一种ldl-c定量检测方法
【技术领域】：
[0001] 本发明公开了一种通过联合遮蔽法定量测定LDL-C的检测方法，属于生物技术领 域。
【背景技术】：
[0002] 低密度脂蛋白（LDL)是人的血液中含量最多的脂蛋白，它所携带的胆固醇 (LDkC)被认为是动脉粥样硬化和冠屯、病的主要致病因素，临床检测已日益重要。
[0003] 目前尚没有真正意义的测定LDkC的参考方法。CDC测定LDkC暂定的参考方法 为超速离屯、法炬etaquantification，0 -定量法/BQ法），也为NCEP所推荐。此法测定的 LDkC，实际上包括脂蛋白（a) [Lp(a)]和中间密度脂蛋白（IDL)的胆固醇含量，也是评价其 他检测方法正确性的基础。此法需昂贵的设备、操纵复杂、费时且技术要求高，不易在普通 实验室开展。化iedewald公式计算法是目前应用较广的估测LDkC的方法，被NCEP推荐为 常规测定方法。其WVLDL组成恒定（VLDkC/TG= 0. 2,均Wmg/dl计）的假设为条件，具 有简便、直接、快速等优点。应用此公式计算山LDkC常受TC、TG和皿kC变异的影响，总 变异可达9. 5%。但在血清中存在CM、血清TG> 4. 52mmol/L(400mg/dl)、血清中存在异常 0脂蛋白时[III型高脂血症（HLP)]时不宜采用化iedewald公式法计算。色谱法和电泳 法因仪器、操纵要求高等种种原因临床常规实验室也较少应用，多用于脂蛋白的研究。
[0004] 匀相法因其样本用量少、不需作离屯、沉淀分离处理、具精密度高、与F公式法相关 性好、可实现自动化而为临床实验所瞩目。匀相法推广应用的技术关键是其检测试剂的研 发，方法很多，但其原理相似，在反应体系中有选择地使LDL-C在显色反应中被测定，但匀 相法由于技术操作难度原因可能导致屏蔽LDL-C不完全，直接影响测定结果的准确性。匀 相法测定LDkC国外（如日本、美国）起步较早，技术也较成熟，其中W表面活性剂法组成 的商品试剂盒W日本第一化学株式会社、英国朗道德产品为代表。目前国内临床实验室采 用匀相法测定LDkC的试剂多从日本进口，如日本一化、和光出品的试剂，或国内采用国外 技术生产的试剂，如利得曼、申索公司的产品，其价格较高。
【发明内容】
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[0005] 本发明的目的在于，克服上述技术背景的不足，提供一种准确度高、重复性好、抗 干扰能力强、基质稳定、可用于全自动生化分析仪等特点的达到国际水平的用于检测LDkC 的定量检测法。采用液体双试剂，由分别放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1主 要含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体、表面活性剂1、胆固醇脂酶；所述试剂2主要含有表 面活性剂2、4-氨基安替比林、过氧化物酶、胆固醇氧化酶。
[0006] 本发明的技术方案；试剂1中聚阴离子氯化巧和LDL-C单克隆抗体共同作用下，使 血清中游离LDL-C产生凝集效应并发生抗原抗体反应形成抗原抗体复合物，达到联合遮蔽 LDkC的效果。血清中皿UVLDL及CM则在表面活性剂辛基苯基聚氧己締離作用下被解离 并释出来的微粒化化〇1分子与胆固醇脂酶试剂产生不完整的TRINDm?反应。当加入试剂2 时，含有对LDL有特异作用的表面活性剂聚己二醇8000能水解LDL释放出微粒化化ol分 子，参与完整的TRIND邸反应，在全自动生化分析仪即可得出血清中LDkC的浓度。
[0007]本发明的具体实施基本操作如下：
[000引 1.试剂1的制备：
[0009] 在烧杯中加入500na-700ml纯化水，加入M0PS08-10g，常温下揽拌3-5分钟，加入 M0PS0钢盐9-llg，常温下揽拌3-5分钟，加入胆酸钢15-25g，常温下揽拌3-5分钟，加入氯 化巧0. 4-0. 5g，常温下揽拌2-3分钟，加入己二胺四己酸二钢盐0. 1-0. 2g，常温下揽拌2-3 分钟，加入辛基苯基聚氧己締離2-4ml，常温下揽拌2-3分钟，加入胆固醇醋酶10-14KU， 常温下揽拌2-3分钟，加入硫酸葡聚糖8-12g，常温下揽拌3-5分钟，加入载脂蛋白B单克 隆抗体50-150ml，常温下揽拌3-5分钟，最后加入N-己基间甲基苯胺-己哲丙基横酸钢 0. 1-0. 3g，常温下揽拌2-3分钟，其余用纯化水补足到1000ml。
