际情况，选择株数10株至30株均可较准确地反应所测品种的抗 冷性，且工作量又不会过大。
[0053] 预实验4恢复生长溫度和时间的筛选
[0054] 棉花适合生长溫度为28°C，所W恢复生长的溫度选为28°C。
[00巧]4°C处理24h，28°C恢复生长4天至7天的伤害症状均已出现，所W调查时间为恢复 生长4天至7天均可，但4天的症状不如7天的明显，所W为了容易区分不同材料间、同一材料 不同株之间的受伤害症状，选择恢复生长7天进行调查，同时更有利于高效进行鉴定。
[0056] 实施例1
[0057] 1、材料的选择
[0058] 陆地棉子叶期抗冷鉴定指标的筛选所用材料选当前大面积推广的47个陆地棉花 品种，运些材料在田间、苗期、提前播种中等初步筛选中，田间农艺性状等综合性状优异，抗 病、抗虫，产量能保证后续室内实验的顺利进行。其来源及系谱见表5,分别来源于美国和中 国的华北、华中、山东等地，来源广泛，遗传变异丰富。
[0059] 表5子叶期抗冷鉴定所用试验材料来源及系谱
[0060]
[0061]
[0062] 2、试验方法
[0063] W上品种进行抗冷性鉴定，方法为将30株待测品系子叶期的健壮幼苗4°C低溫处 理24小时，再在28°C下恢复生长7天，然后调查茎的状态和子叶受伤害面积，按表1的标准判 定冷害级别，W公式一、公式二计算待测品种抗冷指数，按表2的标准鉴别抗冷级别。具体的 操作细节如下：
[0064] 1)种子的挑选，挑选有活力的种子，饱满的、均匀一致的，无破损的棉花种子50粒， 毛子或光子均可，本实施例所用种子均为2014年大田新收获的种子，毛子。每一品种设Ξ个 重复。
[0065] 2)子叶期棉花苗的培育:将高溫灭菌拌匀的沙子加水至水分含量为质量百分含量 23%，均匀平铺于长19.5cm、宽14cm、深5cm的长方型发芽盒中，沙子的厚度约为2cm，将数好 的巧0粒)供试材料的种子均匀平铺于上面，再加盖同样湿度和厚度的沙子，盖上长19.3cm、 宽13.8cm、深7cm的盖子，加盖保湿，放置于28°C溫度的光照培养箱里，光照时间设置为14h， 黑暗时间10h"7d后，将子叶未平展的、弱苗及崎形苗拔除，每盒中留下长势均匀的、健壮的 苗30棵用于后续实验。
[0066] 3)低溫处理方法：将预留好的苗诱足水，使沙±的含水量达质量百分含量85-95%，加盖保湿。放于溫度为4°C、光照/黑暗为14h/l化的生长箱中处理2地，取出，直接放于 溫度为28°C、光照/黑暗为14h/10h的生长箱中恢复生长7d。
[0067] 4)抗冷性鉴定标准：
[0068] 先调查茎的状态，分为茎烂断和茎完好，再针对茎完好的单株调查子叶脱落情况， 调查未脱落子叶的受伤害面积，记录烂斑面积占该片叶面积比例为X，记录总烂斑面积占总 叶面积比例为Υ(当只有一片子叶未脱落时，Υ = Χ;当子叶完好时视为X = 0);具体各个级别 的参考照片见图2。
[0069] 根据调查茎的状态和子叶受伤害情况，按表1的标准判定冷害级别：
[0070] 表1陆地棉子叶期叶片冷害级别
[0071]
[0073] W公式1、公式2计算待测品种抗冷指数：
[0074] 冷害指数（％)=Σ (级别X该级株数)/(8X总株数）X100 1
[007引抗冷指数（％ ) = 100-冷害指数2
[0076]根据计算所得的抗冷指数，按表2的标准鉴别抗冷级别：
[OOW]表2子叶期抗冷鉴定级别和评价标准 [007 引
[0079]
。
[0080] 3、试验结果
[0081] 4°C低溫处理24h后，不同材料间及同一材料的不同个体间冷害差异显著，表现参 见图2均符合表1列出的情景，且能明显区分，说明利用该处理条件来鉴定棉花子叶期抗冷 性是可行的。试验结果见表6:
[0082] 表6棉花子叶期抗冷性种质资源的筛选
[0083]
[0084]
[0085] 由表6可W看出，不同陆地棉花种质材料间子叶期抗冷性差异显著，充分证明本鉴 定方法的可靠性。47份陆地棉花种质资源材料的抗冷指数由14.29%到86.35%不等，平均 抗冷指数为51.60%。47份陆地棉种质资源材料中，子叶期抗冷的材料有8份，分别为耶鄰 109、豫2067、GZ1、创棉22、冀杂3268F6、中棉所44、中404A抗-13、光巧2,占总鉴定材料的 17.02%，耐冷的有16份，占34.04%，不抗冷的有20份，冷敏感材料3份，没有高抗冷的材料。 由此可见，用4°C处理24h鉴定陆地棉子叶期抗冷性是可行的。在长期北方高缔度种植筛选 训化过程中，陆地棉中有部分材料已经拥有了一定的抗冷性(17.02%)，但是对于子叶期的 棉花来说，仍有将近一半的材料还是不抗冷或冷敏感(42.55%)。运些材料的差异筛选为W 后棉花的抗冷育种和抗冷机理的进一步研究铺平道路。
