一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂bht的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及药品包装和药物相容性领域，尤其设及一种测定甘精膜岛素注射液中 抗氧剂BHT的方法。
【背景技术】
[0002] 药品包装材料对保证药物的稳定性起着至关重要的作用，与人们的用药安全息息 相关。药品的包装材料选用不当会导致药物活性成分的迁移、吸附甚至发生化学反应，使药 物失效，有的还会产生严重的毒副作用。
[0003] 药用下基胶塞与天然橡胶相比，由于良好的气密性、稳定性、耐老化性和低析出 性，已经成为医药包装中应用较为广泛的材料之一。由于胶塞的成分比较复杂，包含的化合 物的种类也比较多，作为直接接触到药品的包装材料，即便下基胶塞的化学稳定性很好，其 中的化合物也有可能会迁移到药液中，存在影响药效或者污染药品的可能性。某些抗生素 的注射用粉针剂，在胆存过程中出现澄清度超标的现象，有文献报道可能与所用胶塞有关。
[0004] 抗氧剂2,6-二叔下基-4-甲基苯酪，即BHT，是现在已知的存在于胶塞中的可挥发 性成分之一，研究表明BHT对人体的肝脾胃均有不同程度的毒害作用。研究胶塞中的BHT迁 移到药液中的迁移量大小，对胶塞与药物的相容性研究起着重要的作用。传统技术上针对 BHT迁移量的检测大部分采用GC-MS的方法，但是运种方法对仪器的要求较高，难W普及。
[0005] 甘精膜岛素注射液为膜岛素类似物，临床主要适用于需用膜岛素治疗的糖尿病， 胶塞中的BHT同样存在着迁移到甘精膜岛素注射液中的可能，传统技术不能很好的检测甘 精膜岛素注射液中的BHT，因此有必要针对此进行改进。
[0006] 《今日药学》期刊2015年05期中"高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中的抗氧剂 Bm"-文中介绍了使用高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中B肌的方法，该方法对脂肪乳 注射液有着较好的检测效果，但是其检测前需要进行复杂的前处理过程，将运种方法应用 到甘精膜岛素注射液中时，不能取得理想的结果。因此有必要针对甘精膜岛素注射液中的 BHT检测开发一种新的检测方法。
【发明内容】
[0007] 有鉴于此，本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简单且能有效 测定甘精膜岛素注射液中抗氧剂BHT的方法。
[000引为了解决上述技术问题，本发明采用如下方案实现： 一种测定甘精膜岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，使用高效液相色谱法进行检测，且流 动相为乙腊:水:憐酸盐缓冲液。
[0009]将【背景技术】中的"高效液相色谱法检测脂肪乳注射液中的抗氧剂BHT"提及到的方 法应用到甘精膜岛素注射液中，并不能达到理想的结果，发明人通过研究发现，甘精膜岛素 注射液中的甘精膜岛素 W及抑菌剂间甲酪在该色谱条件下会出现色谱峰并且拖尾，从而影 响抗氧剂BHT的色谱峰，基于此，发明人进一步的发现，可W采用现有技术中液液萃取等前 处理手段将甘精膜岛素和间甲酪从样品中清除，但是运种前处理手段极其复杂且效率低， 实验误差大，有机试剂用量大，成本较高。发明人通过研发，使用了乙腊:水:憐酸盐缓冲液 来作为流动相，将抗氧剂BHT色谱峰与甘精膜岛素和间甲酪色谱峰分离，从而为实现了精确 测定甘精膜岛素注射液中抗氧剂BHT打下基础。
[0010]所述憐酸盐缓冲液为将二水憐酸二氨钢和氯化钢溶解于水中，调整抑至2.5~4制 备而成，使得最终混合的流动相中，二水憐酸二氨钢的浓度为0.0031~0.0052g/ml，氯化钢 的浓度为0~〇.〇〇32g/ml。通过进一步的优化二水憐酸二氨钢和氯化钢的用量，避免了盐的 析出，二水憐酸二氨钢保证了流动相的抑，可W使得甘精膜岛素和间甲酪提前出峰，避免影 响待测物质抗氧剂BHT的色谱峰;氯化钢能修饰BHT的峰型，使得峰的参数更易读取。