[0010] 2.试剂2的制备：
[0011] 在烧杯中加入500na-700ml纯化水，加入M0PS08-10g，常温下揽拌3-5分钟，加入 M0PS0钢盐9-llg，常温下揽拌3-5分钟，加入聚己二醇800040-60g，常温下揽拌3-5分钟， 加入4-氨基安替比林0. 05-0. 2g，常温下揽拌2-3分钟，加入过氧化物酶1-2KU，常温下揽 拌2-3分钟，加入胆固醇氧化酶0. 4-0. 8KU，常温下揽拌2-3分钟，加入叠氮钢0. 01-0. 02g， 常温下揽拌2-3分钟，其余用纯化水补足到1000ml。
[001引 3.利用本发明方法配制的定量检测试剂盒的使用
[001引 （1)检测仪器；适用于各类全自动生化分析仪。
[0014] (2)待测血清；不溶血血清，2-8°C可稳定一周，避免脂浊。
[0015] (3)具体检测程序如下表1 ;
[0016] 表1样本检测操作程序
[0017]
【主权项】
1. 一种通过联合遮蔽法定量测定LDL-C的检测方法，其特征在于：采用液体双试剂，由 分别放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体、表 面活性剂1、胆固醇脂酶；所述试剂2含有表面活性剂2、4_氨基安替比林、过氧化物酶、胆 固醇氧化酶。
2. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂1中金属氯化物可使游离LDL-C发生凝 集，并与LDL-C单克隆抗体发生抗原抗体反应形成抗原抗体复合物，达到联合遮蔽的效果。
3. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂1中金属氯化物为二价金属氯化物氯化 钙，其浓度范围在〇. 4g/L-0. 5g/L。
4. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂1中LDL-C单克隆抗体为载脂蛋白B单 克隆抗体，其浓度范围在50ml/L-150ml/L。
5. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂1中表面活性剂1为辛基苯基聚氧乙烯 醚，其浓度范围在2ml/L-4ml/L。
6. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂1中胆固醇脂酶含量为10KU/L-14KU/ L0
7. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂2中表面活性剂2为聚乙二醇8000,其 浓度范围在40g/L-60g/L。
8. 根据权利要求1所述，其特征在于，所述试剂2中4-氨基安替比林含量为 0. 05-0. 2g/L、胆固醇氧化酶含量为0. 4KU/L-0. 8K U/L、过氧化物酶含量为1KU/L-2KU/L。
【专利摘要】本发明公开了一种通过联合遮蔽法定量测定LDL-C的检测方法。本方法采用液体双试剂，由分别放置的试剂1和试剂2组成，其中，所述试剂1含有金属氯化物、LDL-C单克隆抗体及定量酶试剂；所述试剂2含有表面活性剂、显色剂、防腐剂、抗干扰物质及反应促进剂。本发明具有显色特性好、准确度高、试剂成分稳定、操作简单适用于临床各种全自动生化分析仪的特点。用于检测人体血清中LDL-C的含量。
【IPC分类】G01N33-92, G01N33-531
【公开号】CN104865392
【申请号】CN201510227852
【发明人】王贤俊, 郭二豪, 郑蓓蕾, 江新涛
【申请人】王贤俊
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月2日