一种减肥类中成药和保健食品中非法添加物的Q-Orbitrap高分辨质谱检测方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种药品、保健食品或食品的分析技术领域，特别是涉及一种减肥类中成药和保健食品中非法添加物的Q-Orbitrap高分辨质谱检测方法。
【背景技术】
[0002]近年来，中成药保健食品中非法添加化学药物已成为一种普遍现象，一些不法厂商为片面追求治疗效果，获取经济暴利，擅自在中草药和保健食品中非法添加化学药物。咖啡因、呋塞米、酚酞、盐酸西布曲明、盐酸芬氟拉明等药物为减肥类产品的常用非法添加物，均有一定的不良反应，如滥用或使用不当会导致不良后果。中药及纯天然保健食品长期以来深受广大患者的喜爱，然而目前有些减肥类中药制剂及保健食品的生产厂家受利益驱动，在中药制剂和保健品中非法掺入减肥类化学药，使其符合广告所宣传的治疗效果以促进销售，由于处方中没有标明添加化学药物的种类及剂量，如使用不当，将对服用者的健康和生命造成威害。为有效打击这种制假掺伪的不法行为，有必要建立快速、专属的方法鉴定中药制剂及保健食品中非法掺入的此类药物。由于中药制剂及保健食品成分复杂，建立和完善非法添加药物检测方法也成为药物分析界的热点之一。被研宄和报道的非法药物检测方法中，以HPLC和低分辨LC-MS (四级杆，离子阱)为主要技术手段。但目前的HPLC和低分辨LC-MS法存在着灵敏度低、选择性差、定性能力弱、确证性不够强等缺点，不能实现100%的筛查正确率，在日常非法添加检测时有时会出现假阳性和假阴性样品，造成检验工作错判漏判等失误。
[0003]因此，人们仍然需要一种操作更简单、速度更快且更安全、污染更小抗干扰能力更强的检验方法，以便于准确快速的鉴别出减肥类中成药、保健食品和食品中是否添加非法添加物。Orbitrap高分辨质谱仪(Orbitrap HRMS)是最新的高分辨质谱技术，分辨率最高可达I 000 000以上，质量精度可达0.1-lppm。Orbitrap HRMS通过革新性的新质谱技术，可进行高精度的目标物或非目标物的筛选，同时提供大范围的定性和定量分析。然而，Orbitrap HRMS的强大的定性定量潜力却未见用于减肥类中成药和保健食品中的非法添加检测。
【发明内容】
[0004]本发明提供了一种减肥类中成药和保健食品中非法添加物的Q-Orbitrap高分辨质谱检测方法，该检测方法高灵敏度、高选择性、定性能力强，可用于减肥类中成药和保健食品中非法添加物的快速鉴定、确证和定量。
[0005]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0006]—种减肥类中成药和保健食品中非法添加物的Q-Orbitrap高分辨质谱检测方法，其特征在于包括以下步骤:
[0007]I)采用 Q-Orbitrap 高分辨质谱仪，通过 Fu11 MS scan/dd - MS2 (Top N)扫描模式，正负离子同时检测，在一个分析周期12分钟内完成对样品中分析物的分离和高精度一级、二级质谱扫描，得到准确质量数和准确碎片离子信息；
[0008]2)通过比较样品与减肥类化学成分对照品的色谱保留时间、一级质谱和二级质谱，确定样品中是否掺杂了减肥类化学药物，并对潜在的阳性样品进行定量分析；所述减肥类化学成分对照品为咖啡因、呋塞米、盐酸芬氟拉明、酚酞、盐酸西布曲明。
[0009]3)将得到的实验数据以Exact Finder 1.0软件进行快速筛查、确证和定量。
[0010]更进一步优选的，所述高分辨质谱仪的质谱条件色谱条件为:
[0011]流动相:含0.1%冰醋酸的1mmol.L—1的NH4AC(A)-甲醇(B)，梯度洗脱(O?0.5min,20%B ;0.5 ?6.5min，20%?85% B ;6.5 ?9.0min, 85% B ；9.1 ?12min，20%B)；流速:300 μ L/min ;柱温:30°C ;自动进样器控温:20°C ;进样量:5 μ L。
[0012]所述高分辨质谱仪的质谱条件:
