74] 流动相A ;0. 04mol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0
[00巧]流动相B ;己腊
[0076] 梯度洗脱见下表：
[0078] 流速；1. OmT,/mi n
[0079] 波长；278nm
[0080] 柱温；30 C
[0081] 进样量；IOii L
[00的]稀释液；流动相A
[008引实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至IOOmL量瓶，加6mL30 %的双氧水溶液使样品润湿进行氧化降解，于室温 放置6小时，加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0084] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间为1. 08)的 分离度为2. 7,具体见图4。
[0085] 实施例4
[008引仪器；Agilent 1260高效液相色谱化DAD检测器
[0087] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0088] 流动相A ;0. 04mol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0
[008引流动相B;己腊
[0090] 梯度洗脱见下表：
[0091]
[0092] 流速；1. 0血/min
[0093] 波长；278nm
[0094] 柱温；3(TC
[0095] 进样量；10 Ji L
[009引稀释液；流动相A
[0097] 实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至IOOmL量瓶，加6mL30 %的双氧水溶液使样品润湿进行氧化降解，于室温 放置6小时，加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[009引结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间为1. 04)的 分离度为1.7,具体见图5。
[009引 实施例5
[0100] 仪器;Agilent 1260高效液相色谱仪，紫外检测器
[0101] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0102] 流动相A ;0. 04mol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至2. 5
[0103] 流动相B;甲醇 [0104] 梯度洗脱见下表：
[0106] 流速；1. (MVmin
[0107] 波长；278nm [010引柱温；30。。
[0109] 进样量；10 U L
[0110] 稀释液；流动相A
[0111] 实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至100血量瓶，加6血30%的双氧水溶液使样品润湿，于室温放置6小时， 加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0112] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1. 04) 的分离度> 1.5,符合系统适用性要求。
[011引 实施例6
[0114] 仪器;Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外检测器
[0115] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0116] 流动相A ;0. 02mol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 5
[0117] 流动相B ;己腊
[0118] 梯度洗脱见下表：
[0120] 流速；1.2血/min
[0121] 波长；278nm [012? 柱温；3(TC
[0123] 进样量；10 U L
[0124] 稀释液；流动相A
[01巧]实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至100血量瓶，加6血30%的双氧水溶液使样品润湿，于室温放置6小时， 加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0126] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1. 04) 的分离度> 1.5,符合系统适用性要求。
[0127] 实施例7
[012引仪器；Agilent 1100高效液相色谱仪，紫外检测器
[0129] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0130] 流动相A ;0. 05mol/L的磯酸二氨钢缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0
[013。 流动相B ;己腊 [0132] 梯度洗脱见下表：
[0134]流速；1. (MVmin [013引 波长；278nm
[013引柱温；35。。
[0137] 进样量；10 JiL
[0138] 稀释液；流动相A
[0139] 实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至100血量瓶，加6血30%的双氧水溶液使样品润湿，于室温放置6小时， 加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0140] 结论；此色谱条件下，阿格列汀与其相邻的未知杂质A(相对保留时间约为1. 04) 的分离度> 1.5,符合系统适用性要求。
[0141] 实施例8
[0142] 仪器;Agilent 1260高效液相色谱仪，紫外检测器
[0143] 色谱柱；辛烷基键合硅胶为填充剂的色谱柱（4. 6mmX 250mm，5 U m)
[0144] 流动相A ;0.0 lmol/L的磯酸二氨钟缓冲液（含0. 3体积比％的H己胺），用磯酸 调抑至3. 0
[0145] 流动相B ;甲醇
[0146] 梯度洗脱见下表：
[0148] 流速；1. OmT,/mi n
[0149] 波长；278nm
[0150] 柱温；25 C
[0151 ]进样量；IOii L
[0152] 稀释液；流动相A
[0153] 实验步骤：取20片供试品，精密称重，计算平均片重，研细。精密称取约相当于阿 格列汀30mg细粉至100血量瓶，加 6血30%的双氧水溶液使样品润湿，于室温放置6小时， 加缓冲液超声溶解并定容至刻度，摇匀。
[0154] 结论；此色谱条件下，阿格列汀峰拖尾比较严重。
[0155] 在本发明的描述中，需要理解的是，术语"第一"、"第二"仅用于描述目的，而不能 理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有"第 一"、"第二"的特征可W明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中， "多个"的含义是两个或两个W上，除非另有明确具体的限定。
[0156] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特 点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不 必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可W在任 一个或多个实施例或示例中W合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技 术人员可W将本说明书中描述的不同实施例或示例W及不同实施例或示例的特征进行结 合和组合。
[0157] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可W理解的是，上述实施例是示例 性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可W对上述 实施例进行变化、修改、替换和变型。
【主权项】
1. 一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，其特征在于，包括： (1) 色谱条件：采用辛烷基键合硅胶为固定相，流动相A为缓冲液、流动相B为有机溶 剂，以A、B的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱，梯度洗脱见下表； (2) 样品溶液的配制：采用流动相A将待测样品配制成样品溶液； (3) 分离分析：将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成苯甲酸阿格列汀制剂及其有关 物质检测〇2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液选自磷酸盐缓冲液，优选为磷 酸二氢钠缓冲液、磷酸二氢钾缓冲液中的至少一种，最优选为磷酸二氢钾缓冲液。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，缓冲液浓度为0. 02mol/L - 0. 05mol/L， 优选为 〇. 〇4mol/L。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液的pH值为2 - 4,优选为 2. 5 - 3. 5,最优选为3. 0。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述缓冲液含0. 3体积比％的三乙胺。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，梯度洗脱20 - 25min时，调节缓冲液所占 体积比在60 - 80%这一范围值内，对应调节有机溶剂体积比为20 - 40%。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，流动相流速0. 8mL/min - I. 2mL/min，优 选为 1.0 mT,/miη 〇8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，检测波长为250 - 280nm，优选为278nm。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱温为25°C - 35°C，优选为30°C。10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样量为2 - 20 μ L，优选为10 μ L。
【专利摘要】本发明提供了一种分离分析苯甲酸阿格列汀制剂及其有关物质的方法，采用辛烷基键合硅胶为固定相，以流动相A-缓冲液、流动相B-有机溶剂的混合溶剂作为流动相，进行梯度洗脱。采用该方法可以将苯甲酸阿格列汀与有关物质在同一色谱条件下进行快速高效的分离，该检测方法专属性强、精密度高、准确性强、操作方便，可有效控制药品质量。
【IPC分类】G01N30/34, G01N30/02
【公开号】CN105527348
【申请号】CN201410509845
【发明人】祝小芬, 钱丽娜, 王珍, 刘大鹏, 崔健
【申请人】中美华世通生物医药科技（武汉）有限公司
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2014年9月28日