一种快速检测保健品中维生素e的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及利用柱色谱法来测试材料，尤其是一种检测保健品中维生素 E的方法。
【背景技术】
[0002] 维生素 E是生育酚类化合物的总称，是苯并二氢呋喃的衍生物，又称生殖维生素、 生育酚等，是最主要的抗氧化剂之一。其能促进性激素分泌，使男子精子活力和数量增加， 使女子雌性激素浓度增高，提高生育能力，预防流产，还可用于防治烧伤、冻伤、毛细血管出 血、更年期综合症、美容等方面。近来还发现维生素 E可抑制眼睛晶状体内的过氧化脂反应， 使末梢血管扩张，改善血液循环，预防近视发生和发展。目前，维生素 E广泛应用在食品、保 健品、医药、化妆品等领域，越来越受到人们的关注。
[0003] 随着社会的发展，市场上出现了越来越多的保健品中标明富含各种维生素，剂型 有片剂、冲剂或胶囊剂等，鉴于维生素 E不稳定，在空气中易被氧化，见光易分解的特性，有 的维生素 E多以微胶囊或微粒的形式存在，加上维生素 E是脂溶性维生素，他们较易在体内 蓄积，当食用过量会导致中毒。因此，对含有维生素 E的保健品进行测定显得尤为重要。目 前，食品国家标准方法仅限于GB5413.9-2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生 素 A、D、E的测定、GB/T5009.82-2003食品中维生素 A和维生素 E的测定、GB19191-2003食品添 加剂天然维生素 E、GB14756-2010食品添加剂维生素 E(dl-a醋酸生育酚）四种检测方法。而 对于保健食品生产过程中最主要的原料中维生素 E的测定方法并没有明确的规定。通过实 验发现，采用国标的方法检测维生素 E存在如下问题:前两种国家标准检测方法采用皂化提 取法，全部实验过程费时，操作繁琐，整个实验过程试剂消耗量较大，检测周期较长。该皂化 法通常适用于维生素含量不高的试样，可减少脂溶性物质的干扰，若采用皂化法对含有维 生素 E的样品进行处理，会导致样品中为维生素 E的严重损失，从而导致检测结果不能真实 反映样品中维生素 E的含量，影响检测数据的准确性。因此，用前两种国家标准检测方法重 现性差，准确率低，试剂消耗量大。后两种国家标准方法所用仪器为气相色谱法，该方法是 使样品瞬间气化，然后通过氢火焰离子化检测器分离出来，因维生素 E易氧化分解，气化温 度为300°C，还需一种内标物(正三十二烷或十六酸十六醇酯），操作起来比较繁琐，每次都 需配置内标物溶液。
【发明内容】
[0004] 为了克服现有技术中皂化法检测维生素 E存在重现性差、准确率低、试剂消耗量大 及气相色谱法检测维生素 E存在操作繁琐的不足，本发明提供一种重现性好、操作简便、准 确率高、试剂消耗量小的快速检测保健品中维生素 E的方法。
[0005] 本发明解决其技术问题所采有的技术方案为:一种快速检测保健品中维生素 E的 方法，其特征在于:其经过下列步骤： (1)标准品溶液的制备： ①分别取维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇适量溶 解，分别用甲醇稀释至刻度，充分摇匀;经ο. 45um滤膜滤过，滤液作为标准储备液； ② 按照公式:C=AX 1 X 10/EX 100XVX ΚΓ6分别计算出各维生素 E标准储备液的浓度； 其中，在所述的公式中， V代表加入各维生素 E标准储备液的量，为300ul; E代表各维生素 E标准储备液1%的比吸光系数，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E分别 为71、92.8、91.2; Α代表各维生素 Ε的平均紫外吸光值，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 Ε分别为294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表标准储备液稀释倍数； ③ 分别取上述步骤①各维生素 Ε中的标准储备液O.lml，用甲醇稀释定容至10ml，得到 维生素 E的混合标准溶液； (2) 待测样品溶液的制备： ① 维生素 E为粉状样品:称取质量为m克的待测样品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混勾，于60~65°C超声波水浴处理20~40min，静置冷却至室温，然后加入30~ 40ml甲醇超声10~20min，放冷用甲醇定容至刻度，摇勾，过0.45um滤膜，待上机； ② 维生素 E为油状样品：称取质量为m克的待测样品于50ml容量瓶中，加入30~40ml甲 醇超声10~20min，放冷用甲醇定容至刻度，摇勾，过0.45um滤膜，待上机； (3) 取步骤(1)的标准品溶液、步骤(2)的待测样品溶液分别注入高效液相色谱仪中，用 安捷伦反相色谱柱进行色谱分离，二极管阵列检测器检测，得到标准品溶液色谱图、待测样 品溶液色谱图，通过上述各维生素 E的保留时间定性判定待测样品溶液中维生素 E的种类； (4) 通过维生素 E标准品溶液与待测样品溶液中各维生素 E色谱图中峰面积的比例关 系，并根据各维生素 E标准品的浓度，分别可获得待测样品中各维生素 E的浓度;根据定容体 积及称样量最终可计算出样品的含量。
[0006] 所述的高效液相色谱仪的条件为:安捷伦C8或C18柱，其中，柱长150mm或250mm，内 径4 · 6mm，粒径5um;流动相：甲醇+水=98+2或95+5 (V+V);检测波长：285nm或292nm;流速： 1 ·0~1.2ml/min;柱温：（30±2)°C;进样量：20ul。
[0007] 所述的二极管阵列检测器的条件为:检测波长为204~280nm，色谱峰出峰时间为： α-维生素 E为8.8 ±0.2min、γ -维生素 E为9.9 ±0.2min、δ-维生素 E为11.1 ±0.2min。
