一种mage-a9的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于癌症药物技术领域，具体设及一种MAGE-A9的用途。
【背景技术】
[0002] 肺癌是最常见的癌症类型，同时也是全球首位癌症致死原因。肺癌可分为非小细 胞肺癌（NSCLC)和小细胞肺癌（S化C)。NSCLC患者的预后主要取决于诊断时所处的阶段。 尽管开展早期筛查，但大多数肺癌都在进展期被检查出，运些肺癌中约85%为NS化C。虽 然使用多种治疗手段，包括外科手术、放疗、化疗和生物治疗等，运些患者的预后仍然较差， 5年生存率大约为10%，中位生存时间16到18个月。随着基因转移技术的发展，基因祀向 治疗成为NSCLC治疗的新方法。因此，探寻新的生物分子标志物来预测NSCLC的进展，指导 精准性的治疗，W改善患者生活质量，延长患者生命，是临床非常期待的。
[0003] 黑色素瘤相关抗原（melanoma-associatedantigen,MAGE)基因是一组肿瘤相关 抗原，首先从黑色素瘤中发现。该家族成员均含一段由约200个氨基酸组成的保守序列，称 为M(；E同源结构域。在人类该基因包含37个蛋白编码基因，基于其不同的组织特异性和 基因结构的差异，MAGE基因被分为MAGE-UMAGE-A，MAGE-B，MAGE-C)和MAGE-II(MAGE-D， MAGE-E，MAGE-F，MAGE-H，MAGE-L和NDN)两大亚组。MAGE-II几乎普遍表达在正常组织及 肿瘤细胞中，MAGE-I被限制表达在少数正常组织中，如精母细胞、胎盘、W及在胚胎发育的 某些阶段，在正常成人组织中则沉默或低表达，但在某些肿瘤中重新表达，因为运种特殊的 表达模式，它们被归类为肿瘤睾丸抗原（cancer/testisantigen,CTAg)基因家族的成员， 其潜在的免疫原性为其成为肿瘤治疗疫苗提供潜在的研究方向。MGE蛋白的功能是未知 的，但由于MAGE-I基因在除睾丸和胎盘W外的正常成人组织中不表达，并且在大量肿瘤性 病变中表达，MGE-I基因被认为是肿瘤特异性抗原和癌症免疫治疗的理想祀标。同时由于 它们出现在MHC-II类分子表面，可被细胞毒性T淋己细胞（巧totoxTlympho^te，CTL) 识别，因此是CTL介导的特异性免疫治疗的理想祀分子。
[0004]MAGE-A是一个多基因家族，由位于染色体Xq28位点上的12个同源基因MAGE-A1 到MAGE-A12组成，一些表达在肺癌上的MAGE-A基因已成为NSCLC免疫治疗的研究目标。 MGE-A9常表达于泌尿系肿瘤，可为肾癌和膀脫癌的预后提供参考，此外它也同样过表达于 表皮T细胞淋己瘤、食管腺癌、喉鱗状细胞癌和肝癌中。据现有文献所知，在非小细胞肺癌 腺癌中MAGE-A9表达和它与临床病理参数之间的关系，W及MAGE-A9对肺癌侵袭迁移的影 响尚未有研究。
【发明内容】
[0005] 发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种MGE-A9在制 备用于治疗肺癌药物中的应用。
[000引技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
[0007] MGE-A9在制备用于治疗肺癌药物中的应用
[0008] 所述的用途中，所述MGE-A9是非小细胞肺癌基因治疗的一个祀点，所述的药物 针对该祀点设计而成。
[0009] 有益效果：与现有的技术相比，本发明采用组织忍片和免疫组化技术检测肺腺癌 中MAGE-A9的表达情况，发现MAGE-A9蛋白的表达在肺腺癌组织中明显升高，肺腺癌组织中 的MAGE-A9表达水平与肿瘤分化和直径大小有关，MAGE-A9在肺腺癌组织中高表达是肺腺 癌预后差的独立预后因素。此外通过Westernblot、CCK8法、Transwell小室等技术，在体 外环境的试验中研究下调MGE-A9基因表达对NSCLC细胞侵袭迁移等生物学行为的影响， 发现特异性的siRNA序列可W有效抑制人非小细胞肺癌细胞株SPC-A-1和NCI-H1975中 MAGE-A9蛋白的表达。RNA干扰抑制MAGE-A9表达后，SPC-A-1和NCI-H1975细胞的增殖减 慢，调亡增多，细胞迁移和侵袭能力降低，MGE-A9是非小细胞肺癌基因治疗的一个祀点，在 制备用于治疗肺癌药物中将具有广泛的应用。
