一种萝芙木药材中利血平含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种萝芙木药材中利血平含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 萝芙木是一种药用植物，是夹竹桃科植物萝芙木Rauvolfia verticillata (Lour. )Bai 11.的根，全世界有135个种，中国有9个种，世界上的主要分布在非洲、美洲、亚 洲、大洋洲岛崎，中国主要分布在云南，其中印度、泰国、马来西亚、广西、广东、海南、贵州、 台湾有少量分布。自从1952年Muller从萝芙木中提取利血平，发现其有降压和安定的作 用，萝芙木被引起了广泛的重视。
[0003] 萝芙木中主要成分是利血平，又名18- (3,4,5_三甲氧基苯甲酰）利血平酸甲酯， 分子式为C33H1(lN20 9，在酸性溶液中稳定，在碱性溶液中加热容易水解，有降压和中枢作用。 降压作用：利血平能降低血压和减慢心率，其作用非常缓慢、温和而持久；中枢作用：利血 平对中枢神经系统具有持久性的安定作用，可能与它在脑组织内释放5-羟色胺或去甲肾 上腺素有关。
[0004] 除利血平外，萝芙木中还含有育亨宾、阿吗碱、蛇根亭碱、阿吗灵、山马蹄碱、萝芙 木甲素等多种萜类吲哚生物碱，熊果酸。育亨宾有治疗动脉硬化、风湿病的作用。
[0005]《中国药典》2010年版中对利血平含量测定，在供试品溶液的制备中，取利血平原 料约50mg，置100ml量瓶中，加冰醋酸3ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密取适量， 用甲醇定量稀释制成每lml约含40ug的溶液；另取利血平对照品，同法操作。色谱分析条 件：色谱柱为十八烷基键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-1 %乙酸铵（46 :54);检测波长为 268nm。本法是利血平原料的方法。
[0006]《中华人民共和国国家知识产权局》专利申请号为200610048619. 5,公开号为CN 101071129A，专利名称为"测定萝芙木属植物中利血平含量的高效液相色谱方法"。其特征 在于：（1)取萝芙木药粉2g，加甲醇50ml，水浴回流提取1小时；（2)色谱柱以十八烷基键合 硅胶为填充剂；（3)流动相为乙腈、甲醇、0. 01%三乙胺水溶液组成的混合溶剂，其组成的体 积比例为乙腈45%~35%、甲醇10%~25%、三乙胺水溶液45%~40% ; (4)检测波长268nm， 柱温40 °C，流速1. 0 ml/min，进样体积20ul。本发明中没有考虑到利血平在甲醇中的溶解 度有限，故萝芙木药材中利血平采用甲醇来提取会有提取不完全的可能性；本发明是在水 浴回流温度条件下提取，温度高于60°C，而利血平60°C会水解，这样会影响测定结果的准 确度。
[0007]《云南中医学院学报》2007年第30卷第2期的论文"高效液相色谱法测定萝芙木 中利血平的含量"，报道了 ：（ 1)取萝芙木药粉2g，加甲醇50ml，浸泡2h，水浴回流lh ; (2)色 谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂；（3)流动相为四氢呋喃-甲醇-0. 3%磷酸（30 :15 :55); (4)检测波长268nm，柱温35°C，流速1.0 ml/min。本发明中没有考虑到利血平在甲醇中的 溶解度有限，故萝芙木药材中利血平采用甲醇来提取会有提取不完全的可能性；本发明是 在水浴回流条件下提取，温度高于60°C，而60°C以上会水解；本发明中使用高达30%的四氢 呋喃，容易腐蚀仪器管道和垫圈，这样会影响测定结果的准确度。
[0008] 由于现有文献对萝芙木药材中利血平的测定缺乏系统的研宄，而且分析样品制备 的提取方法也存在甲醇对利血平的溶解度有限、水浴提取温度高、流动相成分复杂的缺点， 所以有必要寻求更有效测定萝芙木药材中利血平的测定方法。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是克服现有技术存在的不足，提供一种提取完全，比较准确地测定 萝芙木药材中利血平含量的方法。
[0010] 为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案： 一种萝芙木药材中利血平含量的测定方法，包括以下步骤： a、 取利血平对照品，加醇溶液制成定量用对照品溶液； b、 萝芙木药材加醇溶液，称定重量，加热回流，补重，即得供 试品溶液； c、 依据高效液相色谱法测定，十八烷基键合硅胶填料的柱子， 乙腈：0. 02%二乙胺溶液=80 :20为流动相，检测波长为268nm，流 速lml/min。取对照品溶液和供试品溶液分别进样，得到色谱图； d、 记录对照品溶液和供试品溶液对应的色谱峰的峰面积，以外 标法计算利血平的含量，即得。
[0011] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤b所述醇溶液优选为醋酸、 甲醇和水的混合溶液。本发明在样品制备过程中，采用了醋酸调节pH值；优选是甲醇溶液， 作为样品提取溶剂；采用低温加热提取。这样可以保证在pH值5以下、60°C温度以下加热 回流提取、70%甲醇溶液为提取溶剂，保证了利血平的稳定性和溶解性，提高测定结果准确 度。
[0012] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤b所述甲醇溶液的醋酸的体 积浓度优选为6%~20%。可以避免提取所用溶剂pH值高于5,导致利血平水解。最佳体积 浓度为15%。
[0013] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤b所述甲醇溶液的甲醇体积 浓度优选为50%~80%。可以避免高浓度和低浓度的溶剂提取不完全。最佳体积浓度为 70% 〇
[0014] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤b中萝芙木药材与醇溶液体 积比例为1 :8~1 :25,最佳比例为1 :15。
[0015] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤b中加热回流温度优选为不 超过60°C、时间优选为1~2h。
[0016] 在上述测定萝芙木药材中利血平含量的方法中，步骤C中，分别用甲醇-水、乙 腈-水、甲醇-〇. 05%磷酸、乙腈-0. 05%磷酸，测定利血平的峰形均较差，而改用乙腈-0. 02% 二乙胺（80 :20)利血平的峰形和分离度均较好。乙腈体积比例优选50%~85%，最佳比例 为80% ;二乙胺体积比例优选50%~15%，最佳比例为20% ;二乙胺体积浓度优选为0. 01%~ 0. 2%，最佳浓度为0. 02%。
[0017] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 1、在样品制备过程中，采用了加热回流提取的方法，利用热效应增强了溶剂对药粉的 穿透力，有助于萝芙木药材中利血平的提取，提高了分析的准确度。
[0018] 2、本发明的检测方法中溶剂采用甲醇或乙醇，利血平在甲醇或乙醇中有一定的溶 解性，选甲醇或乙醇作溶剂，提高了分析的准确度。
[0019] 3、本发明的检测方法中以醋酸控制溶剂的pH值在5以下，这样 避免萝芙木药材中提取出的利血平在pH值高于5的情况下水解，提高了分析的准确 度。
[0020] 方法学考察： 对照品储备液取利血平对照品19. 25mg，置50ml量瓶中，加冰醋酸7. 5ml，加70%甲 醇溶液至刻度，摇匀，制成〇. 3850mg/ml的对照品储备液。
[0021] 供试品溶液取萝芙木药材粉末约3. 5g，精密称定，置100ml圆底烧瓶中，加 7. 5ml冰醋酸，再加70%甲醇溶液42. 5ml，称重，加热回流处理lh，用70%甲醇补重，即得供 试品溶液。
[0022]