且焦距均为4cm。
6.根据权利要求5所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述第一分束镜(5)的反射光经所述液流系统(6)、第一显微放大镜(8)、第一反射镜(9)、第三透镜(10)到达第二分束镜(11)的光程等于所述第一分束镜(5)的透射光经过所述第三分束镜(12)、第二反射镜(13)、第二显微放大镜(14)、第四透镜(15)到达第二分束镜(11)的光程。
7.根据权利要求6所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述样品(7)位于第五透镜(17)的焦平面上、且位于第一显微放大镜(8)的物方焦平面处。
8.根据权利要求1?7任一项所述的基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，其特征在于: 所述第一分束镜(5)、第二分束镜(12)、第三分束镜(11)均以45度放置，且镀有45度入射时半透半反的介质膜。
【专利摘要】本发明提供了一种基于光散射与相位成像下的血细胞联合检测系统，包括光相位光路系统和光散射光路系统，光相位光路系统包括激光器、扩束准直系统、第一分束镜、液流系统、样品、第一反射镜、第二分束镜、第三分束镜、第二反射镜、和面阵CCD，应用马赫增德尔干涉原理采集测定液流系统中待测样品的光学干涉图；光散射光路系统包括第三反射镜、第五透镜、会聚透镜和光电二极管，用于采集样品的散射光信号。本发明可以实现对于大量血细胞的实施监测和快速分类，同时可对特定细胞进行全面、精准的信息检测，满足现实使用需求，节约检测时间与成本，提高检测效率。
【IPC分类】G01N21-84
【公开号】CN104535572
【申请号】CN201510003599
【发明人】王亚伟, 邢玲玲, 骆鹏程, 蒋振豪
【申请人】江苏大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2015年1月6日