【附图说明】
[0010]图1是肺腺癌免疫组化照片图；A1I肥染色阳性脑Vision法X40)，A2I肥染 色阳性巧nVision法X400)，癌旁组织B1I肥染色阴性巧nVision法X40)，B2I肥染色 阴性巧nVision法X400);
[0011] 图2是肺腺癌患者的五年生存曲线分析图，A:MAGE-A9高表达组比MAGE-A9低表 达或不表达组生存率低；B:女性比男性总生存率高；C:无淋己结转移的病例比有淋己结转 移的总生存率高；D:分化程度=1代表高分化组，分化程度=2代表中分化组，分化程度= 3代表低分化组，分化程度越高，患者的总生存率越高；
[0012] 图3是四种NSCLC细胞株MAGE-A9的表达结果图；
[0013] 图4是RNAi干扰后各组SPC-A-1细胞内MAGE-A9的表达结果图，（冲<0. 05);
[0014] 图5是各组细胞生长曲线图；A为MAGE-A9-siRNA-3干扰对SPC-A-1细胞增殖能 力的影响，B为MGE-A9-siRNA-3干扰对NCI-H1975细胞增殖能力的影响；
[0015] 图6是各组细胞迁移侵袭的能力结果图，（冲<0.05) ;A为MAGE-A9-siRNA-3干 扰对SPC-A-1、NCI-H1975细胞迁移能力的影响，B为MAGE-A9-siRNA-3干扰对SPC-A-1、 NCI-H1975细胞侵袭能力的影响；
[001引图7是各组细胞侵袭能力的结果图（X400)。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。
[001引W下实施例中使用的主要试剂为：二步法抗小鼠免疫组化检测试剂盒 (MAGE-A9):基因科技上海有限公司；鼠抗人MAGE-A9单克隆抗体：英国Abeam公司；辣根 过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgGOl+L)(免疫组化试验用）：美国化ko公司；抗体稀释 液：北京中山生物技术有限公司；O.Olmol/L巧樣酸缓冲液（P册.0):北京中山生物技术有 限公司；DAB:美国Sigma公司；二甲苯、中性树胶等由病理科提供。DAB工作液：DAB粉剂 20mg溶解于50mL0.Olmol/LPBS中，再用定性滤纸过滤，保存在栋色瓶中（使用前配制）； 根据需要加入由0.Olmol/LPBS液配制的3% &02数滴帮助显色。人非小细胞肺癌腺癌 细胞株A549、SPC-A-1、NCI-H1975、NCI-H1650购自中国科学院细胞库。RPMI-1640 :美国 Gibco公司；胎牛血清：美国HyClone公司；膜蛋白酶：美国Gibco公司；BCA蛋白测定试剂 盒：美国Thermo公司；MAGE-A9抗体：美国Abeam公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠 IgG(H+L)(westernblot试验用）：美国Proteintech公司；E化发光试剂盒：Beyotime公 司；Lipofectamine? 2000 :美国Invitrogen公司；CCK8细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒： Beyotime公司。RPMI-1640完全培养液：分别加入RPMI-1640与胎牛血清混匀，使其终浓 度分别为90%，10%，IX，4°C保存。细胞冻存液：将RPMI-1640完全培养液、胎牛血清和 DMS0 按 5 : 4 : 1 比例配制，4°C保存。1XTBST1L:取Tris2.42g、化C1 8.0g、Tween-20 0. 5血，混合溶解，定容至比，常溫保存。1X转膜BufferIL:甘氨酸14. 4g、Tris3. 03g， 加适量双蒸水揽拌溶解，再加200mL无水甲醇，定容至lU混合均匀（用时配制）。封闭液 100血：取脱脂奶粉5g，加入100血1XTBST，混合溶解即可（需用时配制）。
[0019]W下实施例中使用的主要仪器如下：组织忍片制作仪：美国Beecher In