装量差异下的内容物，精密称定，取约0. 5g，精密称定，平行6份置锥形瓶 中，精密加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上加热回流2小时，放冷，再称定重量，加甲醇补 足重量，摇匀，滤过，取续滤液，精密吸取5y1，注入液相色谱仪，按外标法W峰面积计算。
[0070] C.中间精密度试验
[0071] 按重复性试验方法，由不同的分析人员使用不同的检验仪器进行测定。 阳0巧 4.回收率
[0073] 精密称取已知澄皮巧含量的样品适量0.5g，分别加入澄皮巧对照品适量，配制供 试液浓度的80 %、100 %、120 %溶液，平行配制3份（共9份），精密量取10y1，注入液相色 谱仪，记录色谱图。
[0074] 5溶液稳定性试验
[0075] 取供试品溶液；在室溫（25°C)下放置12小时，经0、2、4、6、8、12小时，精密量取 5y1，注入液相色谱仪，记录色谱图。
[0076] 6.定量限与检测限
[0077] 精密称取澄皮巧对照品5mg，置50ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 精密吸取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，逐级稀释成一系列低浓度的溶液， 分别精密量取各溶液5y1注入液相色谱仪，记录色谱图。当色谱图主峰的S/N> 10,记录 浓度值，当色谱图主峰的S/N> 3,记录浓度值。 阳〇7引 7.耐用性试验
[0079] 采用不同检测波长、不同柱溫、不同流速、不同流动相比例、不同抑值、不同色谱 柱，分别测定按外标法W峰面积计算本品含量。
[0080] 表1 :含量方法学验证结果
[0081]
[0082] 本质量控制方法中，检测澄皮巧理论塔板数2000W上为合格。即本品每粒含澄皮 巧也化4〇15)不得少于〇.5〇mg。表1的项目试验结果表明，本发明的检测方法，检出限低， 系统误差小，是准确可靠的检测方法。
[0083] 虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方案及物性测试对本发明作了详尽的 描述，但在本发明基础上，可W对之作一些修改或改进，运对本领域技术人员而言是显而易 见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的运些修改或改进，均属于本发明要求保护 的范围。
【主权项】
1. 一种肝复乐胶囊的质量控制方法，其特征在于，包括对有效成分的检测，对有效成分 的检测步骤为： (1) 取肝复乐胶囊的内容物6g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸 干，蒸干的残渣加水溶解，用正丁醇饱和水溶液提取3次，每次20ml，合并提取液的正丁醇 相，用以正丁醇饱和水溶液洗合并的正丁醇相2次，每次20ml，弃去洗液中的水相，收集的 正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，加入中性氧化铝柱上，用40%甲醇溶液100mL洗脱，收集 洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液A; 取黄芪甲苷对照品溶液和供试品溶液A，点于同一硅胶G薄层板上，以KTC以下放置的 13:7:2的三氯甲烷一甲醇一水下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶 液，在105°C烘至斑点显色清晰；365nm紫外光下检视； (2) 取肝复乐胶囊的内容物12g，加甲醇50ml加热回流1小时，滤过，滤液置水浴上蒸 干，蒸干的残渣加5mol/L硫酸溶液50ml，加热回流1小时，放冷，加入三氯甲烷50ml，回流 提取30分钟，静置自然冷却后，取分层后的水相再加入三氯甲烷50ml，回流提取一次，合并 三氯甲烷相，置水浴上蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，作为供试品溶液B; 取大黄酚对照品溶液、供试品溶液B，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚一甲酸乙 酯一甲酸15:5:1的上层溶液为展开剂，展开，取出，瞭干，置365nm紫外光下检视； (3) 取肝复乐胶囊的内容物12g，加水150ml，置沸水浴中加热1小时，用脱脂棉趁热滤 过，滤液加氯化钠20g，用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，通过铺有无 水硫酸钠的漏斗过滤，滤液置水浴上蒸干，蒸干的残渣加甲醇一三氯甲烷I: 1混合液Iml使 溶解，作为供试品溶液C; 取茵陈对照药材溶液和供试品溶液C，点于同一硅胶G薄层板上，以49:1三氯甲烷一乙 醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光下检视； (4) 采用薄层色谱法试验，取苏木对照药材溶液及供试品溶液C，点于同一硅胶G薄层 板上，以10 :4 :1三氯甲烷一丙酮一甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，放置6小时以上； (5) 取郁金对照药材溶液，采用薄层色谱法，吸取郁金对照药材溶液及供试品溶液C点 于同一硅胶G薄层板上，以17 :3正己烷一醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10% 磷钼酸乙醇溶液，置105°C烘至斑点显色清晰； (6) 取肝复乐胶囊的内容物10g，加甲醇30ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，滤液 置水浴上蒸干，残渣加水30ml使溶解，加于聚酰胺柱上，用水50ml洗脱，弃去洗脱液，再用 70 %乙醇100mL洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液 D； 用薄层色谱法试验，取橙皮苷对照品溶液和供试品溶液D，点于同一硅胶G薄层板上， 以100:17:15的醋酸乙酯一甲醇一水为展开剂，展开6cm，取出，晾干，再以20:10:1:1的甲 苯一乙酸乙酯一甲酸一水的上层溶液为展开剂，展开l〇cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液， 置365nm紫外光下检视。2. 根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤（1)中，正丁醇饱和水 溶液提取3次后，合并提取液的正丁醇相用氨试液30ml洗涤1次，弃去氨洗液；所述氨洗液 是用质量百分浓度25-28%的氨水400ml，加水至1000 ml制得。3. 根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤（1)中，所述黄芪甲苷 对照品溶液是以黄芪甲苷对照品，加甲醇制成的每Iml中含Img的溶液。4. 根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤（2)中，对照品溶液的 制备方法为：取大黄酚对照品，加三氯甲烷制成每Iml中含0. 4mg的溶液；所述步骤（6)中， 橙皮苷对照品溶液为每Iml中含橙皮苷0. 02mg的甲醇溶液。5. 根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤（3)至（5)中，对照品 溶液的制备方法为：取茵陈对照药材6g，或苏木对照药材lg，或郁金对照药材lg，按照供试 品溶液C的制法溶解、过滤、蒸干，蒸干的残渣加甲醇一三氯甲烷1 :1混合液Iml溶解。6. 根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，薄层色谱法中，步骤（1)和（2)、 (5)取对照品溶液和供试品溶液各10y1点样，步骤（3)取茵陈对照药材溶液和供试品溶液 C各5y1点样，步骤（4)取苏木对照药材溶液10y1及供试品溶液C5y1点样，步骤（6) 取橙皮苷对照品溶液和供试品溶液D各5y1点样。7. 根据权利要求1~6任一所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤(6)中，如果 橙皮苷对照品溶液和供试品溶液D在薄层板相同高度的位置有相同颜色的斑点，则进行步 骤（7)的液相色谱检测；如果供试品溶液D在薄层板相同高度的位置没有相同颜色的斑点， 则判定样品不合格。8. 根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于，所述步骤（7)液相色谱检测为： 取肝复乐胶囊的内容物，精密称取〇. 48~0. 52g，加入甲醇50ml，称定重量，置水浴上 加热回流2小时，放冷，再称定重量、加甲醇补足重量，过滤取滤液，滤液进入液相色谱仪测 定含量，检测的橙皮苷色谱峰在2000以上为合格。9. 根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于，液相色谱条件为：用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；25:75的甲醇一 4%醋酸溶液为流动相，检测波长284nm。10. 根据权利要求7所述的质量控制方法，其特征在于，液相色谱检测用外标法确定橙 皮苷的含量，橙皮苷工作曲线绘制为：精密称取橙皮苷对照品，加甲醇使溶解，配制成浓度 为IX10 3HigAiL至50X10 3HigAiL的标准溶液，吸取5y1，注入液相色谱仪检测，以溶液浓 度为X轴，峰面积为Y轴，作线性回归方程。
【专利摘要】本发明提出一种肝复乐胶囊的质量控制方法，包括对有效成分的检测，对有效成分的检测步骤为：(1)取肝复乐胶囊的内容物制备供试品溶液、黄芪甲苷对照品溶液，在硅胶G薄层板上展开，紫外光下检视；(2)取大黄酚对照品溶液与供试品溶液点于硅胶G薄层板上检视；(3)取茵陈对照药材溶液和供试品溶液点于薄层板上检视；(4)取苏木对照药材溶液及供试品溶液C各点于硅胶G薄层板，(5)取郁金对照药材溶液及供试品溶液C点于薄层板上检测；(6)取橙皮苷对照品溶液与供试品溶液点于硅胶G薄层板上检视。本发明提出的质量控制方法，对肝复乐进行色谱鉴别，从有效成分上进行确定，使肝复乐胶囊活性成分得到有效控制，且方法稳定可靠，专一性强。
【IPC分类】G01N30/90, G01N30/02
【公开号】CN105181877
【申请号】CN201510662333
【发明人】曾培安, 曾灿丽, 吴健民, 贺莲
【申请人】康普药业股份有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年10月8日