地枫皮的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及地楓皮的质量控制方法，属于药物质量控制技术领域。
【背景技术】
[0002] 中药地楓皮为八角属植物地楓皮Illicium difengpi Κ· I. B et Κ· I. M.的干燥树 皮，为中国药典收录品种（原属壮药品种），具有祛风除湿，行气止痛的疗效，在广西民间地 楓皮主要用于治疗风湿关节炎、腰肌劳损和跌打损伤等症。该植物生长于石灰岩地区，是 广西岩溶石山上一种特有中药材，属于国家II级重点保护野生植物，自然分布于广西的西 南部、中部和西北部的岩溶地区，其中以龙州、靖西、都安、马山分布最多。据文献报道，目 前从地楓皮中分离得到的化学成分主要有苯丙素、木脂素、黄酮、酚酸、萜类、留醇等结构类 型，其中以苯丙素、木脂素和黄酮为主，并且这些类型化合物在药理实验中表现出较好的抗 炎活性。鉴于民间用药疗效及现代物质基础和药理等方面的研究结果，已研制出多种以地 楓皮为主药或辅以相关药材制成的制剂，如：风湿关节炎片、桂龙药膏、风寒双离拐片、风湿 安泰片、追风舒经活血片等等，可见中药地楓皮在医药领域上具有广阔的应用前景。但地楓 皮因特殊的生长环境持续恶化，连年无序采挖，致使地楓皮面临着严峻的资源问题，因此造 成药材来源混乱，以次充好现象时有发生，以致曾出现"桂林地楓皮"的伪品，在临床使用中 发生中毒事故。造成目前这种局面，主要原因是缺少药材质量控制方法和模式，在2010版 《中国药典》对地楓皮也只作形态观察和化学鉴别的要求。为了解决这一问题，就是建立一 种简单、快速、有效的分析方法，实现区别中药地楓皮的真伪和评价质量的好坏。
[0003]中药的本质是多种化学物质按照特定的相对含量比例组合而成的复杂体系，若在 规范的操作程序下，采用适当的提取分离方法将获得化学成分具体的，特征的和含量相对 稳定的中药特征性化学成分总提取物，同时利用现代分析手段去表征其相对组成和结构， 这种具有高度的重现性和特征性的分析方法非常适用于药材的质量控制。目前尚未见有通 过高压液相色谱法对中药地楓皮多指标性成分的分析以实现其药材质量的检测方法的相 关报道。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种准确度高、稳定性和重复性好的地楓皮的质 量控制方法。
[0005] 本发明提供的地楓皮的质量控制方法，是以槲皮苷、芦丁、Sl-3[4-0_(2' -hydrox y-1' -hydroxymethylethyl)dihydroconiferyl alcohol p-hydroxybenzoyl-gl ucoside] 和厚朴酚作为指标性成分，采用高效液相色谱法对地楓皮中上述指标性成分进行分析从而 实现对地楓皮质量的检测，具体包括以下步骤：
[0006] (1)对照品溶液的制备
[0007] 以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚为对照品，用体积分数为60~80%乙醇或体积分 数为60~80%甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，其中，混合对照品溶液中槲皮苷的浓度 为 2· 00X10 2~6· 00X10kg/ml，芦丁的浓度为 6· 60X10 3~1· 98X10ig/ml，S1-3 的浓 度为 4· 10X10 3~1· 23X10kg/ml，厚朴酚的浓度为 6· 00X10 3~1· 80X10kg/ml;
[0008] (2)供试品溶液的制备
[0009] 取地楓皮，粉碎，以体积分数为60~80 %乙醇或体积分数为60~80 %甲醇为提 取溶剂进行提取，所述地楓皮与提取溶剂的用量比为：lg:35~45ml，提取完成后，冷却，当 所得提取物的重量少于提取前地楓皮与提取溶剂的总重量时，补加提取溶剂直至重量刚好 与提取前地楓皮与提取溶剂的总重量相等，过滤，得到供试品溶液；
[0010] ⑶色谱条件
[0011] C18色谱柱，流速：0· 5~lml/min，柱温：20~30°C，波长：254nm或280nm，流动相 由A液和B液组成，其中A液为乙腈或甲醇，B液为体积分数为0. 1 %甲酸水溶液或体积分 数为0. 1 %磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱程序如下：
[0012] Omin时，A液：B液=5 ~10% :95 ~90% ;
[0013] 30min时，A 液：B 液=15 ~20% :85 ~80% ;
