一种盐酸法舒地尔的质量控制方法
【专利摘要】本发明公开了一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，包括性状的观察、内容物的鉴别、内容物的检查和对含有的成分进行含量测定，内容物的检查包括有关物质含量的测定和高哌嗪含量的测定。盐酸法舒地尔在合成反应过程中容易产生降解杂质，且容易发生副反应生成二聚体杂质，起始反应物料高哌嗪不易除尽，均会影响产品的纯度和安全性，因此需要在生产过程中对产品杂质进行及时含量测定，以便控制生产过程的产品质量，本发明方法在现有控制方法的基础上增加了二聚体含量的测定和高哌嗪含量的测定，因此，本发明的质量控制方法进一步提高了盐酸法舒地尔的质量和完善了现有行业标准，具有简单易行，精确度和准确性高的优点，对提高产品质量有重大意义。
【专利说明】
_种盐酸法舒地尔的质量控制方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种药物制剂的质量控制方法，特别是一种盐酸法舒地尔的质量控制 方法。
【背景技术】
[0002] 盐酸法舒地尔，化学名称为:六氢-1-(5-异喹啉磺酰基)-1Η-1，4-二氮杂卓盐酸 盐，分子式为 · HC1，分子量为327.83,英文名为:Fasudil Hydrochloride。
[0003] 其化学结构式如下：
[0005] 盐酸法舒地尔是日本Asahi Kasei(旭化成)株式会社于上世纪80年代开发的异喹 啉磺胺类药物，是一种蛋白激酶RH0抑制物(细胞内钙离子拮抗剂），通过阻断血管收缩过程 的最后阶段，也即通过增加肌球蛋白氢链磷酸酶的活性，扩张血管(抑制血管痉挛），降低内 皮细胞的张力发挥药效，从而改善脑组织微循环，不产生和加重脑的盗血。其临床上主要用 于改善和预防蛛网膜下腔出血后的脑痉挛及引起的脑缺血症状，同时还可保护神经抗凋 亡，促进神经再生。
[0006] 关于盐酸法舒地尔的质量控制方法，公开号为CN101008637A的中国专利公开了一 种盐酸法舒地尔注射液的质量控制方法，包括以下步骤:性状的观察，内容物的鉴别，内容 物的检查，对含有的成分进行含量测定，但是盐酸法舒地尔在合成过程中易生成副产物1， 4-二（5-异喹啉磺酰基）-五氢-1，4二氮杂卓二聚体，化学式为C23H22N4O4S2，分子量为 482.12,结构式为：
[0008] 在二聚体的合成过程中也用到高哌嗪，因此会影响盐酸法舒地尔的生产和保证质 量，而上述公开的专利中并未对二聚体和高哌嗪的含量进行质量检测和控制，现有技术并 不能完全有效、准确的控制盐酸法舒地尔的质量。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种盐酸法舒地尔的质量控制方 法，该方法简单易行，精确度和准确性高，进一步提高了盐酸法舒地尔的质量和完善了现有 行业标准。
[0010] 本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，包 括性状的观察、内容物的鉴别、内容物的检查和对含有的成分进行含量测定，所述内容物的 检查包括有关物质含量的测定和高哌嗪含量的测定。
[0011] 进一步地，所述有关物质含量的测定包括以下步骤：
[0012] S1.取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中含0. lmg的溶液，作 为供试品溶液;精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每lml中含lyg的溶液，作 为对照溶液;另取1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体，精密称定，加流动 相溶解并定量稀释制成每lml中约含0. lyg的溶液，作为对照品溶液；
[0013] S2.照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇. 5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调pH 值为7.5，检测波长为220nm;理论板数按盐酸法舒地尔计算不低于2000，盐酸法舒地尔和相 邻杂峰的分离度应符合要求；
[0014] S3.取对照溶液20μ1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高 约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相 色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍；
[0015] S4.供试品溶液色谱图中如出现与对照品溶液液相色谱中二聚体峰保留时间一致 的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得大于〇. 1 % ;其他单个杂质峰面积不得大于对照 溶液主峰面积的0.1倍，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。
