状或接近层流几何形状，用于接受羽流26并且用于载气与羽流26流动使得任何湍流可以被最小化。因此，在多种实施方案中，与基底12和离子源14之间的总路径以及离子源14和质谱流式细胞仪16的离子检测器之间的总路径对应的联合的延迟时间可以是在20msec和200msec之间。
[0031]此外，在多种实施方案中，基底12可以相对于ICP离子源14被放置使得对于每一羽流26的行进时间可以被最小化。例如，ICP离子源14可以被构造以包含基底12，用于提供紧密地耦合的激光-消融-1CP离子源。激光-消融-1CP离子源可以被配置带有具有用于激光脉冲24的光学入口、用于获得以及运输羽流的载气、以及用于产生元素离子组28的ICP离子源的整合的外壳(enclosure)。载气流可以被配置以在消融位置22扫除每一离散羽流26并且将每一羽流26直接传入等离子体44。
[0032]尽管在多种实施方案中，术语“细胞组”通常是关于在薄的切片的生物组织样品或未切片的组织完整样本中包含的细胞，但是本发明的教导可以被同等地应用于通常见于细胞培养物中的细胞。在多种方案中，所述细胞组18可以是细胞亚组的混合物，其每一亚组可以源自不同来源或不同生物实体。在此情况下，细胞的来源可以以感兴趣的特性之一为特征。例如，考虑到从多于一种生物实体获取的样品，其每一样品对应可以被多于一种有区别的元素标签Tn区别标记的细胞亚组。每一细胞亚组可以被合并为同一细胞组18，使得来自每一样品的细胞可以在细胞20的同一组中，共同地表达其有区别标记的元素缀合的抗体。合并的细胞组18可以被询问并且候选细胞20可以在没有候选细胞的来源的知识下，基于一些感兴趣的特性被鉴定和被选择。根据本发明的教导的元素分析后，元素标签Tn可以被检测并且对应的候选细胞20可以被鉴定为与特定的生物实体相关。相应地，感兴趣的特性与检测的元素离子24之间的关系可以被关联以确定指示该细胞亚组以及潜在地细胞的来源的感兴趣的特性。通常，本发明的教导的优势可以被应用于包括未破坏的细胞的细胞组，其中未破坏的候选细胞可以通过质谱流式细胞术被鉴定并且进一步分析其元素标签。
[0033]尽管已经被描述了努力以造成贯穿细胞分析的用于维持每一羽流26与对应的元素离子组28的空间分离的条件，但是本发明的教导的申请人认识到，一些空间扩展或重叠是可以存在的。相应地，申请人已经预期平均方法应用于两种或更多种获得的元素数据30，对从每一激光脉冲24产生的信息没有实质损失。可选地，联合每一获得的元素数据30为集合32的集成方法可以足以代表多维细胞分析的质谱流式细胞术信息部分。在多种实施方案中，例如FET的数据分析算法，可以被用于反卷积(de-convoluting)集成的数据集合32。不同形式的算法可以在分析系统10中被操作或可以在数据获取后被应用，如通常已知的。
[0034]此外，控制系统34可以被配置以用于根据本发明的教导的多重功能的目的。尽管控制系统34已被描述为与控制激光消融系统并且用于产生对应的元素标签数据30相关，典型地在逻辑控制下运行的控制系统34可以提供多种自动化水平或执行一系列反馈控制的活动，使分析系统10能够被自动化。在多种实施方案中，例如，控制系统34可以是与自动化的样品处理系统耦合的处理器驱动系统以执行询问和鉴定、信息记录和访问、激光脉冲的导引、质谱流式细胞术检测过程以及自动化地或通过使用者介入的数据关联。
【主权项】
1.一种用于通过质谱流式细胞术细胞分析的方法，所述方法包括: 提供以多于一种有区别的元素标签(Tn)标记的细胞组(18); 通过识别候选细胞(20)的位置，在所述细胞组(18)中选择所述候选细胞(20)，所述候选细胞(20)具有感兴趣的特性； 根据所述候选细胞(20)在所述细胞组(18)中的位置，记录所述候选细胞(20)的位置(22)； 在所述记录的位置(22)导引至少一束激光脉冲(24)至所述候选细胞(20)上并且产生所述至少一束激光脉冲(24)的每一束的离散羽流(26)，所述离散羽流(26)的每一个包括所述多于一种有区别的元素标签(Tn); 将所述离散羽流(26)的每一个引导进入电感耦合等离子体(14)并且产生与所述多于一种有区别的元素标签(Tn)的每一个对应的元素离子(28)的组； 通过质谱流式细胞术对所述离散羽流(26)的每一个同时地检测所述元素离子(28)的组的每一个；且 使所述检测的元素离子(28)与所述感兴趣的特性关联。
2.根据权利要求1所述的方法，其中提供以多于一种有区别的元素标签(Tn)标记的细胞组(18)包括以多于一种元素缀合的抗体标记所述细胞组(18)，所述多于一种元素缀合的抗体的每一个包括一种或更多种有区别的元素标签(Tn)。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述一种或更多种有区别的元素标签(Tn)选自包括过渡金属的组。