[0014] 40min时，A 液：B 液=20 ~25% :80 ~75% ;
[0015] 65min时，A 液：B 液=45 ~50% :55 ~50% ;
[0016] 85min时，A 液：B 液=75 ~80% :25 ~20% ;
[0017] ⑷测定
[0018] 精密吸取一定量上述混合对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪， 按照上述色谱条件进行测定。
[0019] 上述质量控制方法的步骤（1)中，优选采用体积分数为65~75%乙醇或体积分数 为65~75%甲醇溶解配制得到混合对照品溶液，更优选采用用体积分数为70%乙醇或体 积分数为70%甲醇溶解配制得到混合对照品溶液。
[0020] 上述质量控制方法的步骤（1)中，配制的混合对照品溶液中槲皮苷的浓度优选 控制在8. 00X10 2~4. 00X10ig/ml，更优选为2. 00X10ig/ml;芦丁的浓度优选控 制在L32X102~L32X10ig/ml，更优选为6. 60X10 2mg/ml;Sl-3的浓度优选控制 在8.20\103~6.56\10211^/1111，更优选为4.10\10 211^/1111;厚朴酚的浓度优选控制在 6. 00X10 3~1. 5X10ig/ml，更优选为 7. 20X10 2mg/ml。
[0021] 上述质量控制方法的步骤（2)中，提取溶剂优选为体积分数为65~75 %乙醇或体 积分数为65~75%甲醇，更优选为体积分数为70%乙醇或体积分数为70%甲醇。该步骤 中的提取溶剂最好是与步骤（1)中配制混合对照品溶液的溶剂相同。
[0022] 上述质量控制方法的步骤（2)中，在对地楓皮提取时，提取的方式可以是现有技 术中的常规提取方式，如浸提、加热提取、回流提取、超声提取等。优选采用超声提取（工作 频率优选为30~100ΚΗz)，提取的时间通常为0. 5~2h，通常选择lh。
[0023] 上述质量控制方法的步骤（3)中，在梯度洗脱时，优选的洗脱程序如下：
[0024]Omin时，A液：B液=10% :90% ;
[0025] 30min时，A液：B液=18% :82%;
[0026] 40min时，A液：B液=24% :76%;
[0027] 65min时，A液：B液=45% :55% ;
[0028] 85min时，A液：B液=75% :25%。
[0029] 上述质量控制方法的步骤（3)中，进样量根据需要确定，通常为10yL或20yL。
[0030] 按上述方法进行检测，测定结果中，地楓皮药材按干燥品计算，含槲皮苷不低于 0. 2%，含芦丁不低于0. 018%，含S1-3不低于0. 017%，含厚朴酚不低于0. 007%。
[0031] 在上述研究的基础上，还可以进一步制定标准指纹图谱，之后将地楓皮待测样品 指纹图谱与制定的标准指纹图谱进行比较，通过计算相似度，识别两者所具有的共同吸收 峰的数量来鉴别地楓皮的质量，其中待测样品指纹图谱与制定的标准指纹图谱比对，其相 似度应为0. 88以上，通常为0. 9~1. 0。
[0032] 与现有技术相比，本发明以槲皮苷、芦丁、S1-3和厚朴酚作为指标性成分，利用高 效液相色谱法建立对地楓皮质量的检测方法和质量鉴别方法，各成分含量检测结果准确， 检测方法的精密度高、稳定性及重复性好，对保证药材的质量更为有效，能有效确保中药地 楓皮质量的均一稳定。
[0033] 以下是申请人确定最优色谱条件的实验部分：
[0034] 1.仪器、试剂药品：
[0035]Agilentl200型高效液相色谱仪（真空在线脱气系统、四元栗、自动进样器、VWD检 测器，美国安捷伦公司）；LC/MS-IT_T0FSystem质谱仪，（Shimadzu,Tokyo,Japan) ;XS205 型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；KQ-300E型超声波清洗器（昆山市 超声仪器有限公司）。
[0036]对照品懈皮苷、芦 丁、S1-3 [4-0_(2,-hydroxy-l'-hydroxymethylethyl) dihydroconiferylalcoholp-hydroxybenzoyl-glucoside]、厚朴酸均为广西壮族自治区 中国科学院广西植物研究所分离得到（纯度大于98 %，HPLC检测，用面积归一化法计算）； 乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂（如甲醇、乙醇、甲酸等）均为分析纯。
[0037] 2实验方法
[0038] 2. 1色谱条件
[0039] Agilent1200 型高压