一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种肿瘤靶向聚合物胶束及其制备方法，属于肿瘤细胞靶向治疗载体及其制备方法技术领域。
【背景技术】
[0002]由于肿瘤组织内的肿瘤细胞、肿瘤血管内皮细胞、肿瘤淋巴管内皮细胞等表面会表达一些区别于正常组织的特异性受体，因此利用与受体有亲和力的配体修饰的材料会对肿瘤组织产生主动靶向性；采用配体修饰策略的靶向给药系统，即经受体介导的内吞途径入胞，是目前癌症治疗过程中能够有效提高对肿瘤的靶向效率和治疗效果的方法。
[0003]胶束是一种新型的给药方式，两亲性嵌段共聚物胶束指的是两亲性嵌段共聚物在溶液中自组装形成“核-壳”结构的纳米载体，胶束的核能包封疏水性药物并保护它们不被降解，壳可以起到稳定的作用。疏水性药物进入疏水核，亲水性药物进入亲水壳层，可显著提高药物的水溶解性，兼且可具有靶向作用、增溶作用、提高稳定性作用、长循环作用等，是一种极具潜力的新型给药体系。由不同嵌段聚合物、聚合物/表面活性剂自组装成的混合胶束或聚离子复合物胶束，相对于单一嵌段聚合物形成的胶束而言，物理稳定性和载药能力都得到了提高。
[0004]哺乳动物细胞在有丝分裂过程中除了细胞数量发生变化，细胞内的很多成分也会发生变化；比如组成细胞膜的重要组分磷脂，在有丝分裂过程中的组成以及位置会发生改变。其中，磷脂酰乙醇胺是哺乳动物细胞膜磷脂的主要成分之一，大约占20%，磷脂酰乙醇胺主要位于细胞膜内叶。研究表明，在有丝分裂过程中，细胞膜内叶的磷脂酰乙醇胺会外化，暴露于分裂期细胞的卵裂沟处。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种肿瘤靶向聚合物胶束，具有细胞周期特异性靶向载体功能，对于肿瘤治疗药物具有较好的靶向性输送能力。
[0006]为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下:
一种肿瘤靶向聚合物胶束，包括:对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰的第一聚合物载体。
[0007]作为上述技术方案的具体优选，所述对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体为兰考韦泰、肉桂霉素和植物大环寡肽kalata BI中的一种，所述第一聚合物载体为包括亲水段和疏水段的共聚物，所述亲水段为聚乙二醇、聚环氧乙烷、聚乙烯吡咯烷酮、聚氨基酸、壳聚糖中的一种，所述疏水段为外消旋聚乳酸、左旋聚乳酸、聚乙醇酸、聚乳酸-羟基乙酸共聚物、己内酯、聚氨基酸中的一种。
[0008]其中，兰考韦泰的CAS编号为1391-36-2 ;肉桂霉素的CAS编号为1405-39-6 ;植物大环寡肽kalata BI为一种结构公知的植物大环寡肽。
[0009]作为上述技术方案的改进，还包括用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体，且所述第二聚合物载体在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在pH值为6.0?6.5时解聚合。
[0010]作为上述技术方案的具体优选，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物、或聚乙二醇和聚(β_氨基酯)的共聚物、或PH敏感化学键链接的胶束，所述pH敏感化学键为腙键、乙缩醛、原酸酯和乙烯醚中的一种。
[0011]本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下:
本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束，基于细胞膜成分磷脂酰乙醇胺在细胞有丝分裂M相时外向化及肿瘤组织偏酸性的基础上，创造性的采用了与磷脂酰乙醇胺具有特异性结合和高亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体并与对酸性环境敏感的第二聚合物载体组成核壳结构的混合胶束。
[0012]静脉注入体内后通过实体瘤的高通透性和滞留效应迅速主动聚集在肿瘤组织，在肿瘤组织部位第二聚合物载体解聚合，暴露出靶向配体修饰的第一聚合物载体，然后特异性结合至M相肿瘤细胞膜外化的磷脂酰乙醇胺，携带胶束聚集于M相肿瘤细胞中，不仅可以增大载药量而且使载体具有良好的入胞能力。
[0013]本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束实现了细胞周期特异性靶向载体的功能，是一种高效、低毒、肿瘤细胞靶向治疗的载体。
[0014]本发明同时也提供了上述肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，其包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体的制备过程:
当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中具有活性的氨基时，其包括以下步骤:
步骤Al.1、通过1-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化所述第一聚合物载体末端的羧基；
步骤Al.2、使步骤一中活化的羧基与对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体中的氨基缩合；
步骤Al.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体；
当对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体的分子结构中不具有活性的氨基时，其包括以下步骤:
步骤B1.1、通过1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体末端的羧基；
步骤B1.2、使步骤一中活化的羧基与所述第一聚合物载体中的氨基缩合；
步骤B1.3、对步骤二的反应产物进行透析和滤膜过滤操作，干燥滤液即得能够与细胞膜成分磷脂酰乙醇胺特异性结合的靶向载体。
[0015]作为上述技术方案的具体优选，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法包括兰考韦泰修饰第一聚合物载体的制备过程，且所述第一聚合物载体为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，其包括以下步骤:
步骤1.1、将H00C-PEG-PDLLA溶于N，N-二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐反应一段时间后，再加入交联剂N-羟基琥珀酰亚胺，室温搅拌48 ?72 小时，得到 PDLLA-PEG-CONHS ； 步骤1.2、将步骤一的最终反应液过滤后，向其中滴加洛解有兰考韦泰的一■甲基亚讽洛液，之后加入三乙胺调节pH值至7以上，室温搅拌至溶液澄清；
步骤1.3、将步骤二最终获得的溶液经透析袋透析后过滤，得澄清透明溶液，冷冻干燥后得兰考韦泰修饰的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。
[0016]作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法还包括在肿瘤组织的偏酸性环境中不稳定，在PH值为6.0?6.5时解聚合，且用于包覆所述第一聚合物载体形成核壳结构混合胶束的第二聚合物载体的制备过程，所述第二聚合物载体为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物，其包括以下步骤:
步骤2.1:将Boc-His(Dnp)-OH ■ isopropanol即溶于异丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2，4- 二硝基苯基)-L-组氨酸溶解于1，4- 二氧六环中，加入氯化亚砜反应I小时，生成沉淀过滤，用1，4- 二氧六环及乙醚洗涤沉淀，将沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量无水乙醚重结晶，得Dnp-NCA ■ Hcl ；
步骤2.2:将步骤2.1制得的Dnp-NCA ■ Hcl用N，N- 二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸钠中和盐酸，室温搅拌I小时后，加入mPEG-NH2 ■ Hcl的N，N- 二甲基甲酰胺溶液减压反应72小时后，离心后用微孔滤膜过滤得酱油色溶液，向其中加入乙醚后，静置使其沉淀，抽滤后真空干燥，得到的棕色固体PEG-b-poly (Nim-Dnp-His);
步骤2.3:将步骤2.2制得的PEG-b-poly (Nim-Dnp-His)加入N，N- 二甲基甲酰胺溶解后，加入巯基乙醇反应过夜，脱去2，4-二硝基苯基将所得淡黄色溶液装入透析袋中透析，透析后先离心再过滤，滤液冷冻干燥后即得聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。
[0017]作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法还包括对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体和第二聚合物载体制备成核壳结构混合胶束的过程，其包括以下步骤:
将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向