[0016] 进一步地，所述1,4-二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1,4二氮杂卓二聚体的合成方法 为:异喹啉-5-磺酰氯盐酸盐与二氯甲烷混合后降温至0~5°C，调节pH至5~6后保温搅拌25 ~35min，静置分层、水层用二氯甲烷萃取并干燥得干燥液;将高哌嗪溶解于无水四氢呋喃 中，在0~5°C的条件下滴加至干燥液中，保温搅拌1.5~2.5h，调节pH至5,过滤、干燥后得粗 品1,4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体。
[0017] 进一步地，所述高哌嗪含量的测定方法为：
[0018] (1)取本品，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lrnl中约含O.lg的溶 液，作为供试品溶液;另取高哌嗪适量，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lml 中约含0. lmg的溶液，作为对照品溶液；
[0019] (2)照气相色谱法中国药典2010年版一部附录VI E试验，火焰离子化检测器：以 5 %二苯基和95 %二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱;起始温度为80°C，维持 lmin，以10°C/min的速率升温至260°C，维持lOmin;进样口温度为280°C ;检测器温度为280 °C ;分流比为10:1;氢气流速为30ml/min;空气流速为300ml/min;载气为氮气；
[0020] (3)精密吸取二甲基亚砜、供试品溶液、对照品溶液各0.2μ1注入气相色谱仪，记录 色谱图，按外标法以峰面积计算，高哌嗪含量不得大于〇. 1 %。
[0021] 进一步地，所述性状的观察为本品为白色或类白色结晶型粉末、无臭、味微苦，有 引湿性;本品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中几乎不溶。
[0022]进一步地，所述内容物的鉴别包括以下步骤：
[0023] A.取本品15mg，加水2ml，加亚硝基铁氰化钠试液-5%乙醛溶液1滴，所述亚硝基铁 氰化钠试液与5 %乙醛溶液的体积比为2:1，再加碳酸钠溶液1滴，振摇，溶液显蓝色，渐变为 暗橙色；
[0024] B.取本品适量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中国药典2010年版二部附录IV A 紫外-可见风光光度法测定，在275nm、312nm与324nm的波长处有最大吸收，在250nm和297nm 的波长处有最小吸收；
[0025] C.取干燥失重项下的供试品测定红外光吸收图谱与对照品的图谱一致，同中国药 典2010年版二部附录IV C;
[0026] D.本品的水溶液酰氯化物的鉴别反应，同中国药典2010年版二部附录III。
[0027]进一步地，所述对含有的成分进行含量测定方法为照中国药典2010年版二部附录 V D高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂；以1.0%三乙胺：甲醇：乙腈=1:0.5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调节pH值至7.5; 检测波长为275nm;理论板数按盐酸法舒地尔计算不低于2000,盐酸法舒地尔和相邻杂质峰 的分离度应符合要求;测定法:取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml 中约含0.15mg的溶液，作为供试品溶液;精密量取20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取 盐酸法舒地尔对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算。
[0028] 本发明具有以下优点：盐酸法舒地尔在合成反应过程中容易产生降解杂质，且容 易发生副反应生成二聚体杂质，起始反应物料高哌嗪不易除尽，均会影响产品的纯度和安 全性，因此需要在生产过程中对产品杂质进行及时含量测定，以便控制生产过程的产品质 量，本发明方法在现有控制方法的基础上增加了有关物质含量的测定和高哌嗪含量的测 定，有关物质含量的测定重点测定了二聚体的含量，因此，本发明的质量控制方法进一步提 高了盐酸法舒地尔的质量和完善了现有行业标准，具有简单易行，精确度和准确性高的优 点，对提尚广品质量有重大意义。
【附图说明】
[0029] 图1为1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢_1，4二氮杂卓二聚体溶液浓度与主峰面积 的线性回归曲线图，检测波长为220nm;
[0030] 图2为高哌嗪溶液浓度与主峰面积的线性回归曲线图；
[0031]图3为1，4_二（5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体对照品溶液HPLC色谱 图谱；
[0032]图4为盐酸法舒地尔成品供试品溶液有关物质检查HPLC色谱图谱；
[0033] 图5为高哌嗪对照品溶液气相色谱图谱；
[0034] 图6为盐酸法舒地尔成品供试品溶液检查残留高哌嗪气相色谱图谱。
【具体实施方式】
[0035] 下面结合附图及实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以 下所述。
[0036] 实施例1:1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4二氮杂卓二聚体的合成
