一种肝复乐胶囊的质量控制方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体设及一种肝病药物的质量控制方法。
【背景技术】
[0002] 肝癌是一种原发于肝细胞和肝内胆巧的恶性肿瘤，又称原发性肝癌。本病初起无 明显的症状和体征，随着病情的发展，出现肝胆进行性的肿大、疼痛、厌食、乏力、身体明显 消瘦，腹部明显胀满，黄痘低热和高热。肝癌的病因病机：①邪毒侵袭，外界邪毒乘虚侵袭人 体或肌表而入，或潜于体内，使脏腑功能失调，气全逆乱，日久导致气聚血凝。②情志失调， 百病皆生于气，情志失调，必伤肝，导致肝失疏泄。气机逆乱，血液运行受阻，疲血结聚于肝。 ③饮食不节，喜好嗜食炙烤肥甘，或饮酒无度，损伤脾胃，更有饮用污水馈腐之物，致使邪毒 直伤脾胃，水谷运化失常，水湿停聚有形之湿凝聚成块结于胁部，若日久不清，湿邪代热成 毒，湿热邪毒相博，郁蒸肝胆发为癖黄。
[0003] 肝复乐胶囊由21味药组成。适用于W肝疲脾虚为主证的原发性肝癌，症见上腹 肿块，胁肋疼痛，神疲乏力，食少纳呆，腕腹胀满，屯、烦易怒，口苦咽干等。方中党参、黄巧补 中益气健脾；大黄活血桂疲通经；上整虫破血逐疲消賛；整甲软坚散结，五者共为方中之主 药。辅W白术、巧等、慧巧仁益气健脾除湿；陈皮理气调中，燥湿化疲；桃仁、苏木活血桂疲， 通经止痛；郁金活血桂疲，行气止痛；柴胡、香附疏肝解郁，理气止痛；牡颇软坚散结。佐W 重楼、半枝莲、败酱草清热解毒；茵陈葛清利湿热，退黄痘；木通渗利水湿；沉香行气止痛。 诸药合用，共奏健脾理气，化疲软坚，清热解毒之功。适用于肝癌、肝硬化、肝腹水等肝病；同 时可作为护肝用药使用。临床资料表明对于乙型肝炎肝硬化患者的肝功能及肝纤维化血清 学指标有改善作用。也可用其它消化道肿瘤，乳腺癌，子宫癌，酒精肝损伤的辅助治疗，有明 显的保肝护肝作用。
[0004] 因为肝复乐是多味药材的组合物，含有多种有机活性成分，因此基于现代检测科 学手段，提出检测和控制肝复乐胶囊的方法十分必要，W使生产企业产品质量更稳定，更有 效、更科学地确保药物疗效。
【发明内容】
阳〇化]针对现有技术存在的不足之处，本发明确定了肝复乐胶囊主要活性成分，纳入质 量标准；本发明目的是提出一种肝复乐胶囊的质量控制方法，对其进行鉴别，从有效成分上 进行确定，使肝复乐胶囊活性成分得到有效控制。
[0006] 实现本发明目的的技术方案为：
[0007] 一种肝复乐胶囊的质量控制方法，包括对有效成分的检测，对有效成分的检测步 骤为： 阳00引（1)取肝复乐胶囊的内容物6g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴 上蒸干，蒸干的残渣加水溶解，用正下醇饱和水溶液提取3次，每次20ml，合并提取液的正 下醇相，用W正下醇饱和水溶液洗合并的正下醇相2次，每次20ml，弃去洗液中的水相，收 集的正下醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，加入中性氧化侣柱上，用40%甲醇溶液100ml洗脱， 收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液A;
[0009] 取黄巧甲巧对照品溶液和供试品溶液A，点于同一硅胶G薄层板上，Wl〇°CW下放 置的13:7:2=氯甲烧一甲醇一水下层溶液为展开剂，展开，取出，惊干，喷W10%硫酸乙醇 溶液，在105°C烘至斑点显色清晰；365nm紫外光下检视；
[0010] 似取肝复乐胶囊的内容物12g，加甲醇50ml加热回流1小时，滤过，滤液置水浴 上蒸干，蒸干的残渣加5mol/L硫酸溶液50ml，加热回流1小时，放冷，加入S氯甲烧50ml， 回流提取30分钟，静置自然冷却后，取分层后的水相再加入=氯甲烧50ml，回流提取一次， 合并=氯甲烧相，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液B;
[0011] 取大黄酪对照品溶液、供试品溶液B，点于同一硅胶G薄层板上，W石油酸一甲酸 乙醋一甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，惊干，置365nm紫外光下检视； 阳01引 做取肝复乐胶囊的内容物12g，加水150ml，置沸水浴中加热1小时，用脱脂棉趁 热滤过，滤液加氯化钢20g，用乙酸乙醋提取3次，每次30ml，合并乙酸乙醋提取液，通过铺 有无水硫酸钢的漏斗过滤，滤液置水浴上蒸干，蒸干的残渣加甲醇一=氯甲烧1 :1混合液 1ml使溶解，作为供试品溶液C;
[0013] 取茵陈对照药材溶液和供试品溶液C，点于同一硅胶G薄层板上，W49:1 =氯甲 烧一乙醇为展开剂，展开，取出，惊干，置365nm紫外光下检视；
