一种注射用活血通络成分检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及分析化学领域，特别涉及一种注射用活血通络成分检测方法。
【背景技术】
[0002] 高脂血症是指血脂水平过高，血脂异常者往往伴有多种心血管危险因素，可直接 引起一些严重危害人体健康的疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、胰腺炎等。高脂血症的临床 表现主要是脂质在真皮内沉积所引起的黄色瘤和脂质在血管内皮沉积所引起的动脉硬化。 血脂水平和下降会使得心血管疾病的发生率和死亡率随着血清总胆固醇和LDL胆固醇水 平的下降而降低。
[0003] 桃红四物汤为调经要方之一，是《玉机微义》转引的《医皇元戎》中的一个方子，也 称加味四物汤，桃红四物汤这一方名始于见《医宗金鉴》。该方由四物汤加味桃仁、红花而 成，功效为养血活血。现代研究表明，桃红四物汤具有扩张血管、抗炎、抗疲劳、抗休克、调节 免疫功能、降脂、补充微量元素、抗过敏等作用。
[0004] 注射用活血通络是在"桃红四物汤"基础上，根据临床经验精简而成，由赤芍、川 芎、桃仁等药味组成，具有活血化瘀、行气通络之功效，临床用于治疗中风中经络（脑血栓 形成）之急性期证属痰瘀阻络者，半身不遂，口舌歪斜，舌强语謇，头晕目眩，舌泽暗淡等。 注射用活血通络主要含苷类、有机酸及糖类成分。
[0005] 随着我国中药制剂的快速发展，中药制剂的质量管理问题也受到了人们的广泛关 注，其质量的优劣会直接影响到医疗质量和患者生命安危。影响中药制剂质量的因素主要 包括：
[0006] 1、原药材的质量
[0007] 中药材的质量好坏是直接影响中药制剂临床疗效的关键原因之一，由于目前中药 材的来源较为复杂，且品种繁多，许多药材市场常常以次充好从中取得大量的经济利益。此 外，现今我国药材市场对野生药材的供应相对缺乏再加上受到国家对野生自然资源采集的 限制许多地方采取用种植的药材来代替这种家种的药材会严重影响药剂的质量，使药材的 质量下降，特别是过量使用化肥，大幅度提升家中药材的产量，从而导致这与野生药材的气 味发生了改变，从而影响了中药的疗效。
[0008] 2、生产过程
[0009] 在中药制剂的每一个环节中从投料到制剂的制备都需要投料人员认真仔细的按 照工艺中的处方核查所投的药味及数量，如果少投或者多投都会影响到产品的整体质量。 此外，还要注意中药制剂的粉碎、浓缩、干燥、精制和提取等方面的工序，这对中药成品的成 分含量具有较大的影响作用。因此，在工艺设计时应根据药材的性质进行综合性的思考，选 择最优的制备条件和最佳工艺，并做好工序中的质量监督工作，从而保障中药制剂的质量。
[0010] 3、工艺用水、洁净区环境、工艺卫生
[0011] 在制剂时，工艺用水也是重要的一个步骤，如果工艺卫生和洁净区环境存在不合 格的情况，那将会直接引发微生物的滋生和污染，从而导致生产的制剂出现不合格的产品。
[0012] 4、包装材料及现代包装技术
[0013] 现今制剂的包装材料也是影响制剂质量的关键，例如塑料具有透气性和吸附性， 它既能保证液体药物的溶媒挥发，也会使其含挥发成分的药物性能改变，加速药物的分解， 使用劣质的保障袋，也会使有害的物质渗入制剂当中，此外，由于中药制剂具有剂型多、品 种繁杂和生产量小等特点，因此，就会出现因包装袋质量差而导致液体剂外漏、液体发生霉 变、药液与包装之间发生反应、固体制剂因为受潮变质等问题的出现，这严重影响制剂的质 量。
[0014] 因此，为了更好地对药品质量进行控制，保证其临床疗效，需建立全面评价该制剂 质量的方法。目前关于注射用活血通络的质量控制方法尚无明确报道，因此急需一种注射 用活血通络的质量控制方法。
【发明内容】
[0015] 有鉴于此，本发明提供了一种注射用活血通络成分检测方法。该检测方法具有良 好的精密度、线性关系、稳定性、重复性，回收率高，耐用性良好；注射用活血通络指纹图谱 的分离度、重现性均较好，信息全面，标示出21个共有峰，各批次样品相似度在0. 95以上。 本发明建立的注射用活血通络中5种成分的含量测定及指纹图谱研究方法为注射用活血 通络的质量控制提供依据；该方法简便可行、快速准确，可以作为评价注射用活血通络质量 的有效方法。