[0037] 在500ml反应瓶中加入50.0g异喹啉-5-磺酰氯盐酸盐和150ml二氯甲烷，混合后降 温至〇°C，滴加碳酸氢钠水溶液（16.5g/250mlH20)调节pH至5后保温搅拌25min，静置分层、 分出二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，在〇°C的温度下用无水硫酸镁干燥得 干燥液；
[0038] 将18.8g高哌嗪溶解于150ml无水四氢呋喃中，在0°C的条件下滴加至干燥液中，保 温搅拌1.5h，调节pH至5，搅拌lh，将反应液减压浓缩至干，加入500ml水，50°C搅拌2h，过滤、 收集滤饼，取500ml烧瓶，加入上述固体，加入250ml甲醇，加热至沸腾，保温搅拌lh，热过滤， 收集滤饼，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体20g;
[0039] 将20g 1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓（二聚体)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完毕后，搅拌lh，过滤，收集滤饼。真空干燥得1，4_二(5-异 喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体)15g。
[0040] 实施例2:1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4二氮杂卓二聚体的合成
[0041 ] 在500ml反应瓶中加入50.0g异喹啉-5-磺酰氯盐酸盐和150ml二氯甲烷，混合后降 温至5°C，滴加碳酸氢钠水溶液（16.5g/250mlH20)调节pH至6后保温搅拌35min，静置分层、 分出二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，在5°C的温度下用无水硫酸镁干燥得 干燥液；
[0042] 将18.8g高哌嗪溶解于150ml无水四氢呋喃中，在5°C的条件下滴加至干燥液中，保 温搅拌2.5h，调节pH至5，搅拌lh，将反应液减压浓缩至干，加入500ml水，50°C搅拌2h，过滤、 收集滤饼，取500ml烧瓶，加入上述固体，加入250ml甲醇，加热至沸腾，保温搅拌lh，热过滤， 收集滤饼，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体20g;
[0043] 将20g 1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓（二聚体)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完毕后，搅拌lh，过滤，收集滤饼。真空干燥得1，4_二(5-异 喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体)15g。
[0044] 实施例3:1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4二氮杂卓二聚体的合成
[0045] 在500ml反应瓶中加入50.0g异喹啉-5-磺酰氯盐酸盐和150ml二氯甲烷，混合后降 温至3°C，滴加碳酸氢钠水溶液（16.5g/250mlH20)调节pH至5.5后保温搅拌28min，静置分 层、分出二氯甲烷层，水层用二氯甲烷萃取，合并有机层，在2°C的温度下用无水硫酸镁干燥 得干燥液；
[0046] 将18.8g高哌嗪溶解于150ml无水四氢呋喃中，在3°C的条件下滴加至干燥液中，保 温搅拌2h，调节pH至5，搅拌lh，将反应液减压浓缩至干，加入500ml水，50 °C搅拌2h，过滤、收 集滤饼，取500ml烧瓶，加入上述固体，加入250ml甲醇，加热至沸腾，保温搅拌lh，热过滤，收 集滤饼，真空干燥2h，得粗品1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体20g;
[0047] 将20g 1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓（二聚体)粗品用50ml二氯 甲烷溶解，滴加甲醇300ml。滴加完毕后，搅拌lh，过滤，收集滤饼。真空干燥得1，4_二(5-异 喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体)15g。
[0048] 实施例4: 一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，包括性状的观察、内容物的鉴别、内 容物的检查和对含有的成分进行含量测定，所述内容物的检查包括有关物质含量的测定和 高哌嗪含量的测定。
[0049] 所述有关物质含量的测定包括以下步骤：
[0050] S1.取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中含0. lmg的溶液，作 为供试品溶液;精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每lml中含lyg的溶液，作 为对照溶液;另取1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4二氮杂卓二聚体，精密称定，加流动 相溶解并定量稀释制成每lml中约含Ο. lyg的溶液，作为对照品溶液；