[0014] (4)采用薄层色谱法试验，取苏木对照药材溶液及供试品溶液C，点于同一硅胶G 薄层板上，W10 :4 :1=氯甲烧一丙酬一甲酸为展开剂，展开，取出，惊干，放置6小时W上；
[0015] (5)取郁金对照药材溶液，采用薄层色谱法，吸取郁金对照药材溶液及供试品溶液 C点于同一硅胶G薄层板上，W17 :3正己烧一醋酸乙醋为展开剂，展开，取出，惊干，喷W 10%憐钢酸乙醇溶液，置105°C烘至斑点显色清晰；
[0016] (6)取肝复乐胶囊的内容物lOg，加甲醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤 液置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，加于聚酷胺柱（内径10mm，高约17cm)上，用水 50ml洗脱，弃去洗脱液，再用70 %乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇 2ml使溶解，作为供试品溶液D;
[0017] 用薄层色谱法试验，取澄皮巧对照品溶液和供试品溶液D，点于同一硅胶G薄层板 上，W100:17:15的醋酸乙醋一甲醇一水为展开剂，展开6cm，取出，惊干，再W20:10:1:1的 甲苯一乙酸乙醋一甲酸一水的上层溶液为展开剂，展开10cm，取出，惊干，喷氯化侣试 液，置365nm紫外光下检视。
[0018] 步骤（1)至化）中，供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的巧光 斑点，则表明该样品合格。
[0019] 本发明中，如无特别说明，有机溶剂的比都是体积比。
[0020] 薄层色谱载药量是有限的，浓度太高出现的就是不是点，而是条状，无法鉴别；浓 度太低，点就不明显，也无法鉴别。本申请的发明人经试验摸索，确定了薄层色谱法中，步骤 (1)和似、妨取对照品溶液和供试品溶液各10y1点样，步骤做取茵陈对照药材溶液和 供试品溶液C各5y1点样，步骤（4)取苏木对照药材溶液10y1及供试品溶液C5y1点 样，步骤（6)取澄皮巧对照品溶液和供试品溶液D各5y1点样。
[0021] 其中，所述步骤（1)中，正下醇饱和水溶液提取3次后，合并提取液的正下醇相用 氨试液30ml洗涂1次，弃去氨洗液；所述氨洗液是用质量百分浓度25-28%的氨水400ml， 加水至1000ml制得。
[0022] 其中，步骤（1)中，所述黄巧甲巧对照品溶液是W黄巧甲巧对照品，加甲醇制成的 每1ml中含Img的溶液。
[0023] 其中，所述步骤（2)中，对照品溶液的制备方法为：取大黄酪对照品，加=氯甲烧 制成每1ml中含0. 4mg的溶液；
[0024] 所述步骤（3)至巧）中，对照品溶液的制备方法为：取茵陈对照药材6g，或苏木对 照药材Ig，或郁金对照药材Ig，按照供试品溶液C的制法溶解、过滤、蒸干，蒸干的残渣加甲 醇一S氯甲烧1 :1混合液1ml溶解。
[0025] 其中，所述步骤化）中，澄皮巧对照品溶液为每1ml中含澄皮巧0.02mg的甲醇溶 液。
[00%] 进一步地，所述步骤（6)中，如果澄皮巧对照品溶液和供试品溶液D在薄层板相同 高度的位置有相同颜色的斑点，则进行步骤（7)的液相色谱检测；如果供试品溶液D在薄层 板相同高度的位置没有相同颜色的斑点，则判定样品不合格。
[0027] 本发明提出步骤（7)液相色谱检测，具体为： 阳02引取肝复乐胶囊的内容物，精密称取0. 48~0. 52g，加入甲醇50ml，称定重量，置水 浴上加热回流2小时，放冷，再称定重量、加甲醇补足重量，过滤取滤液，滤液进入液相色谱 仪测定含量，检测的澄皮巧色谱峰在2000W上为合格。
[0029] 其中，液相色谱条件为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇一4%醋酸溶液 (25:75)为流动相，检测波长284nm。
[0030] 其中，液相色谱检测用外标法确定澄皮巧的含量，澄皮巧工作曲线绘制为：精密称 取澄皮巧对照品，加甲醇使溶解，配制成浓度为1X10 3mg/mL至50X10 3mg/mL的标准溶液， 吸取5y1，注入液相色谱仪检测，W溶液浓度（yg/mU为X轴，峰面积（mAU)为Y轴，作线 性回归方程。
[0031] 本发明的有益效果为：
[0032] 肝复乐胶囊含有党参、整甲（醋制）、重楼、白术（炒）、黄巧、陈皮、±整虫、大黄、 桃仁、半枝莲、败酱草、巧等、慧巧仁、郁金、苏木、牡颇、茵陈、木通、香附（制）、沉香、柴胡。
[0033] 其中，郁金味辛、苦，性寒；归屯、、肝、胆经。活血止能；行气解郁；清屯、凉血；疏肝利 胆。主胸腹胁肋诸痛；妇女痛经；经闭；症瘤结块；热病神昏；癒狂；惊痛；吐血；赃备；血淋； 砂淋；黄痘。郁金在处方中起着君药的作用，将其鉴别纳入质量控制对于肝复乐