分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化学分析领域，具体而言，本发明涉及分离分析苯甲酸阿格列汀制剂 及其有关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 苯甲酸阿格列汀（Alogliptin benzoate,结构如式1所示）是由日本武田 灯akeda)公司原研的DPP-IV抑制剂，能高度选择性地显著抑制DPP-IV，维持体内化P-I和 葡萄糖依赖性促膜岛素多肤（GIP)的水平，促进膜岛素的分泌，从而发挥降糖疗效。2010 年4月苯甲酸阿格列汀获得日本厚生劳动省的上市批准，原研厂家的苯甲酸阿格列汀 (肥SINA)为薄膜包衣片剂，有3种制剂规格，规格不同颜色不同（25mg黄色；12. 5mg微黄 色；6. 25mg淡赤色）。3种规格制剂片芯颜色为白色。
[0003]
[0004] 式 1
[0005] 现有技术中专利CN103156819A提出参照苯甲酸阿格列汀原料的检测方法进行有 关物质测定，然而，本课题组成员在成品的质量检测中发现，阿格列汀主峰后经常出现一未 知杂质，此未知杂质在原料检测及方法学验证中并未发现，而在制剂有关物质方法学研究 精密度试验中，采用原料的有关物质分析方法检测发现此杂质因为离阿格列汀主峰太近， 在精密度实验中同一批次的6份样品中该杂质重现性较差，并出现被不准确积分现象。
[0006] 在后续的制剂稳定性研究中发现，如果延续使用苯甲酸阿格列汀原料的有关物质 方法，将会影响制剂中有关物质的正确评估。
[0007] 因此，为了准确的控制苯甲酸阿格列汀制剂的质量，有必要寻找一种简单、快速、 准确在分离检测出苯甲酸阿格列汀及其有关物质的方法。
【发明内容】
[0008] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的 一个目的在于提出一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，从而实现对苯 甲酸阿格列汀制剂质量的有效控制。
[0009] 苯甲酸阿格列汀制剂中的有关物质包括：
[0010]
[0011] 另发现阿格列汀主峰后常跟随有一未知杂质A。在氧化降解后的样品中更易出现。
[0012] 本发明提供了一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法。根据本发 明的实施例，该方法包括：
[001引（1)色谱条件：采用辛烷基键合硅胶为固定化流动相A为缓冲液、流动相B为有 机溶剂，W A、B的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱；
[0014] 似样品溶液的配制；采用流动相A将待测样品配制成样品溶液；
[001引 做分离分析；将样品溶液注入高效液相色谱化完成苯甲酸阿格列汀制剂及其 有关物质检测。
[0016] 其中，梯度洗脱见下表：
[0017]
防)1引发明人调整流动相比例，并经过实施例中的强制降解试验对方法进行研究。重点 选用氧化降解样品（因为氧化条件降解杂质数最多），在方法摸索中我们棍奇的发现调整 流动相比例能使有关物质检测中该未知杂质A与阿格列汀的分离度大于1. 5,高效分离且 不影响其它 3 个杂质（AL0-IMP-01、AL0-IMP-02、AL0-IMP-03)出峰。
[0019] 采用该方法可W将苯甲酸阿格列汀与有关物质在同一色谱条件下进行快速高效 的分离，该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品质量。
[0020] 根据本发明实施例的分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，还可W 具有W下附加技术特征：
[0021] 根据本发明的实施例，所述缓冲液选自磯酸盐缓冲液，优选为磯酸二氨钢缓冲液、 磯酸二氨钟缓冲液中的至少一种，最优选为磯酸二氨钟缓冲液。
[0022] 根据本发明的具体实施例，所述缓冲液浓度优选为0. 02mol/L - 0. 05mol/l，最优 选为 0. 04mol/L。
[0023] 根据本发明的具体实施例，所述缓冲液含0.3体积比％的H己胺。H己胺可W改 善峰形。
[0024] 根据本发明的具体实施例，所述缓冲液的抑值为2 - 4,优选为2. 5 - 3. 5,最优 选为3. 0。
[0025] 根据本发明的实施例，所述有机溶剂选自甲醇、己腊中的至少一种，优选为己腊。
[0026] 根据本发明的具体实施例，所述流动相为有机相与磯酸盐缓冲液的混合溶剂梯度 洗脱，梯度洗脱到20 - 25min时，调节缓冲液所占体积比在40 - 80%送一范围值内，对应 调节有机溶剂体积比为20 - 60%。
[0027] 根据本发明的具体实施例，梯度洗脱到20-25min时，优选将缓冲液所占体积比调 节在60 - 80 %送一范围值内，对应调节有机溶剂体积比为20 - 40%。
[002引根据本发明的具体实施例，梯度洗脱到20-25min时，最优选方案为调节缓冲液所 占体积比为80%，有机溶剂所占体积比为20%。由此得到的分离效果最佳。
[0029] 根据本发明的实施例，检测条件为：流动相流速0. 8血/min - 1. 2血/min,优选为 1. 0血/min。检测波长为250 - 280皿，优选为278皿。柱温为25°C- 35°C，优选为30°C。
