基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药技术领域，涉及一种基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法。
【背景技术】
[0002]近年来，各种类型的提纯蒙脱石矿物被广泛应用于医药卫生、食品、饲料和化妆品等多个领域。以蒙脱石为主要成分的胃肠道抗腹泻药物如蒙脱石散(思密达)，已被确认为OTC药物，广泛用于治疗腹泻或其它胃肠道疾病，其抗腹泻药理机制一般描述为肠道粘膜保护剂，对消化道内的病毒、细菌及其产生的毒素有固定、抑制作用；对消化道的粘膜有覆盖能力，并通过与粘液糖蛋白相互结合，修复、提高粘膜屏障对攻击因子的防御功能。以蒙脱石为主要成分的饲料脱霉剂产品被广泛用于动物养殖业中，主要用途是吸附饲料或饲料原料中的霉菌毒素，预防或治疗动物肠道疾病或由于霉菌毒素导致的其它相关疾病。可以说蒙脱石产品在实际生活中已很普遍，但如何快速直观的鉴定蒙脱石或含有蒙脱石成分的产品，一直是产品质量检测和质量控制的难题。
[0003]—般对于蒙脱石矿物化学组成和结构的鉴定方法主要有:X-射线衍射分析、红外光谱分析、原子吸收光谱分析、电感偶合等粒子质谱(ICP-MS)分析、差热分析、扫描电镜和透射电镜分析等；对物理化学性能的表征主要有:阳离子交换容量分析、吸蓝量、胶质价、粘度分析等等。这些实验室分析方法可以很好的表征蒙脱石本身的化学组成和结构特征，对于蒙脱石矿物的鉴定具有一定的科学性和可行性。但这些实验室分析方法在实际应用中存在样品制备复杂、所用设备多属于实验室大型仪器设备、操作技术性强、使用成本高、样品测试周期长等，无法满足快速、简便、实用的检测需求。此外，由于蒙脱石是具有层状结构的铝硅酸盐类矿物，其具有良好的吸附性能，对被吸附物质的鉴定一直是蒙脱石吸附性能表征的难题，尤其是如何直接观察蒙脱石对特异性可染色物质的吸附作用，对于蒙脱石在医药保健、食品、饲料添加剂以及环境监测等领域的应用具有重要意义。
[0004]已有专利-可吸附玉米赤霉烯酮的改性蒙脱石及其制备方法(专利号:2012101647306)表明，蒙脱石可以吸附玉米赤霉烯酮，但都是通过复杂的实验室检测手段，如X-射线衍射、傅立叶变换红外分析、扫描电镜分析及多种吸附试验进行鉴定，但其对脂质的吸附特征性检测方法尚未见报道。
[0005]偏振光显微镜是一种用于研究各向异性材料的特殊光学显微镜，目前在大多数实验室都有配置。它主要在普通光学显微镜的入射光路中加入一个起偏振片，将普通光改变为偏振光，透过具有各向异性或双折射性的样品发生双折射，通过检偏振片产生光的程差可以显示出不同的亮度。双折射性是矿物晶体的基本特性，因此，偏光显微镜被广泛应用于矿物、化学等领域。而蒙脱石就是一种典型双折射性矿物晶体，可以通过偏振光显微镜进行辨别。
[0006]油红O是一种使用最广泛的红色脂溶性染料，可与组织、细胞或其他含中性脂质的样品中的脂质发生特异性结合，将脂质染成红色。脂类染色常用的其他染料还有苏丹II1、苏丹IV、苏丹黑以及荧光探针染料尼罗红和Bodipy等。
[0007]针对蒙脱石对脂质的吸附作用，利用偏振光显微镜对蒙脱石晶体的直接检测，可以准确定位蒙脱石在有机体内如动物或人体胃肠道中的位置。而脂质-油红结合所呈现的红色是表征脂质存在的方式之一，将偏振光矿物晶体显微镜检测技术与脂质-油红染色呈现技术相结合，可以快速、准确检测蒙脱石对脂质的吸附性能。因此，本发明是依据蒙脱石矿物晶体的结构特征，结合脂质-油红染色的特异性，将常规的偏振光显微镜检测技术发展成为蒙脱石对脂质吸附性能的快速特异性检测方法。
【发明内容】
[0008]本发明所要解决的技术问题是提供一种将偏振光显微镜用于蒙脱石矿物晶体的鉴定以及蒙脱石吸附脂质的直观检测方法。可用于蒙脱石及其含有蒙脱石的产品的质量监测和质量控制，人体临床和动物临床样本的检测，观察蒙脱石矿物晶体与脂质的共定位，确认蒙脱石矿物晶体吸附脂质的作用，可定性和半定量表征蒙脱石对脂质的吸附性能。
[0009]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:提供一种基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，包括下列步骤:
[0010]1、试样制备:所用原料是天然蒙脱石，将其与高脂食物或饲料混匀制成涂片，用油红O对涂片进行染色，然后制成用于偏振光显微镜下观察的载玻片试样。
[0011]2、偏振光显微镜检查:调节偏振光显微镜并观察试样，获取待测试样的清晰图像；同时在同一位置除去检片镜观察油红O对脂质的染色图像。
