一种病理组织透明脱蜡液及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于病理学组织切片技术领域，具体涉及一种病理组织透明脱蜡液及其制备方法与应用。
【背景技术】
[0002]目前，绝大多数病理组织切片的制作过程仍采用传统的石蜡切片制作技术，其过程包括固定、脱水、第一次透明、浸蜡、切片、脱蜡、染色、第二次透明、封片等步骤的处理才能完成病理切片的制作。其中，第一次透明是指通过透明液的媒介作用，而达到石蜡浸入组织块的目的，这一过程中，组织块中的亲水组分被透明液取代，使得组织块变得透亮；而脱蜡是指组织切片染色前须通过脱蜡液溶解切片中的石蜡，以使染料易于浸入组织和细胞的操作；第二次透明是指组织切片经过染色、脱水后必须经透明液处理，使切片透明，以利于光线透过，才能封片，否则在显微镜下组织结构模糊不清，这是第二次透明。透明、脱蜡效果的好坏直接影响到石蜡制片的质量。在病理组织切片的制作过程中，组织的透明和切片染色前后的脱蜡、透明三个环节，需要大量透明脱蜡试剂。
[0003]目前最常用的组织透明脱蜡液主要是二甲苯，二甲苯在病理科手工制片、自动脱水机及自动染色机上均大量使用。虽然二甲苯具有良好的脱蜡和透明效果，但是由于二甲苯属于具有强烈刺激性气味的神经毒素，其毒性主要是对中枢神经和植物神经的麻醉及粘膜的刺激作用，对长期接触的人员生理系统具有选择性的特殊伤害，产生靶器官效应，可出现眼及上呼吸道明显的刺激症状、眼结膜及咽充血、头晕、恶心、呕吐、胸闷、四肢无力、意识模糊等症状，此外，还可引起免疫功能低下、贫血、皮炎、湿疹和皮肤干燥等症状，对病理工作人员的身体健康产生严重危害和造成环境污染，二甲苯引起的健康损害已列入了我国职业病中毒范围，而且在病理组织处理过程中，使用二甲苯容易使得病理组织收缩、硬化变脆，因此，为了相关实验人员的身体健康，二甲苯并不适宜用于人体、动物组织病理切片制备过程中的透明、脱蜡之用。
[0004]虽然现有技术中存在以松节油为主要成分的脱蜡液作为二甲苯脱蜡液的替代品，其具有一定透明脱蜡效果，但松节油自身难闻的异味依然难以让人接受，加上松节油自然资源的枯竭，这一仅有少量应用的替代品已基本退出病理组织切片制作行业；硬脂酸也曾经被用于透明脱蜡，但因其容易脱片、切片透明欠佳、长期存放蜡块组织收缩等原因没有得到广泛应用。
【发明内容】
[0005]为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中病理组织透明脱蜡液有毒及有刺激性气味，长时间浸泡组织会使组织变脆和收缩不利切片，进而提供一种无毒、无刺激性气味且长时间浸泡组织不会使组织变脆和收缩的病理组织透明脱蜡液及其制备方法与应用。
[0006]为解决上述技术问题，本发明的病理组织透明脱蜡液，包括如下重量份的组分:高度支链饱和烷烃92.5-98重量份、稳定剂0.5-5重量份和增效剂0.1-2.5重量份。
[0007]优选的，所述病理组织透明脱蜡液包括如下重量份的组分:高度支链饱和烷烃为95-97重量份、稳定剂2-3重量份和增效剂1-2重量份。
[0008]优选的，所述高度支链饱和烷烃为环烷油、四环庚烷、顺-1-异丙基-4-甲基环己烷、反-1-异丙基-4-甲基环己烷中的一种或几种的混合物；
[0009]优选的，所述的稳定剂为环氧大豆油、三羟甲基丙烷、环氧硬脂酸丁酯中的一种或几种的混合物；
[0010]优选的，所述的增效剂为聚醚改性七甲基三硅氧烷(CAS:27306-78-1)、丁基醚聚二甲基硅氧烷(CAS: 67762-87-2)、二甲基-3-羟丙基甲基(硅氧烷与聚硅氧烷)(CAS: 117272-76-1)中的一种或几种的混合物。
[0011]在上述的病理组织透明脱蜡液中，所述病理组织透明脱蜡液组成为:
[0012]环烷油98重量份、环氧大豆油0.5重量份、聚醚改性七甲基三硅氧烷1.5重量份；或
[0013]四环庚烷94.9重量份、三羟甲基丙烷5重量份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.1重量份；或
[0014]顺-1-异丙基-4-甲基环己烷92.5重量份、环氧硬脂酸丁酯5重量份、二甲基-3-羟丙基甲基(硅氧烷与聚硅氧烷)2.5重量份；或
[0015]反-1-异丙基-4-甲基环己烷97.5重量份、环氧硬脂酸丁酯0.5重量份、二甲基-3-羟丙基甲基(硅氧烷与聚硅氧烷)2重量份；或