[0016] 为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
[0017] 本发明提供了一种注射用活血通络成分检测方法，取注射用活血通络供试品溶液 以及标准品溶液进行UPLC检测，UPLC检测的色谱条件为：
[0018] 采用C18色谱柱，以甲醇为流动相A相、酸的水溶液为流动相B相，梯度洗脱程序 为：0 ~6min，15% A - 28% A ;6 ~12min，28% A - 44% A ;12 ~20min，44% A - 75% A ; 20 ~25min，75% A ;
[0019] 根据UPLC检测结果，获得注射用活血通络成分及其含量。
[0020] 作为优选，UPLC检测的波长为230nm~260nm和/或321nm。
[0021] 在本发明提供的一些实施例中，检测波长为230nm~260nm时，色谱峰较全面且各 色谱峰分离较好，适宜指纹图谱的建立，同时适宜检测苦杏仁苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷 和芍药苷含量。
[0022] 优选地，UPLC检测的波长为260nm。
[0023] 在本发明提供的一些实施例中，阿魏酸最大吸收波长为321nm，因此选择321nm为 阿魏酸含量测定波长。
[0024] 作为优选，酸为磷酸、甲酸、冰乙酸或三氟乙酸中的一种或两者以上的混合物。
[0025] 优选地，酸为甲酸。
[0026] 作为优选，在酸的水溶液中，酸的体积百分数为0. 05%~0. 10%。
[0027] 优选地，在酸的水溶液中，酸的体积百分数为0. 05%。
[0028] 作为优选，UPLC检测的流动相流速为0· 2~0· 8mL/min。
[0029] 优选地，UPLC检测的流动相流速为0· 4mL/min。
[0030] 作为优选，UPLC检测的柱温20°C~30°C。
[0031] 优选地，UPLC检测的柱温20 °C。
[0032] 作为优选，C18色谱柱为C18小粒径色谱柱。C18小粒径色谱柱能够实现在相对较 短的时间内分离成分且分离度好的效果。
[0033] 在本发明提供的一些实施例中，C18色谱柱为Thermo C18柱（3X 100mm，1. 7 μ m) 或 Agilent C18 (3 X 100mm，1.8 μ m)。
[0034] 作为优选，标准品为苦杏仁苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷或阿魏酸中的一 种或两者以上的混合物。
[0035] 优选地，标准品为苦杏仁苷、羟基芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷和阿魏酸的混合物。
[0036] 作为优选，标准品中羟基芍药苷10~100 μ g/mL，苦杏仁苷300~2000 μ g/mL，芍 药内酯苷10~200 μ g/mL，苟药苷400~2000 μ g μ g/mL，阿魏酸1~30 μ g/mL。
[0037] 优选地，标准品中羟基芍药苷20~60 μ g/mL，苦杏仁苷420~1082 μ g/mL，芍药 内酯苷40~121 μ g/mL，苟药苷560~1502 μ g μ g/mL，阿魏酸10~22 μ g/mL。
[0038] 在本发明提供的一些实施例中，标准品中羟基芍药苷20 μ g/mL，苦杏仁苷 420 μ g/mL，苟药内酯苷 40 μ g/mL，苟药苷 560 μ g μ g/mL，阿魏酸 10 μ g/mL。
[0039] 在本发明提供的一些实施例中，标准品中羟基芍药苷60 μ g/mL，苦杏仁苷 1082 μ g/mL，苟药内酯苷 121 μ g/mL，苟药苷 1502 μ g/mL，阿魏酸 22 μ g/mL。
[0040] 在本发明提供的一些实施例中，UPLC检测的理论板数按芍药苷峰计算不低于 3000 〇
[0041] 本发明还提供了该检测方法在构建注射用活血通络指纹图谱中的应用；
[0042] 构建指纹图谱的方法包括：采用本发明提供的检测方法对不同批次的注射用活血 通络进行UPLC检测，根据UPLC检测结果，标定共有峰，以中位数法建