[00川进一步地，流动相组分之间体积比为乙腊:水:憐酸盐缓冲液=65~75:10:15~25。通 过对=者配比的优化，在成功分离=个峰的前提下，避免了析出盐而导致仪器的损坏。
[0012] 进一步地，高效液相色谱法还包括如下条件： 色谱柱:C18填料色谱柱； 柱溫:30~40°C; 流速：1~1.5ml/min。
[0013] 进样前，甘精膜岛素注射液样品需要进行前处理，具体为使用甲醇或乙腊与甘精 膜岛素注射液进行混合。先对样品进行稀释，能增加抗氧剂BHT在甘精膜岛素注射液中的溶 解度，并稀释甘精膜岛素和间甲酪的浓度。
[0014] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 1、 本发明前处理简单，只需要用甲醇或乙腊稀释样品即可，用时少，有机试剂用量少， 高效环保，减少操作误差，试验结果准确可靠； 2、 本发明能避免甘精膜岛素、间甲酪甚至其结构相似物质的存在对抗氧剂BHT色谱峰 的影响，从而准确检测抗氧剂BHT的含量。
【附图说明】
[001引图巧实施例1中甘精膜岛素注射液力麻色谱图； 图2为实施例1中抗氧剂BHT的标准曲线； 图3为对比例1样品加标色谱图； 图4为对比例2样品加标色谱图； 图5为对比例3样品加标色谱图； 图6为对比例4样品加标色谱图。
【具体实施方式】
[0016]为了让本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面结合附图对本发明 作进一步阐述。
[0017]实施例1 检测对象:抗氧剂BHT; 检测基质:甘精膜岛素注射液，为注射给药型溶液剂； 检测方法:高效液相色谱法，C18填料色谱柱，紫外检测器，流动相为乙腊:水:憐酸盐缓 冲液，S者体积比为65:10:25，柱溫35°C，流速Iml/min，检测波长280nm; 所述憐酸盐缓冲液的配制如下:取二水憐酸二氨钢20.7g，加水800ml溶解，用憐酸调节 pH至2.5，加入氯化钢12. Sg，加水至1000 ml。
[001引1.专属性试验 取5ml甘精膜岛素注射液加入1ml的册T标准母液，用甲醇定容至IOml，照上述色谱条件 进高效液相色谱仪2化1。如图1所示，抗氧剂BHT的保留时间为23. Imin。
[0019] 2.线性试验 将抗氧剂册T对照储备液稀释至0.4364、1.091、2.182、5.455、10.91、21.8^g/ml，分别 进样2化1，进行HPLC测定。每个浓度测3次，取平均值。如图2所示，线性方程为C=4.846X10-Sa- 8.603 X 10-2，r2 = 0.9996，表明抗氧剂BHT在0.4364~21.8^g/ml 内线性良好。
[0020] 3.精密度试验 取浓度为0.436化g/ml、2.18化g/ml、10.91μg/ml的抗氧剂BHT对照储备液，注入液相色 谱仪，进样2化1。连续进样3针，记录色谱峰，峰面积的相对标准差值(RSD)如下表： 表1精密度试验结果
4.稳定性试验 取浓度为0.218化g/ml、1.09山g/ml、5.455μg/ml的抗氧剂BHT对照储备液各2化1，分别 于化和2地注入高效液相色谱，记录色谱图，峰面积的相对标准偏差值(RSD)见下表。
[0021] 表2稳定性试验结果
5.最低检测限及最低定量限 将BHT对照储备液不断稀释至信噪比为3,得仪器检测限为O.lμg/ml，样品检出限为 0.21μg/ml。将BHT对照储备液不断稀释至信噪比为10，得仪器定量限为0.化g/ml，样品定量 限为 O.^ig/ml。
[0022] 6.甘精膜岛素注射液中回收率试验 取5ml甘精膜岛素注射液加入5化1、0.25ml、Iml的BHT标准母液，用甲醇定容至IOml。用 〇.45ym滤膜过滤后注入液相色谱仪，进样2化1，记录色谱图，计算回收率。
[0023] 表3回收率试验结果
综上，甘精膜岛素注射液经过稀释后，该方法可准确检测出抗氧剂BHT。