[0008] 进一步，高效液相色谱仪的条件为:安捷伦C8柱，其中，柱长150mm，内径4.6mm，粒 径5um;流动相：甲醇+水=98+2(V+V);检测波长：285nm;流速：1 · 2ml/min;柱温：（30 ± 2)°C; 进样量:20ul。
[0009] 本发明利用高效液相色谱仪进行色谱分析，不受样品挥发性和溶解性的限制，重 现性好，操作简便易行，故特别适合维生素 E的鉴定检测。本发明具有高效、速度快、灵敏度 高、需要的样品量少，所需试剂少等优点。
【具体实施方式】
[0010] 下面结合实施例对本发明做进一步说明。
[0011] 实施例1 一种快速检测保健品中维生素 E的方法，其经过下列步骤： (1) 标准品溶液的制备： ① 分别取α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇适量溶 解，分别用甲醇稀释至刻度，充分摇匀;经〇. 45um滤膜滤过，滤液作为标准储备液； ② 用下表所述条件用紫外分光光度计测定各标准储备液的吸光值，用各自的比吸光系 数E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分别计算出各维生素 E标准储备液的浓度；
即:V代表加入各维生素 Ε标准储备液的量，为300ul; E代表各维生素 E标准储备液1%的比吸光系数，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E分别 为71、92.8、91.2; Α代表各维生素 Ε的平均紫外吸光值，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 Ε分别为294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表标准储备液稀释倍数； ③ 分别取上述步骤①各维生素 Ε中的标准储备液0.1ml，用甲醇稀释定容至10ml，得到 维生素 E的混合标准溶液； (2) 待测样品溶液的制备： 维生素 E为粉状样品：称取质量为m克的待测样品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混匀，于60°C超声波水浴处理40min，静置冷却至室温，然后加入30ml甲醇超声 20min，放冷用甲醇定容至刻度，摇勾，过0.45um滤膜，待上机； (3) 取步骤(1)的标准品溶液、步骤(2)的待测样品溶液分别注入高效液相色谱仪中，用 安捷伦反相色谱柱进行色谱分离，二极管阵列检测器检测，得到标准品溶液色谱图、待测样 品溶液色谱图，通过上述各维生素 E的保留时间定性判定待测样品溶液中维生素 E的种类； (4) 通过维生素 E标准品溶液与待测样品溶液中各维生素 E色谱图中峰面积的比例关 系，并根据各维生素 E标准品的浓度，分别可获得待测样品中各维生素 E的浓度;根据定容体 积及称样量最终可计算出样品的含量。
[0012] 实施例2 一种快速检测保健品中维生素 E的方法，其经过下列步骤： (1)标准品溶液的制备： ① 分别取α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇适量溶 解，分别用甲醇稀释至刻度，充分摇匀;经〇. 45um滤膜滤过，滤液作为标准储备液； ② 用下表所述条件用紫外分光光度计测定各标准储备液的吸光值，用各自的比吸光系 数E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分别计算出各维生素 E标准储备液的浓度；
即:V代表加入各维生素 Ε标准储备液的量，为300ul; E代表各维生素 E标准储备液1%的比吸光系数，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E分别 为71、92·8、91·2; Α代表各维生素 Ε的平均紫外吸光值，α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 Ε分别为294、 298、298; 10/V X ΚΓ6代表标准储备液稀释倍数； ③分别取上述步骤①各维生素 Ε中的标准储备液0.1ml，用甲醇稀释定容至10ml，得到 维生素 E的混合标准溶液； (2) 待测样品溶液的制备： 维生素 E为粉状样品：称取质量为m克的待测样品于50ml容量瓶中，加入5ml、10%淀粉 酶，2ml水，混匀，于65°C超声波水浴处理30min，静置冷却至室温，然后加入40ml甲醇超声 1 Omin，放冷用甲醇定容至刻度，摇勾，过0.45um滤膜，待上机； (3) 取步骤(1)的标准品溶液、步骤(2)的待测样品溶液分别注入高效液相色谱仪中，用 安捷伦反相色谱柱进行色谱分离，二极管阵列检测器检测，得到标准品溶液色谱图、待测样 品溶液色谱图，通过上述各维生素 E的保留时间定性判定待测样品溶液中维生素 E的种类； (4) 通过维生素 E标准品溶液与待测样品溶液中各维生素 E色谱图中峰面积的比例关 系，并根据各维生素 E标准品的浓度，分别可获得待测样品中各维生素 E的浓度;根据定容体 积及称样量最终可计算出样品的含量。
[0013] 实施例3 一种快速检测保健品中维生素 E的方法，其经过下列步骤： (1) 标准品溶液的制备： ① 分别取α-维生素 Ε、γ -维生素 Ε、δ-维生素 E各20mg，于50ml容量瓶中，加甲醇适量溶 解，分别用甲醇稀释至刻度，充分摇匀;经〇. 45um滤膜滤过，滤液作为标准储备液； ② 用下表所述条件用紫外分光光度计测定各标准储备液的吸光值，用各自的比吸光系 数E，按照公式:C=A X 1 X 10/E X 100 X V X 10-6分别计算出各维生素 E标准储备液的浓度；
即:V代表加入各维生素 Ε标准储备液