配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中，经超声处理后加入透析袋透析，制备成粒径为10?1000nm的核壳结构混合胶束。
[0018]作为上述技术方案的改进，所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，还包括核壳结构混合胶束包载药物的方法:
将所制得的对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体修饰第一聚合物载体以及第二聚合物载体溶于水中制得载体溶液，通过溶剂将药物溶解后，滴加于所述载体溶液中，通过搅拌或超声使之均匀分散后透析，再滤膜过滤，即得载药胶束溶液。
【附图说明】
[0019]图1为本发明所述的一种肿瘤靶向聚合物胶束的作用原理示意图；
图2为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的合成路线图；
图3为本发明所述的PEG-P(His)的合成路线；
图4为本发明所述的兰考韦泰的氢谱图；
图5为本发明所述的PEG-PDLLA的氢谱图；
图6为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的氢谱图；
图7为本发明所述的Dur-PEG-PDLLA的粒径分布示意图； 图8为本发明所述的mPEG-NH2的氢谱；
图9为本发明所述的PEG-P(His)的氢谱。
【具体实施方式】
[0020]下面将结合具体的实施例来说明本发明的内容。
[0021]下文所述PEG-PDLLA即为聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物，所述Dur-PEG-PDLLA即为兰考韦泰作为靶向配体修饰的聚乙二醇和外消旋聚乳酸的共聚物。所述PEG-P (His)即为聚乙二醇和聚组氨酸的共聚物。
[0022]如图1所示，为发明所述一种肿瘤靶向聚合物胶束的构建及释药过程示意图。本发明所述一种肿瘤靶向聚合物胶束的制备方法，包括以下步骤:
一、Dur-PEG-PDLLA的制备，如图2所示，包括以下步骤:
步骤1.1:将H00C-PEG-PDLLA (具体结构可见图2，可以通过市售获得)溶于N，N- 二甲基甲酰胺中，先加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(即EDC)反应一段时间后再加入交联剂N-羟基琥珀酰亚胺(即NHS)，室温搅拌48?72小时后，使羧基活化；得到PDLLA-PEG-CONHS (具体结构可见图2)。
[0023]步骤1.2:将步骤1.1的最终反应液过滤后，向其中滴加溶解有兰考韦泰的二甲基亚砜溶液，之后加入三乙胺调节pH值至7.4左右，室温搅拌72小时，得澄清溶液。
[0024]步骤1.3:将步骤1.2最终获得的溶液经透析袋(截留分子量为3500Da)透析24小时后，用孔径0.22微米或0.45微米的聚醚砜滤膜过滤，得澄清透明溶液，在灯光下观察有淡蓝色乳光，冷冻干燥后得Dur-PEG-PDLLA (具体结构可见图2)。
[0025]上述反应过程中所涉及的主要原料和产物的氢谱图见图4至图6，根据上述方法获得的Dur-PEG-PDLLA的粒径分布情况见图7。
[0026]二、PEG-P (His)的制备，如图3所示，包括以下步骤:
步骤2.1:将Boc-His(Dnp)-OH ■ isopropanol即溶于异丙醇的N-(叔丁氧羰基)-1-(2，4- 二硝基苯基)-L-组氨酸溶解于1，4- 二氧六环中，加入氯化亚砜反应I小时，生成沉淀过滤，用1，4- 二氧六环及乙醚洗涤沉淀，将沉淀用硝基甲烷完全溶解后，加入足量无水乙醚重结晶，得到淡黄色固体Dnp-NCA ■ Hcl (具体结构可见图3)。
[0027]步骤2.2:将步骤2.1制得的Dnp-NCA ■ Hcl用N，N- 二甲基甲酰胺溶解后加入碳酸钠中和盐酸，室温搅拌I小时后，加入mPEG-NH2 ■ Hcl的N，N- 二甲基甲酰胺溶液减压反应72小时后，离心后用微孔滤膜过滤得酱油色溶液，向其中加入乙醚后，静置使其沉淀，抽滤后真空干燥，得到的棕色固体PEG-b-poly (Nim-Dnp-His)(具体结构可见图3)。