[0051 ] S2.照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合 硅胶为填充剂，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇. 5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调pH 值为7.5，检测波长为220nm;理论板数按盐酸法舒地尔计算不低于2000，盐酸法舒地尔和相 邻杂峰的分离度应符合要求；
[0052] S3.取对照溶液20μ1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高 约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相 色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍；
[0053] S4.供试品溶液色谱图中如出现与对照品溶液液相色谱中二聚体峰保留时间一致 的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得大于〇. 1 % ;其他单个杂质峰面积不得大于对照 溶液主峰面积的0.1倍，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。
[0054] 所述高哌嗪含量的测定方法为：
[0055] (1)取本品，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lml中约含O.lg的溶 液，作为供试品溶液;另取高哌嗪适量，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lml 中约含0. lmg的溶液，作为对照品溶液；
[0056] (2)照气相色谱法中国药典2010年版一部附录VI E试验，火焰离子化检测器：以 5%二苯基与95%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱;起始温度为80°C，维持 lmin，以10°C/min的速率升温至260°C，维持lOmin;进样口温度为280°C ;检测器温度为280 °C ;分流比为10:1;氢气流速为30ml/min;空气流速为300ml/min;载气为氮气；
[0057] (3)精密吸取二甲基亚砜、供试品溶液、对照品溶液各0.2μ1注入气相色谱仪，记录 色谱图，按外标法以峰面积计算，高哌嗪含量不得大于〇. 1 %。
[0058] 所述性状的观察为本品为白色或类白色结晶型粉末、无臭、味微苦，有引湿性;本 品在水中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中几乎不溶。
[0059] 所述内容物的鉴别包括以下步骤：
[0060] A.取本品15mg，加水2ml，加亚硝基铁氰化钠试液-5%乙醛溶液1滴，所述亚硝基铁 氰化钠试液与5 %乙醛溶液的体积比为2:1，再加碳酸钠溶液1滴，振摇，溶液显蓝色，渐变为 暗橙色；
[0061 ] B.取本品适量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中国药典2010年版二部附录IV A 紫外-可见风光光度法测定，在275nm、312nm与324nm的波长处有最大吸收，在250nm和297nm 的波长处有最小吸收；
[0062] C.取干燥失重项下的供试品测定红外光吸收图谱与对照品的图谱一致，同中国药 典2010年版二部附录IV C;
[0063] D.本品的水溶液酰氯化物的鉴别反应，同中国药典2010年版二部附录III。
[0064]所述对含有的成分进行含量测定方法为照中国药典2010年版二部附录V D高效液 相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1.0% 三乙胺：甲醇：乙腈= 1:0.5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调节pH值至7.5;检测波长为 275nm;理论板数按盐酸法舒地尔计算不低于2000,盐酸法舒地尔和相邻杂质峰的分离度应 符合要求；测定法：取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含 0.15mg的溶液，作为供试品溶液;精密量取20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸法 舒地尔对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算。
[0065] 以下通过实验说明本发明的有益效果：
[0066] 1.检测限的测定
[0067] (1)取1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体），用流动相溶解并 稀释，按照有关物质的检查方法及仪器条件进行检测限测定。结果表明在此色谱条件下，当 进样浓度为0. 〇〇26ug/ml进样20ul，本品彳目噪比为3:1，故1，4_二(5_异卩奎琳横醜基)-五氛-1,4-二氮杂卓(二聚体)检查的检测限为0.052ng。