[0086] W上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人 员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可W做出若干改进和润饰，运些改进和润饰 也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种棉花子叶期抗冷鉴定方法，其特征在于，其为将长势均匀的多株待测品系子叶 期的健壮幼苗低温处理，再在正常温度下恢复生长，然后调查茎的状态和子叶受伤害情况， 按表1的标准判定冷害级别，以公式1、公式2计算待测品种抗冷指数，按表2的标准鉴别抗冷 级别； 所述调查茎的状态和子叶受伤害面积，具体如下：先调查茎的状态，分为茎烂断和茎完 好，再针对茎完好的单株调查子叶脱落情况，调查未脱落子叶的受伤害面积，记录烂斑面积 占该片叶面积比例为X，记录总烂斑面积占总叶面积比例为Y; 表1陆地棉子叶期叶片冷害级别冷害指数（％ ) = Σ (级别X该级株数)/(8 X总株数）X 100 1 抗冷指数（％ ) = 100-冷害指数2 表2子叶期抗冷鉴定级别和评价标准2. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述多株为10株及以上。3. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，其中的处理所述低温处理，处理温度 为0-15°C，处理时间为6-24h。4. 根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，其中的处理所述低温处理，处理温度 为4°C，处理时间为24h。5. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述恢复生长的时间为4-7天。6. 根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述低温处理，具体操作方法为:将种 在沙子中的子叶期棉花健壮幼苗浇足水，使得沙子的含水量达质量百分含量85-95%，放入 低温环境下处理。7. 根据权利要求6所述的鉴定方法，其特征在于，所述种在沙子中的子叶期棉花健壮幼 苗，为种在以沙子为基质的发芽盒中的健壮幼苗，发芽盒加盖保湿。8. 根据权利要求1~7任一项所述的方法，其特征在于，其为将30株长势均匀的待测品 系子叶期健壮幼苗，4°C低温处理24小时，再在28°C下恢复生长7天，然后调查茎的状态和子 叶受伤害情况，按表1的标准判定冷害级别，以公式1、公式2计算待测品种抗冷指数，按表2 的标准鉴别抗冷级别。9. 权利要求1~8任一项所述棉花子叶期抗冷鉴定方法在棉花育种中的应用。10. 权利要求1~8任一项所述棉花子叶期抗冷鉴定方法在棉花种植推广中的应用。
【专利摘要】本发明涉及植物的抗冷性鉴定，具体提供一种棉花子叶期抗冷鉴定方法，其为将长势均匀的多株待测品系子叶期的健壮幼苗低温处理，再在正常温度下恢复生长，然后调查茎的状态和子叶受伤害情况，按标准判定冷害级别，计算待测品种抗冷指数，按标准鉴别抗冷级别。本发明的鉴定方法具有简便、直观、可靠、周期短的优点，可以有效进行棉花苗期种质资源以及品种的抗冷性筛选，为以后棉花的抗冷育种和抗冷机理的进一步研究铺平道路。
【IPC分类】A01G7/06, G06Q50/02
【公开号】CN105447763
【申请号】CN201510948563
【发明人】王俊娟, 叶武威, 王德龙, 阴祖军, 穆敏, 王帅, 陆许可, 樊伟莉, 郭丽雪
【申请人】中国农业科学院棉花研究所
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月17日