一种新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药化学领域，具体涉及一类新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂、制备 方法、含有该组蛋白去乙酰化酶抑制剂的药物组合，以及此类抑制剂在制备预防和/或治 疗与组蛋白去乙酰化酶活性失控有关的疾病的药物中的用途，特别是抗肿瘤用途。
【背景技术】
[0002] 基因有序的转录调控是机体细胞维持正常功能的前提，如果基因转录调控功能紊 乱，细胞可能发生癌变。核心组蛋白的乙酰化和去乙酰化与基因调控密切相关，而负责组蛋 白乙酰化和去乙酰化的是一对功能相互拮抗的蛋白酶一一组蛋白乙酰化转移酶（HAT)和组 蛋白去乙酰化酶（HDACs)。HDACs是一组在细胞染色质水平、通过诱导组蛋白去乙酰化来 调控包括染色质重组、转录活化或抑制、细胞周期、细胞分化及细胞凋亡等一系列生物学效 应的酶，特别是与细胞活化后的基因转录表达的调控有关。组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过 抑制HDACs的活性，诱导细胞凋亡、分化并抑制增殖，被认为是具有发展前景的抗癌药物靶 标。目前HDAC抑制剂的研究涉及众多肿瘤领域，如血液系统、淋巴瘤、黑色素瘤、乳腺癌、卵 巢癌、前列腺癌、肺癌和结肠癌等。研究认为HDACs的亚型1-5以及7、9等抑制有助于肿瘤 的治疗，HDAC6、8的抑制则有可能与此类化合物的毒性相关。
[0003] HDACs靶点是一类具有应用前景的抗肿瘤靶标，新颖、有效的HDACs抑制剂仍然存 在临床需求，希望能产生新的，可选择的HDACs抑制剂用来预防和/或治疗与组蛋白去乙酰 化酶活性失控有关的疾病，特别是肿瘤疾病。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一类新型、有效的HDACs抑制剂及其药学上可接受的盐。
[0005] 本发明的技术方案如下：
[0006] 通式（I)的化合物或其药学上可接受的盐：
[0007]
[0008] 其中X、Y、Z、M各自独立地表示碳或者氮原子，当X、Y、Z、M为碳原子时，各自独立 地可任选被R2取代，R2可以是氣、烷基、氛基、卤素、卤代烷基、羟基、疏基、烷氧基、烧氣基、 烧硫基、烷氧基烷基、芳烷基、^芳基烷基、芳基或Het;
[0009] Q1是选自长度为2~6个碳原子的饱和或不饱和直链或支链烃基，芳基或Het;
[0010] R1选自羟基、可任选被一个或多个R3取代的2-氨基苯基，R3可以是氢、烷基、氰基、 卤素、卤代烷基、羟基、疏基、烷氧基、烧硫基、烷氧基烷基、芳烷基、芳基或Het;
[0011] 烷基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环状 饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环状 饱和烃基；
[0012] 烷氧基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环 状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环 状饱和烃基；其中各碳原子任选被氧取代；
[0013] 烷氨基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基；或为具有3-6个碳原子的环 状饱和烃基；或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的环 状饱和烃基；其中各碳原子任选被NH原子团取代；
[0014] 烷氧基烷基为如上定乂的烷氧基与烷基连接；
[0015] 烯基、炔基为具有1-6个碳原子的直链或支链的含有双键或三键的不饱和烃基；
[0016]芳基为选自苯基、萘基、苊基或四氢萘基的碳环，其各自任选被1、2或3个取代基 取代，各取代基独立地选自氣、烷基、氛基、卤素、卤代烷基、羟基、疏基、烷氧基、烧硫基、烧 氧基烷基、芳烷基、二芳基烷基、芳基或Het;
[0017]芳烷基、二芳基烷基为如上定义的芳基与烷基连接；
[0018]Het为选自吡咯基、吡唑基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异 噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或哒嗪基的单环杂环；或选自喹啉基、喹喔啉基、吲哚基、苯 并咪唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩 基、2,3_二氢苯并[1，4]二氧杂环己烯基或苯并[1，3]二氧杂环戊烯基的双环杂环；或选 自3-6个碳原子的单环饱和烃基、6-12个碳原子的双环饱和烃基，其中环上的碳原子独立 任选地被1~4个0、S、N或NH取代；各单环或双环任选被1、2或3个取代基取代，各取代 基独立选自卤素、卤代烷基、羟基、烷基或烷氧基；
[0019] 卤素为选自氟、氯、溴或碘的取代基；
[0020] 卤代烷基为具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基，或为具有3-6个碳原子的 环状饱和烃基，或为连接具有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃基的具有3-6个碳原子的 环状饱和烃基；其中一个或多个碳原子被一个或多个卤原子取代。
[0021] 本发明的优选方案在于：
[0022] X、Y、Z、M各自独立地表示碳或者氮原子，当X、Y、Z、M为碳原子时，各自独立地可 任选被R2取代，R2选自氣、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基、烧硫基、烷氧基烷基；
[0023] Q1是选自长度为2~6个碳原子的饱和或不饱和直链或支链烃基、芳基；
[0024]R1选自羟基、可任选被一个或多个R3取代的2-氨基苯基，R3可以是氢、烷基、氰基、 卤素、卤代烷基、芳基或Het。
[0025] 本发明的另一优选方案在于：
[0026]X、Y、Z、M各自独立地表示碳或者氮原子，其中X、Y、Z、M为碳原子时，各自独立地 可任选被R2取代，R2选自氢、烷基、卤素、卤代烷基、烷氧基；