[0068] (2)精密称取高哌嗪适量，用二甲基亚砜(DMS0)溶解，并稀释制备供试液，按照高 哌嗪的检查方法及仪器条件进行检测限测定。结果表明在此色谱条件下，当进样量0.2ul， 进样浓度为20ug/ml，本品信噪比为3:1，故高哌嗪检查的检测限为4ng。
[0069] 2.进样精密度试验
[0070] (1)精密称取盐酸法舒地尔样品l〇mg于50ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，过滤 后待用。在所选色谱条件下，重复进样6次，进样量20μ1，记录色谱图。计算220nm时1，4-二 (5-异喹啉磺酰基)-五氢-1,4-二氮杂卓(二聚体)的相对标准偏差，结果见表1。
[0074] (2)称取高哌嗪适量，用二甲基亚砜(DMS0)溶解并稀释制成含高哌嗪lmg/ml的溶 液作为供试液，按照拟定的气相色谱条件试验，精密吸取供试溶液〇 . 2μ1注入气相色谱仪， 进样6次，记录色谱图，结果主峰面积RSD%为1.3%，测定高哌嗪的精密度良好，结果见表2。 [0075] 表2精密度试验结果
[0076]
[0077] 3.样品溶液稳定性试验
[0078] (1)分别称取精密称取1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体）， 盐酸法舒地尔各适量，分别加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含二聚体0. lug、盐酸 法舒地尔0.2mg+二聚体0. lug的混合供试液。分别在放置Oh、0.5h、1. Oh、1.5h、2. Oh时，取20 μL进样，测定峰面积和保留时间，以考察被测溶液的稳定性。结果样品溶液在测定条件下是 基本稳定的，如表3所不。
[0079]表3二聚体溶液稳定性试验结果
[0082] (2)分别称取高哌嗪、盐酸法舒地尔各适量，分别用二甲基亚砜(DMS0)溶解并稀释 制成含高哌嗪lmg/ml供试液、盐酸法舒地尔50mg/ml+高哌嗪0.5mg/ml的混合供试液。按照 拟定的气相色谱条件试验，精密吸取各供试溶液各〇.2μ1注入气相色谱仪，记录色谱图，测 定峰面积和保留时间，以考察被测溶液的稳定性。结果高哌嗪样品溶液在测定条件下是基 本稳定的，如表4所示。
[0083] 表4高哌嗪溶液稳定性试验结果
[0084]
[0085] 4.线性及其范围
[0086] (1)1，4_二(5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体)线性范围测定
[0087]精密称取1，4_二（5-异喹啉磺酰基)_五氢-1，4-二氮杂卓（二聚体)0.02g，以流动 相为溶剂，采用逐步稀释法，分别制得〇 · 2mg/ml、0 · 02mg/ml、0 · 002mg/ml、0 · 0002mg/ml、 0.00002mg/ml的标准溶液。在所选择的色谱条件下，进样20μ1标准溶液，并记录峰面积，结 果见表5,图1。
[0088] 表5二聚体线性范围的测定
[0091]由图1可知:将对照品在220nm的峰面积(Υ)对相应的浓度(X)进行线性回归处理， 得回归方程y = 135425805.2431x+5932.0220，相关系数r2 = 1。可见，在0.0204~204μg/ml 范围内1，4-二(5-异喹啉磺酰基)-五氢-1，4-二氮杂卓(二聚体)浓度与峰面积呈良好的线 性关系。
[0092] (2)精密称取高哌嗪适量，用二甲基亚砜(DMS0)溶解，并采用逐步稀释法制备不同 浓度供试液，按照拟定的气相色谱条件试验，精密吸取各供试溶液各0.2μ1注入气相色谱 仪，记录色谱图，将主峰面积（Υ)对相应的浓度（X)进行线性回归处理，得回归方程y = 1901257.95x-238823.86，相关系数r2 = 1。可见，在0.20384~5.096mg/ml范围内高哌嗪浓 度与峰面积呈良好的线性关系，结果见表6及图2。
[0093] 表6高哌嗪线性范围的测定
[0095] 4.准确度（回收率)试验
[0096] (1)分别称取盐酸法舒地尔l.Og，共9份，分别置10ml量瓶中，再分别精密加入二聚 体使每瓶供试液中二聚体重量约为0 · 8ug、0 · 8ug、0 · 8ug、lug、lug、lug、1 · 2ug、1 · 2ug、 1.2ug，用流动相溶解完全摇匀作为供试溶液。另精密称取二聚体对照品适量，用流动相溶 解并稀释制成含二聚体〇. lug/ml的溶液作为对照品溶液，按照拟定的液相色谱条件试验， 精密吸取各供试溶液各20μ1注入液相色谱仪，记录色谱图。计算二聚体的回收率。结果见表 7,可见拟定的液相色谱方法回收率良好，测定结果准确、可信。
[0097]表7二聚体回收率试验结果
[0100] (2)分别称取盐酸法舒地尔l.Og，共9份，分别置10ml量瓶中，再分别精密加入高哌 嗪使每瓶供试液中高哌嗪重量约为 811^、811^、811^、1〇11^、1〇11^、1〇11^、1211^、1211^、1211^，用二 甲基亚砜（DMSO)溶解完全作为供试溶液。另精密称取高哌嗪对照品适量，用二甲基亚砜 (DMS0)溶解并稀释制成含高哌嗪lmg/ml的溶液作为对照品溶液，按照拟定的气相色谱条件 试验，精密吸取各供试溶液各〇.2μ1注入气相色谱仪，记录色谱图。计算高哌嗪的回收率。结 果见表8,可见气相色谱方法回收率良好，测定结果准确、可信。
[0101] 表8高哌嗪回收率试验结果