[0030] 本发明所述的分析分离方法，可W依照W下方法实现：
[0031] 1)取待测样品磨碎，称取适量，用缓冲液溶解，配成每ImL含300 U g的样品溶液。
[0032] 2)流动相流速为0. 8血/min-1. 2血/min,优选为1. 0血/min。检测波长为 250-280nm，优选为 278nm。柱温为 25°C -35°C，优选为 30°C。
[0033] 3)取I)的样品溶液进样量为2~20 y L，优选为10 y L注入液相色谱化完成苯 甲酸阿格列汀制剂的有关物质测定。
[0034] 与现有技术相比，本发明方法的洗脱分离效果更好，能使样品中各色谱峰有效分 离。专利CN103156819A中检测时间为40min，本申请仅需30min，较现有技术的时间更短， 更有效率。可W准确、可靠的分离苯甲酸阿格列汀及相邻的降解杂质。
【附图说明】
[0035] 图1显示了根据本发明的实施例1，所得氧化降解样品的高效液相色谱图；
[0036] 图2显示了根据本发明的实施例1，所得有关物质定位的高效液相色谱图拟及
[0037] 图3显示了根据本发明的实施例2,所得氧化降解样品的高效液相色谱图；
[003引图4显示了根据本发明的实施例3,所得氧化降解样品的高效液相色谱图；
[0039] 图5显示了根据本发明的实施例4,所得氧化降解样品的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0040] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文 献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均 为可W通过市购获得的常规产品。
[0041] 本发明实施例中所用的苯甲酸阿格列汀片均为申请人自巧[|，由苯甲酸阿格列汀原 料、甘露醇、微晶纤维素、居丙纤维素、交联駿甲基纤维素钢和硬脂酸镇组成。
[0042] 实施例1
[004引仪器；Agilent 1260高效液相色谱化DAD检测器
[0044] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0045] 流动相A ;0. 04mol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0.
[004引流动相B;己腊 [0047] 梯度洗脱见下表：
[0049] 流速；1. OmT,/mi n
[0050] 波长；278nm [0051 ]柱温；30 C [0052]进样量；IOii L
[005引稀释液；流动相A
[0054] 实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至IOOmL量瓶，加6mL30 %的双氧水溶液使样品润湿进行氧化降解，于室温 放置6小时，加稀释液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[00巧]杂质定位溶液配制；取ALO-IMP-Ol、AL0-IMP-02、AL0-IMP-03及苯甲酸阿格列汀 对照品用20 %甲醇溶液配制成每毫升含ALO-IMP-01、AL0-IMP-02、AL0-IMP-03及苯甲酸阿 格列汀约为 30 U g、30 U g、30 U g、300 U 邑。
[0056] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间为I. 11) 的分离度为3.0,具体见图1 ;图2为此条件下的杂质定位图谱，4. 314min为AL0-IMP-01， 8. 405min 为 AL0-IMP-02,7. 774min 为 AL0-IMP-03,9. 358min 为阿格列汀，17. 397min 为苯 甲酸。
[0057] 实施例2
[005引仪器；Agilent 1260高效液相色谱化DAD检测器
[0059] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0060] 流动相A ;0. 04mol/L的磯酸二氨钢缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0
[00川流动相B ;己腊 [0062] 梯度洗脱见下表：
[0064] 流速；1. (MVmin
[0065] 波长；278nm [006引柱温；3(TC [0067]进样量；10 ]i L
[006引稀释液；流动相A
[006引实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至IOOmL量瓶，加6mL30 %的双氧水溶液使样品润湿进行氧化降解，于室温 放置6小时，加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0070] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间为1. 06)的 分离度为2. 4,具体见图3。
[00川 实施例3
[007引仪器；Agilent 1260高效液相色谱化DAD检测器
[007引色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[00