[0024] 实施例2 除了柱溫为40°C，流速为1. SmVmin，乙腊:水:憐酸盐缓冲液=75:10:15，憐酸盐缓冲液 为采用12.?的二水憐酸二氨钢和Og氯化钢配制外，其它条件同实施例1。
[0025] 经测试，线性试验时，BHT在0.4364~21.8^g/ml内线性良好，R2 = 0.9997;精密度 试验时，RSD在0.21~0.76%之间；稳定性试验时，RSD在0.59~1.54%之间；甘精膜岛素注射液 中回收率试验中，平均回收率在98.12~109.31%之间，RSD在0.13~0.54%之间。综上，此方法 可准确检测出抗氧剂BHT。
[00%] 对比例1 除了配制流动相时，调节抑至2.0，取2.535μg/ml的抗氧剂BHT对照储备液进样外，其它 色谱条件同实施例1，如图3所示，在抑=2的流动相条件下，抗氧剂BHT出峰前基线上升明显。
[0027] 对比例2 除了流动相为甲醇:水=80:20，取甘精膜岛素注射液添加抗氧剂BHT标准母液至抗氧剂 BHT的浓度为2.7275μg/ml，进样2化1外，其它色谱条件同实施例1，如图4所示，在此流动相 的条件下，抗氧剂BHT的回收率差，基本不出峰。
[0028] 对比例3 除了流动相为乙腊:水:憐酸盐缓冲液=63:12:25，取甘精膜岛素注射液添加抗氧剂 BHT标准母液至抗氧剂BHT的浓度为2.7275μg/ml，进样2化1外，其它色谱条件同实施例1，如 图5所示，改变了流动相的组分之间配比，抗氧剂BHT在50min内未出峰，检测时间过长。
[00巧]对比例4 除了配制憐酸盐缓冲液时，二水憐酸二氨为Ilg外，其它色谱条件同实施例1。如图6所 示，虽然能成功将BHT色谱峰与甘精膜岛素和间甲酪分离，但是间甲酪和甘精膜岛素峰形 差，BHT峰型不对称。
【主权项】
1. 一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，使用高效液相色谱法 进行检测，且流动相为乙腈:水:磷酸盐缓冲液。2. 根据权利要求1所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂ΒΗΤ的方法，其特征在于，所 述磷酸盐缓冲液为将二水磷酸二氢钠和氯化钠溶解于水中，调整pH至2.5~4制备而成，使得 最终混合的流动相中，二水磷酸二氢钠的浓度为0.0031~0.0052g/ml，氯化钠的浓度为0~ 0.0032g/ml〇3. 根据权利要求2所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，流 动相组分之间体积比为乙腈:水:磷酸盐缓冲液=65~75:10:15~25。4. 根据权利要求1所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，高 效液相色谱法还包括如下条件： 色谱柱:C18填料色谱柱； 柱温:30~40°C; 流速：1~1.5ml/min〇5. 根据权利要求1所述的测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，其特征在于，甘 精胰岛素注射液样品需要进行前处理，具体为使用甲醇或乙腈与甘精胰岛素注射液进行混 合。
【专利摘要】本发明公开了一种测定甘精胰岛素注射液中抗氧剂BHT的方法，属于药品包装和药物相容性领域，具体为采用高效液相色谱法来进行检测，流动相为乙腈：水：磷酸盐缓冲液，避免了复杂的前处理手段，通过本发明成功的将抗氧剂BHT色谱峰与甘精胰岛素和间甲酚分离，避免了拖尾现象的发生，准确检测出样品中抗氧剂BHT的含量。
【IPC分类】G01N30/06
【公开号】CN105527357
【申请号】CN201610077845
【发明人】曲亚南, 方旻, 谢新艺, 颜林
【申请人】广东省医疗器械质量监督检验所
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2016年2月4日