用于区分肝癌和肺癌的生物标记物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及区分肝癌和肺癌的新生物标记物，所述生物标记物对不同癌症中病理 学改变较敏感，特别是在疾病或损伤早期阶段。
【背景技术】
[0002] 代谢组学（metabonomics/metabolomics)是继基因组学、转录组学、蛋白质组学 之后提出的一门新的学科，是系统生物学中的一个重要组成部分。生物机体在受到外界病 源或环境改变的刺激时，会产生多层次、多器官和多组织的应答反应，这些应答反应最终将 影响到终端代谢水平的变化正是研究这种机体在受到内因、外因的刺激时，机体内的终端 小分子代谢物（通常指分子量小于1000 Da)的变化规律的科学，从整体上动态地阐述生理 或病理状态下机体对外界刺激的应答和动态系统性的变化过程，为全面理解多因素影响下 的癌症的发生机制研究将提供一个新的视角。同时，从整体上考察人体的生理状态，能得到 更多的疾病相关信息，有利于癌症的早期诊断。另外，代谢组学技术分析的样本主要是尿液 和血液，其采集过程对人体无伤害或是有极小的伤害，因此代谢组学的方法将有利于癌症 的大规模筛查。
[0003] 癌症是一大类恶性肿瘤的统称。癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者体 内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还可 转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能 受损等等，继而破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终由于器官 功能衰竭而死亡。
[0004] 肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，无论是在全世界还是国内上来看，肺癌均占 肿瘤之首，其发病率和病死率均迅速上升，死于癌病的男性病人中肺癌已居首位。肺癌的发 病率和死亡率在逐年上升，世界年患病人数在90万左右，我国近10年内恶性肿瘤发病率及 死亡率以肺癌增长最为迅速，肺癌已成为我国第一大癌症。肺癌是复发转移率高的肿瘤，即 使进行根治性切除，也多因术后复发转移而死亡。肺癌的病发与不良的生活习惯，环境因 素与大气污染等密切相关。肺癌生长速度缓慢，病程较长的早期诊断与治疗可以在很大程 度上给患者带来治愈的机会，肺癌的诊断中肿瘤标记物的检测就显得十分重要。
[0005] 据统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按 细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。按肿瘤的形态可分为结节 型、巨块型和弥漫型。原发性肝癌在我国属于高发病，一般男性多于女性。中国是乙肝大国， 我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展 为肝癌。目前我国发病人数约占全球的半数以上，占全球肝癌病人的55%，已经成为严重威 胁我国人民健康和生命的一大杀手。因其恶性度高、病情进展快，病人早期一般没有什么不 适，一旦出现症状就诊，往往已属中晚期。故治疗难度大、疗效差，发病后生存时间短。在我 国，每年有11万人死于肝癌，其中男性8万，女性3万，占全世界肝癌死亡人数的45%。作 为最常见的一种恶性肿瘤，肝癌死亡率仅居高，全国每年至少有12万人被肝癌夺去生命。
[0006] 肝癌起病隐匿，超过60%的肝癌患者在初次就诊时已经进入中晚期，从而失去根 治性治疗的机会，总体5年生存率只有7%左右。目前，临床上常用的肝癌诊断标记物为甲 胎蛋白，简称AFP。然而，甲胎蛋白诊断肝癌的敏感度和特异度并不十分理想，在妊娠妇女、 急慢性肝炎、生殖腺肿瘤和胃肠道肿瘤等人群中也可能升高。而且，临床上有40%的肝癌患 者甲胎蛋白并不升高，呈现阴性。因此，寻找特异性和敏感性均高的诊断肝癌、特别是早期 肝癌的分子标记物，成为临床研究的重点和难点。
[0007] 目前临床上以大分子癌症标记物的单一或联合使用作为癌症诊断手段的研究较 多，而对于小分子类癌症标记物缺乏系统深入的研究。现代研究表明，内源性小分子物质多 胺类化合物与癌症的发生密切相关。国内外研究均表明癌症患者体内多胺水平高于正常人 群及非肿瘤患者体内多胺水平。多胺在生物体内多是水溶性的，通常在体液pH环境下完全 质子化，以多阳离子形式存在，常与RNA，DNA等多阴离子复合体结合在一起，并处于动态平 衡之中。多胺能直接参与生物体内的多种生理活动，如核酸的复制、转录、翻译，蛋白质的 合成和膜结构的稳定等，它是生物体生长和细胞代谢所必须的内源性微量活性物质。一般 在RNA，DNA及蛋白质合成增高之前，多胺含量急剧上升，如在癌症组织中多胺水平明显升 高，而多胺的过度积累还会导致细胞的凋亡及转变，使癌症进一步恶化。多胺包括1，3-丙 二胺、腐胺、尸胺、精脒、精胺、酰化精脒、酰化精胺等。多胺包括1，3-丙二胺、腐胺、尸胺、精 脒、精胺、酰化精脒、酰化精胺等。目前研究未能证实何种多胺为癌症的生物标记物，也没有 发现区分不同癌症的特异性生物标记物，这大大影响了多胺作为癌症辅助诊断、预后和疗 效评价指标等方面的应用。
【发明内容】
[0008] 本发明的目的是提供区分肝癌和肺癌的特异性多胺生物标记物，该标记物为人尿 液中的酰化精脒与S-腺苷蛋氨酸，确切地说是酰化精脒与S-腺苷蛋氨酸的浓度的比值。
[0009] 本发明采用UHPLC-MS/MS法分别检测肺癌患者与肝癌患者血浆样本中1，3-丙二 胺（DAP)，腐胺（PUT)，尸胺（CAD)，精脒（SH))，精胺（SPM)，胍丁胺（AGM)，鸟氨酸（ORN)， 赖氨酸（LYS)，精氨酸（ARG)，S-腺苷蛋氨酸（SAM)，酰化腐胺（NPUT)，酰化精胺（NSPM)，酰 化精脒（NSPD)与Y-氨基丁酸（GABA)等14种与多胺合成与分解代谢密切相关的物质。 (详见 Determination of polyamine metabolome in plasma and urine by ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry method:Application to identify potential markers for human hepatic cancer. Anal Chim Acta. 2013 ； 791:36-45)对于得到的检测数据，首先对所测得的尿