[0016]环烷油96重量份、环氧硬脂酸丁酯3.5重量份、丁基醚聚二甲基硅氧烷0.5重量份。
[0017]一种制备上述病理组织透明脱蜡液的方法，包括按照选定的重量份取所述高度支链饱和烷烃、稳定剂和增效剂，在室温至60°C进行调和的步骤。
[0018]上述病理组织透明脱蜡液在制作病理学组织切片技术领域的应用。
[0019]一种病理组织石蜡切片的制作方法，包括以上述的病理组织透明脱蜡液对病理组织进行第一次透明、脱蜡和第二次透明的步骤。
[0020]在上述的病理组织石蜡切片的制作方法中，所述脱蜡步骤具体为:将处理好的病理组织石蜡切片放入所述的病理组织透明脱蜡液中，于20-28°C温度下恒温浸泡10-15分钟，重复浸泡2次；
[0021]在上述的病理组织石蜡切片的制作方法中，所述的第一次透明的具体步骤:将酒精脱水后的病理组织放入所述的病理组织透明脱蜡液中，于32-37°C温度下恒温浸泡40-50分钟，优选45分钟，重复浸泡I次；
[0022]所述的第二次透明的具体步骤:将酒精脱水后的病理组织放入所述的病理组织透明脱蜡液中，于20-28°C温度下恒温浸泡2-5分钟，优选3分钟，重复浸泡2次。
[0023]本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点:
[0024](I)本发明所述的病理组织透明脱蜡液，包括高度支链饱和烷烃92.5-98重量份、稳定剂0.5-5重量份和增效剂0.1-2.5重量份；本发明所述的病理组织透明脱蜡液无毒，无刺激性气味，并且本发明的病理组织透明脱蜡液既能用于透明，又能用于脱蜡，与二甲苯的透明、脱蜡效果相当，是临床上二甲苯的理想替代品；
[0025](2)本发明所述的病理组织透明脱蜡液，通过筛选得到的所述高度支链饱和烷烃为环烷油、四环庚烷、顺-1-异丙基-4-甲基环己烷、反-1-异丙基-4-甲基环己烷；所述的稳定剂为环氧大豆油、三羟甲基丙烷、环氧硬脂酸丁酯；所述的增效剂为聚醚改性七甲基三硅氧烷、丁基醚聚二甲基硅氧烷、二甲基-3-羟丙基甲基；使得本发明的病理组织透明脱蜡液无毒、无刺激性气味，经小鼠急性毒性灌胃剂量32000mg/kg体重，优于世界卫生组织的产品微毒标准(5000mg/kg)，且通过实验例可知，本发明的病理组织透明脱蜡液与二甲苯的透明脱蜡效果相当，且本发明的病理组织透明脱蜡液可以长时间浸泡病理组织，不会使组织变脆和收缩，能增强浸蜡效果，有利于切片，在潮湿的环境中可以正常使用；
[0026](3)本发明所述的病理组织透明脱蜡液，通过调整高度支链饱和烷烃、稳定剂和增效剂的添加量，获得病理组织的透明脱蜡效果更显着，组织细胞结构清晰、背景对比度高，可长期存放，对组织抗原无影响，可适用于临床制作病理学组织切片；
[0027](4)本发明所述的病理组织透明脱蜡液对病理组织进行第一次透明、脱蜡和第二次透明的操作，并筛选了适宜使用的浸泡温度和浸泡时间，获得了组织细胞结构清晰、背景对比度高的显著技术效果。
[0028]实验例I
[0029]以下通过实验例更好地说明本发明与现有技术中的透明脱蜡液二甲苯相比透明、脱蜡效果基本相同，且本发明的透明脱蜡液具有无毒、无刺激性气味的显著技术效果。
[0030]1.实验材料
[0031]实验材料:子宫肌瘤平滑肌组织和肠上皮生化组织。
[0032]实验试剂:试验组的透明脱蜡液为本实施例1中制备的透明脱蜡液；对照组的透明脱蜡液为二甲苯。
[0033]2.实验方法及结果:
[0034]2.1实验方法
[0035]试验组和对照组均按照常规方法将上述病理组织制作成石蜡切片，区别仅在于试验组所采用的透明脱蜡液及石蜡切片制作过程中的第一次透明、脱蜡、第二次透明步骤为本发明实施例1制备的病理组织透明脱蜡液及实施例1的石蜡切片的制作过程中的第一次透明、脱蜡、第二次透明的步骤，所述第一次透明的步骤为:将酒精脱水后的病理组织放入所述病理组织透明脱蜡液中，于32°c温度下恒温浸泡45分钟，重复浸泡I次；所述脱蜡步骤为:将处理好的病理组织石蜡切片放入所述的病理组织透明脱蜡液中，于28°C温度下恒温浸泡10分钟，重复浸泡2次；所述第二次透明的步骤为:将酒精脱水后的病理组织放入所述的病理组织透明脱蜡液中，于20°C温度下恒温浸泡3分钟，重复浸泡2次。
[0036]2.2 结果
[0037]2.2.1对子宫肌瘤平滑肌组织的观察
[0038]将试验组制作的子宫肌瘤平滑肌组织石蜡切片和对照组制作的子宫肌瘤平滑肌组织石蜡切片比较发现，试验组与对照组相比透明、脱蜡效果基本相同，如试验组用本发明实