[0102]
[0103] 6.方法重现性实验
[0104] (1)有关物质检测方法:照高效液相色谱法(附录V D)测定
[0105] 取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含0. lmg的溶液，作为 供试品溶液;精密量取适量，用流动相定量稀释制成每lml中约含lug的溶液，作为对照溶 液。另取二聚体(1，4-二(5-异喹啉横酰基)-五氢-1，4-二氣杂卓)对照品，精密称定，加流动 相溶解并定量稀释制成每lml中约含0. lug的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（中 国药典2010年版二部附录VD)试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以1.0 %三乙胺： 甲醇：乙腈=1:0.5:0.5(用磷酸调节pH值7.5)为流动相，检测波长为220nm。理论板数按盐 酸法舒地尔计算不低于2000,盐酸法舒地尔和相邻杂质峰的分离度应符合要求。取对照溶 液20μ1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%。再 精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至 主成分峰保留时间的6倍。供试品溶液色谱图中如出现与对照品溶液色谱图中二聚体峰保 留时间一致的峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得大于0.1%。其他各杂质峰面积的和 不得大于对照溶液主峰面积（1.0 %)。单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.1倍 (0.1%),
[0106] 取同一批样品，按以上有关物质检查方法进行6次试验，考察有关物质检验方法重 现性，结果该方法重现性良好，见表9、图3和图4。
[0107] 表9盐酸法舒地尔有关物质检验方法重现性试验结果
[0108]
[0109] (2)高哌嗪含量测定方法
[0110] 取本品，精密称定，加二甲基亚砜(DMS0)溶解并定量稀释制成每lml中约含O.lg的 溶液，作为供试品溶液；另取高哌嗪适量，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每 lml中约含0. lmg的溶液，作为对照品溶液。照气相色谱法（中国药典2010年版一部附录VIE) 试验。火焰离子化检测器(FID);以5%二苯基/95%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为 色谱柱;起始温度为80°C，维持lmin，以10°C/min的速率升温至260°C，维持lOmin;进样口温 度为280°C ;检测器温度为280°C ;分流比为10:1;氢气流速为30ml/min;空气流速为300ml/ min;载气为氮气。精密吸取二甲基亚砜、供试品溶液、对照溶液各0.2μ1注入气相色谱仪，记 录色谱图，供试品溶液的色谱图中如显高哌嗪的杂质峰，按外标法以峰面积计算。其含量不 得大于0.1 %。
[0111] 由于样品中未检出高哌嗪残留，为了考察方法重现性，故取同一批样品，定量加入 约0.1 %的高哌嗪，按以上高哌嗪含量测定方法进行6次试验，考察含量检验方法重现性，结 果该方法重现性良好，见表1 〇、图5和图6。
[0112] 表10盐酸法舒地尔中残留高哌嗪含量测定方法重现性试验结果
[0113]
[0114] 7.样品有关物质测定
[0115] 按照拟定的本品有关物质测定方法，分别测定3批样品有关物质。三批盐酸法舒地 尔样品（批号1220301、1220302、1220303)有关物质测定结果均符合拟定的质量标准规定， 见表11。
[0116] 表11 3批盐酸法舒地尔及注射液有关物质检测结果
[0117]
[0118] 8.样品中高哌嗪含量测定
[0119] 按照拟定的本品高哌嗪测定方法，分别测定3批盐酸法舒地尔样品（批号1220301、 1220302、1220303)残留高哌嗪测定结果均符合拟定的质量标准规定，见表12。
[0120]表12 3批盐酸法舒地尔残留高哌嗪检测结果
【主权项】
1. 一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，包括性状的观察、内容物的鉴别、内容物的检查 和对含有的成分进行含量测定，其特征在于，所述内容物的检查包括有关物质含量的测定 和高哌嗪含量的测定。2. 如权利要求1所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述有关物质 含量的测定包括以下步骤：51. 取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中含0. lmg的溶液，作为供 试品溶液;精密量取供试品溶液适量，用流动相定量稀释制成每lml中含lyg的溶液，作为对 照溶液;另取1，4_二(5-异喹啉磺酰基)-五氢_1，4二氮杂卓二聚体，精密称定，加流动相溶 解并定量稀释制成每lml中约含0. lyg的溶液，作为对照品溶液；52. 照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法试验，用十八烷基硅烷键合硅胶 为填充剂，以1. 