4.根据权利要求3所述的方法，其中使所述检测的元素离子(28)与所述感兴趣的特性关联包括从所述检测的元素离子(24)产生元素标签数据(30)并且记录针对所述感兴趣的特性的所述元素标签数据。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细胞组(18)包括多于一种细胞亚组，每种所述细胞亚组以多于一种有区别的元素标签(Tn)标记。
6.根据权利要求5所述的方法，还包括根据所述感兴趣的特性鉴定所述多于一种细胞亚组。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述感兴趣的特性通过荧光、磷光、反射、吸收、形状识别、物理特征或其组合的一种或更多种来鉴定。
8.根据权利要求4所述的方法，还包括在二维空间中表示所述候选细胞(20)在所述细胞组(18)中的所述位置(22) ο
9.根据权利要求4所述的方法，还包括在三维空间中表示所述候选细胞(20)在所述细胞组(18)中的所述位置(22) ο
10.根据权利要求8或权利要求9所述的方法，还包括制备具有所述感兴趣的特性的所述细胞组(18)。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述感兴趣的特性通过荧光、磷光、反射、吸收、形状识别、物理特征或其组合的一种或多种来鉴定。
12.根据权利要求10所述的方法，其中所述候选细胞(20)通过荧光发射来鉴定。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞组(18)是组织样品。
14.一种用于加元素标签的细胞分析的系统，所述系统包括: 至少一个询问器(19)，所述至少一个询问器(19)被配置以识别候选细胞(20)的位置(22)； 数据源(21)，所述数据源(21)具有记录所述候选细胞(20)的所述位置(22)的格式； 激光消融系统(23)，所述激光消融系统(23)与所述数据源(21)接口，所述激光消融系统(23)被配置以在所述候选细胞(20)的所述位置(22)导引至少一束激光脉冲(24);以及 质谱流式细胞仪(16)，所述质谱流式细胞仪(16)与所述激光消融系统(23)耦合，所述质谱流式细胞仪(16)被配置以检测与所述候选细胞(20)缔合的所述元素标签。
15.根据权利要求14所述的系统，其中所述至少一个询问器(19)被配置以识别具有感兴趣的特性的所述候选细胞的所述位置(22)并且所述数据源(21)进一步被配置格式以记录所述感兴趣的特性。
16.根据权利要求15所述的系统，还包括控制系统(34)，所述控制系统(34)被配置以使所述激光消融系统(23)与所述数据源(21)接口。
17.根据权利要求16所述的系统，其中所述控制系统(34)被配置以访问所述数据源(21)并且以在所述候选细胞的所述位置(22)导引所述至少一束激光脉冲(24)。
18.根据权利要求15所述的系统，其中所述至少一个询问器(19)选自光学显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、共聚焦显微镜以及其任何组合。
19.根据权利要求14所述的系统，其中所述数据源(21)包括选自字母数字、发射图像、条形码、射频识别(RFID)以及其任何组合的格式。
20.根据权利要求14所述的系统，其中所述质谱流式细胞仪(16)包括离子检测器以及所述候选细胞的所述位置和所述离子检测器之间界定的总路径，所述总路径被配置以使能够实现在20至200msec之间的联合的延迟时间。
【专利摘要】互相排斥的基于细胞的分析技术的联合可以被应用于同一细胞组用于分析。同一细胞组可以被制备用于被每种技术分析，产生靶向用于质谱流式细胞术分析的候选细胞。此配置允许每种技术之间的信息的关联以同一细胞组产生多维细胞信息的矩阵。
【IPC分类】G01N15-10, C40B20-04, C12M1-34, H01J49-40, C40B20-02, C12Q1-00
【公开号】CN104838250
【申请号】CN201380055418
【发明人】弗拉迪米尔·巴拉诺夫
【申请人】富鲁达加拿大公司
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2013年10月22日
【公告号】CA2888308A1, EP2912433A1, US20140120550, WO2014063247A1