[0028]步骤2.3:将步骤2.2制得的PEG-b-poIy (Nim-Dnp-His)加入N，N- 二甲基甲酰胺溶解后，加入β -巯基乙醇反应过夜，脱去2，4- 二硝基苯基将所得淡黄色溶液装入透析袋(截留分子量为100Da)透析24小时，离心后用聚醚砜滤膜过滤，聚醚砜滤膜孔径可以选用常用的0.22微米或0.45微米，滤液冷冻干燥后即获得PEG-P (His)(具体结构可见图3)。
[0029]上述反应过程中所涉及的主要原料和产物的氢谱图见图8和图9。
[0030]三、将Dur-PEG-PDLLA和PEG-P (Hi s)制备成核壳结构混合胶束，其包括以下步骤:
将所制得的Dur-PEG-PDLLA以及PEG-P(His)溶于水中，经超声处理后加入透析袋透析，制备成粒径为10?1000 nm的以兰考韦泰修饰的聚合物胶束。
[0031]四、所述核壳结构混合胶束包载药物的方法包括以下步骤:
将难溶性药物用适当溶剂(药学上使用的能溶解该药物的溶解)溶解，制得粒径10?1000 nm的聚合物胶束。
[0032]具体地，以治疗药物紫杉醇或长春碱的包载为例:
将Dur-PEG-PDLLA和PEG-P (His)溶于水中，将紫杉醇或长春碱采用乙醇溶解后，滴加于载体溶液中，剧烈搅拌20分钟，于冰下探头超声30分钟，重蒸水透析过夜，通过0.22微米或0.45微米的滤膜过滤，即得载药胶束溶液。
[0033]五、Dur-PEG-PDLLA和PEG-P (His)靶向性输送能力的考察:
HELA细胞采用含10%胎牛血清DMEM培养基，37度5% C02，培养箱中培养，采用双胸苷阻断法同步化，具体做法:HELA细胞，DMEM培养基培养24小时，待细胞贴壁后加入胸苷(2mM/L)，继续培养18小时，PBS洗涤三次，洗去胸苷，加新鲜DMEM培养基培养9小时，加入胸苷(2 mM/L)继续培养17小时，磷酸盐缓冲液洗涤三次，洗去胸苷(同步化Gl期)，加新鲜DMEM培养基继续培养4小时(同步化S期)、10小时(同步化G2/M期)；
正常组细胞及不同时相HELA细胞分别加入包载荧光物质FITC的Dur-PEG-PDLLA、PEG-P(His)混合胶束和PEG-PDLLA、PEG-P (His)混合胶束(包载FITC的方法参考紫杉醇或长春碱的包载方法)，培养I小时后，细胞采用4%多聚甲醛固定，采用流式细胞仪分析不同组细胞摄取荧光强度。
[0034]结果Dur-PEG-PDLLA、PEG-P (Hi s)混合胶束组正常细胞组、同步化GI期组、同步化S期组、同步化G2/M期组平均荧光强度分别为37.3±5.2、23.6±3.9、26.4±6.6、72.7±13.4 ；
而PEG-PDLLA、PEG-P (His)混合胶束组正常细胞组、同步化Gl期组、同步化S期组、同步化 G2/M 期组平均荧光强度分别为 21.2±3.4、17.3±3.4、19.6±5.3,23.6±6.1。
[0035]结果表明:首先，PEG-P(His)具有针对肿瘤细胞组织的靶向输送能力；其次，采用兰考韦肽修饰PEG-PDLLA以后，相同条件下比未修饰PEG-PDLLA的摄取量显著增加，并且采用兰考韦肽修饰以后同步化G2/M期细胞摄取量显著高于其它时相细胞摄取量，这与本申请采用兰考韦肽修饰的特点是相关的。
[0036]在本发明中，PEG-PDLLA也可以采用其他类似的由亲水段和疏水段组成的共聚物代替:如亲水段还可以采用PEG (聚乙二醇)、PEO (聚环氧乙烷)、PVP (聚乙烯吡咯烷酮)、聚氨基酸、壳聚糖等，疏水段还可以采用PLLA (左旋聚乳酸)、PLG (聚乙醇酸)、PLGA (聚乳酸-羟基乙酸共聚物)、PCL ( ε_己内酯)、聚氨基酸等。
[0037]在本发明中，与兰考韦泰类似对细胞膜成分磷脂酰乙醇胺具有亲和力的靶向配体还可以是肉桂霉素、植物大环寡肽kalata BI等环肽。
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