〇%三乙胺：乙醇：乙腈=1: 〇 . 5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调pH值为 7.5，检测波长为220nm;理论板数按盐酸法舒地尔计算不低于2000，盐酸法舒地尔和相邻杂 峰的分离度应符合要求；53. 取对照溶液20μ1，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为 满量程的20%，再精密量取供试品溶液、对照溶液与对照品溶液各20μ1，分别注入液相色谱 仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的6倍；54. 供试品溶液色谱图中如出现与对照品溶液液相色谱中二聚体峰保留时间一致的 峰，按外标法以峰面积计算，其含量不得大于〇. 1%;其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液 主峰面积的0.1倍，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积。3. 如权利要求2所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述1，4-二 (5-异喹啉磺酰基)-五氢-1,4二氮杂卓二聚体的合成方法为:异喹啉-5-磺酰氯盐酸盐与二 氯甲烷混合后降温至0~5°C，调节pH至5~6后保温搅拌25~35min，静置分层、水层用二氯 甲烷萃取并干燥得干燥液;将高哌嗪溶解于无水四氢呋喃中，在0~5°C的条件下滴加至干 燥液中，保温搅拌1.5~2.5h，调节pH至5,过滤、干燥后得粗品1，4_二(5-异喹啉磺酰基)-五 氢-1,4二氮杂卓二聚体。4. 如权利要求1所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述高哌嗪含 量的测定方法为： (1) 取本品，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lml中约含0. lg的溶液，作 为供试品溶液；另取高哌嗪适量，精密称定，加二甲基亚砜溶解并定量稀释制成每lml中约 含0. lmg的溶液，作为对照品溶液； (2) 照气相色谱法中国药典2010年版一部附录坑：E试验，火焰离子化检测器：以5%二苯 基和95%二甲基聚硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱;起始温度为80°C，维持lmin，以10 °C/min的速率升温至260°C，维持lOmin;进样口温度为280°C ;检测器温度为280°C ;分流比 为10:1;氢气流速为30ml/min;空气流速为300ml/min;载气为氮气； (3) 精密吸取二甲基亚砜、供试品溶液、对照品溶液各0.2μ1注入气相色谱仪，记录色谱 图，按外标法以峰面积计算，高哌嗪含量不得大于〇. 1%。5. 如权利要求1所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述性状的观 察为本品为白色或类白色结晶型粉末、无臭、味微苦，有引湿性;本品在水中易溶，在甲醇中 溶解，在乙醇中溶解，在氯仿或乙醚中几乎不溶。6. 如权利要求1所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述内容物的 鉴别包括以下步骤： A. 取本品15mg，加水2ml，加亚硝基铁氰化钠试液-5%乙醛溶液1滴，所述亚硝基铁氰化 钠试液与5%乙醛溶液的体积比为2:1，再加碳酸钠溶液1滴，振摇，溶液显蓝色，渐变为暗橙 色； B. 取本品适量，加水制成lml中含30yg的溶液，照中国药典2010年版二部附录设：A紫 外-可见风光光度法测定，在275nm、312nm与324nm的波长处有最大吸收，在250nm和297nm的 波长处有最小吸收； C. 取干燥失重项下的供试品测定红外光吸收图谱与对照品的图谱一致，同中国药典 2010年版二部附录IV C; D. 本品的水溶液酰氯化物的鉴别反应，同中国药典2010年版二部附录m。7. 如权利要求1所述的一种盐酸法舒地尔的质量控制方法，其特征在于，所述对含有的 成分进行含量测定方法为照中国药典2010年版二部附录V D高效液相色谱法测定，色谱条 件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1.0%三乙胺：甲醇：乙腈=1: 0.5:0.5为流动相，所述流动相用磷酸调节pH值至7.5;检测波长为275nm;理论板数按盐酸 法舒地尔计算不低于2000，盐酸法舒地尔和相邻杂质峰的分离度应符合要求;测定法:取本 品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每lml中约含0.15mg的溶液，作为供试品 溶液;精密量取20μ1，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取盐酸法舒地尔对照品，同法测定， 按外标法以峰面积计算。
【文档编号】G01N21/3563GK105866263SQ201610173938
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年3月24日
【发明人】黄筱萍, 陈开军, 姚欣, 刘建廷, 杨群慧, 杨波, 蒲洪橙
【申请人】四川升和药业股份有限公司