[0013]Full MS scan/dd - MS2 (Top N)扫描模式，正负离子同时检测；一级质谱扫描分辨率70000FWHM，二级质谱扫描分辨率17500FWHM ；full MS 一级全扫描范围为m/z 100-500，自动增益控制AGC、最大注入时间IT分别设为1.0e6和100ms ；dd - MS 2数据依赖的二级扫描 AGC 设为 2.0e5,最大 IT 设为 50ms，分离窗口 isolat1n window 设为 1.0m/z, underfillrat1 设为 1.0%，强度阈值 intensity threshold 设为 4.0e4,同位素排除 excludeisotopes 设为 〃on〃，动态排除 dynamic exclus1n 设为 10.0s。
[0014]不论什么样的减肥药，都是通过以下3种途径来实现减肥的:①抑制大脑的食欲中枢，降低食欲，使肥胖者减少进食量，从而减少热量的摄入。②刺激新陈代谢，增加机体耗氧量和脂肪、糖的氧化，以减少脂肪在体内的堆积。③刺激肠道，使营养吸收减少，排泄增多增快。因此相应的有以下类型的减肥药:食欲抑制剂、中枢兴奋剂、湾药、利尿剂等。本发明选择最常见的5种非法添加药物(咖啡因、呋塞米、酚酞、盐酸芬氟拉明和盐酸西布曲明)进行研宄，其中，咖啡因属于中枢兴奋剂，呋塞米属利尿剂；酚酞属泻药类，盐酸芬氟拉明和盐酸西布曲明属食欲抑制药。虽然减肥药的种类很多，但这样一种分布状况基本上代表了减肥药物的类型“散布”状况，所以建立检测方法能满足检测非法添加药物的要求。
[0015]中药制剂及保健食品成分一般均较复杂，应用高效液相色谱法鉴定时干扰大，不易将多种待测成分均与干扰峰分离，而采用Q-Orbitrap高分辨质谱仪鉴定时，凭借其超高质谱分辨率，可以得到待测成分的一级质谱分子离子准确质量数(可精确至±5ppm)，从而排除了干扰组分的影响；如果待测成分的一级质谱分子离子的准确质量数恰好与干扰成分相同，则利用准确二级碎片离子来排除干扰，提高专属性。本发明具有灵敏度高、选择性好和确证性强等优势，能够进行准确无误的筛查，具有传统HPLC和低分辨LC-MS无可比拟的专属性和灵敏度，而且操作简单快捷，可以应用于打击减肥类中成药及保健食品中非法添加物的日常食品药品监管行动。
【附图说明】
[0016]下面结合附图对本发明进一步说明。
[0017]附图1为本发明的对照品提取离子色谱图；
[0018]附图2为本发明的对照品一级质谱图；
[0019]附图3为本发明的对照品二级质谱图。
【具体实施方式】
[0020]下面结合实施例对本发明进一步说明。
[0021]实施例:
[0022]I实验材料
[0023]1.1仪器与试药
[0024]UHPLC-Q-Orbitrap超高效液相色谱-质谱联用系统，包括Accela 1250LC泵和自动进样器、Q Exactive?质谱部分(Thermo Fisher Scientific, Germany) o XCalibur2.2软件(Thermo Fisher Scientific,MA, USA)软件用以仪器控制和数据处理；Q Exactive2.1 软件(Thermo Fisher Scientific，MA, USA)用于控制质谱仪。色谱柱为 HypersilGOLD aQ C18column (lOOmmX 2.lmm，1.9ym) (Thermo Fisher Scientific，USA) oKQ - 300GDV温控超声仪(昆山，中国)。色谱纯甲醇、乙酸、乙酸铵均购自TEDIA公司(USA)，超纯水(18.2ΜΩ)由 Mill1-Q Advantage AlO 超纯水系统制得。
[0025]对照品:咖啡因，批号171215-201211，含量99.9%;呋塞米，批号100544-201102，含量99.7% ;酚酞，批号100091-199601，含量100% ;盐酸芬氟拉明，批号100073-200002，含量100% ;盐酸西布曲明，批号100624-200401，含量100%。均购自中国食品药品检定研宄院。
[0026]样品:27批减肥类中成药和保健食品来源于山东省食品药品监督管理局及各地市食品药品监督管理局。
[0027]1.2色谱条件与质谱条件
[0028]流动相:含0.1 %冰醋酸的1mmol.L—1的NH4AC(A)-甲醇(B),梯度洗脱(O?0.5min,20%B ;0.5 ?6.5min，20%?85% B ;6.5 ?9.0min, 85% B ；9.1 ?12min，20%B)；流速:300 μ L/min ;柱温:30°C ;自动进样器控温:20°C ;进样量:5yL。理论塔板数按咖啡因