[0012]3、脂质吸附分析:由步骤2所得的图像，对蒙脱石晶体和脂质进行共定位对比，分析蒙脱石对脂质的直接吸附作用。
[0013]4、所述的蒙脱石与高脂饲料配比:取0.5克高脂饲料(21%脂质，1.25%胆固醇和77.75%普通饲料)加200微升蒙脱石(400晕克/晕升)，再加入I _升生理盐水，混勾，24小时后制成涂片。
【附图说明】
[0014]图1为本发明中所用蒙脱石制成涂片，经油红O染色后在明场下的观察图(400X)。
[0015]图2为本发明中所用蒙脱石制成涂片，经油红O染色后在偏振光下的观察图(400X)ο
[0016]图3为高脂饲料制成涂片，经油红O染色后在明场下的观察图(400X)。
[0017]图4为高脂饲料制成涂片，经油红O染色后在偏振光下的观察图(400X)。
[0018]图5为蒙脱石和高脂饲料混匀后制成涂片，经油红O染色后在明场下的观察图(400X)ο
[0019]图6为蒙脱石和高脂饲料混匀后制成涂片，经油红O染色后在偏振光下的观察图(400X)ο
[0020]图7为蒙脱石吸附高脂饲料中脂质的直观检测图片(400X)。
【具体实施方式】
[0020]下面结合具体实施例，进一步阐释本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读本发明所述的内容后，本领域技术人员可以对本发明做各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0021]实施例1
[0022]基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附高脂食物或饲料中脂质的检测方法，主要包括以下步骤:
[0023]1、试样制备:将蒙脱石，高脂食物或饲料，以及两者混匀后分别制成涂片，用油红O染色，然后制成用于显微镜下观察的载玻片试样；根据相应标准确定需制备待测样片数。
[0024]2、偏振光显微镜检测:将制得的样片置于载物台上，在明场下得到清楚的图像，用与显微镜配套的数码设备获取图像保存于计算机中。调节偏振光显微镜，使起偏器和检偏器正交。插入补偿片，调节起偏器或检偏器成适当角度，得到清楚明亮图像，用与显微镜配套的数码设备获取图像保存于计算机中。
[0025]3、吸附分析:由步骤2所得图像直接观察脂质与蒙脱石晶体的相对位置，进一步分析蒙脱石对脂质的吸附作用。
[0026]上述蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，适用于甘油三酯，胆固醇酯等可以染色标记的中性脂质，同样适用于蒙脱石对其他各类可以特异性染色物质的吸附检测。
【主权项】
1.基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，包括下列步骤: (1)试样制备:所用原料是天然蒙脱石；将其与高脂食物或饲料混匀后涂片，用油红O对涂片进行染色，然后制成用于在偏振光显微镜下观察的载玻片试样； (2)偏振光显微镜检查:调节偏振光显微镜并观察试样，获取待测试样的清晰图像；同时在同一位置除去检片镜观察油红O对脂质的染色图像； (3)脂质吸附分析:由步骤2所得的图像，对蒙脱石晶体和脂质进行共定位对比，观察分析蒙脱石对脂质的直接吸附作用； (4)所述的蒙脱石与高脂饲料配比:取0.5克高脂饲料(21%脂质，1.25%胆固醇和77.75%普通饲料)加200微升蒙脱石(400晕克/晕升)，再加入I _升生理盐水，混勾，24小时后制成涂片。2.根据权利要求1所述的基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，其特征在于:用所述油红O染液(丙二醇配置5毫克/毫升油红染液)60°C染色试样30分钟，甘油明胶封片固定。3.根据权利要求1所述的基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，其特征在于:所述蒙脱石为蒙脱石矿物晶体，所吸附的各种脂质为能够被特异染色的中性脂质，包括甘油三脂、胆固醇酯等。
【专利摘要】本发明涉及一种基于偏振光显微镜观察蒙脱石吸附脂质的直观检测方法，首先将蒙脱石与高脂食物或饲料混匀，然后将样品制成涂片，通过中性脂质染料油红0对涂片进行染色，将制好的涂片放在偏振光显微镜下进行检测。观察蒙脱石对高脂食物中脂质的吸附性能。本发明是物理检测方法，可直接观察蒙脱石对脂质的吸附，操作简单，直观方便。
【IPC分类】G01N21/21
【公开号】CN105203463
【申请号】CN201510571914
【发明人】翟永功, 许鹏飞, 戴书
【申请人】北京师范大学
【公开日】2015年12月30日
【申请日】2015年9月10日