[0027] Q1是选自芳基或长度为4~6个碳原子的饱和或不饱和直链或支链烃基；
[0028] R1选自羟基、可任选被一个或多个R3取代的2-氨基苯基，R3可以是氢、烷基、氰基、 卤素、卤代烷基、芳基或Het。
[0029]本发明的另一优选方案在于：
[0030]X、Y、Z、M各自独立地表示碳或者氮原子，优选X、Y、Z、M中只有一个氮原子和X、 Y、Z、M都为碳原子；
[0031] 其中X、Y、Z、M为碳原子时，各自独立地可任选被R2取代，R2可以是氢、氯、氟、三 氟甲基；
[0032] Q1是选自苯基或长度为4~6个碳原子的饱和或不饱和直链；
[0033] R1选自羟基、被一个或多个R3取代的2-氨基苯基，R3可以是氢、甲基、卤素，卤素 优选氯或氟。
[0034] 本发明的另一优选方案在于：
[0035]X、Y、Z、M各自独立地表示碳或者氮原子，优选X、Y、Z、M中只有一个氮原子和X、 Y、Z、M都为碳原子；
[0036] 其中X、Y、Z、M为碳原子时，各自独立地可任选被R2取代，R2可以是氢、氯、氟；
[0037] Q1是选自苯基或长度为4~5个碳原子的饱和直链；
[0038] R1选自羟基、被一个或多个R3取代的2-氨基苯基，R3可以是氢、甲基、卤素，卤素 优选氯或氟。
[0039] 根据本发明，药学上可接受的盐包括通式I化合物与下列酸形成的酸加成盐：盐 酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、丙酮 酸、乙酸、马来酸或琥珀酸、富马酸、水杨酸、苯基乙酸、杏仁酸。此外还包括无机碱的酸式 盐，如：含有碱性金属阳尚子、碱土金属阳尚子、铵阳尚子盐。
[0040] 通式I的化合物优选以下结构化合物：
[0041] (Z)-N-(2-氨基-4-氟苯基）-4-[[2-(7_ 氧代 _6,7_ 二氢-5H-吡咯[3,4-b]吡 啶-5-亚甲基）乙酰氨基]甲基]苯胺（I-I)
[0042] (Z)-N-(2-氨基-4-氟苯基）-4-[[2-(5-氧代-5,6-二氢-7H-吡咯[[3,4-b]吡 啶-7-亚甲基）乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺（1-2)
[0043] (Z)-N-(2-氨基-4-氟苯基）-4_[[2-(3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基）乙酰氨基] 甲基]苯甲酰胺（1-3)
[0044] (Z)-N_(2-氨基苯基）-4-[[2-(3_氧代异吲哚啉-1-亚甲基）乙酰氨基]甲基] 苯甲酰胺（1-4)
[0045] (Z)-N-(2-氨基-4-氯苯基）-4_[[2-(3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基）乙酰氨基] 甲基]苯甲酰胺（1-5)
[0046] (Z) -N- (2-氨基-4-氟苯基）-4- [ [2- (5,6-二氯-3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基） 乙酰氨基](1-6)
[0047] (Z) -N- (2-氨基-4-氟苯基）-4- [ [2- (5,6-二氯-3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基） 乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺（1-7)
[0048] (Z)-N-(2-氨基-4-氟苯基）-4-[[2-(3-氧代-2, 3-二氢-3H-吡咯[[3,4-c]吡 啶-1-亚甲基）乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺（1-8)
[0049] (Z)-N-(2-氨基-4-氟苯基）-4_ [[2-(3-氧代-2, 3-二氢-IH-吡咯[[3,4-c]吡 啶-1-亚甲基）乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺（1-9)
[0050] (Z) -N- (2-氨基-4-氟苯基）-4- [ [2- (5,6-二氟-3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基） 乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺（1-10)
[0051] (Z)-N-羟基-7-[2-(3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基）乙酰氨基]庚酰胺（I-Il)
[0052] (Z)-N-羟基-4-[[2-(3-氧代异吲哚啉-1-亚甲基）乙酰氨基]甲基]苯甲酰胺 (1-12)
[0053] 本发明的化合物制备方法如下：
[0054]方法一：
[0058] 本发明化合物都可以用上述或类似上述的制备方法制备得到，根据取代基的不同 和取代基位置的不同选用相应的原料即可。
[0059] 药理测试结果表明，通式I的化合物及其药学上可接受的盐对HDACs具有优良的 抑制活性，因此，通式I化合物及其药学上可接受的盐可以用于治疗与上上述靶标有关的 临床病症。与HDACs有关的疾病可以是，但不限于：肺癌、黑色素瘤、肝癌、肾癌、白血病、 非小细胞肺癌、前列腺癌、甲状腺癌、皮肤癌、胰腺癌、卵巢癌、睾丸癌、乳腺癌、膀胱癌、胆囊 癌、骨髓增生异常综合症、淋巴瘤、食管癌、甲状腺滤泡癌、胃肠道癌、中枢或外周神经系统 的肿瘤（例如星形细胞瘤、神经母细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤）、间皮瘤、II型或非胰岛 素依赖型糖尿病、自身免疫性疾病。
[0060] 下面是部分药理学试验及结果：
[0061] (1)目标化合物对HDACl抑制活性测定及结果
[0062] 所合成的化合物用荧光共振能量转移（FRET)法测定对HDACl的抑制活性，并与阳 性对照药比较，筛选出活性较好的化合物。HDACl通过纯化或直接购买试剂盒获得。
[0063] 具体方法：
[0064] 在反应孔中加入酶，对照孔中加入反应缓冲液，在反应孔中加入溶解在DMSO中的 样品，使用非接触式纳升级声波移液系统（Ech〇550;纳升级）进行孵育。在每一个反应孔 中加入荧光底物旋转震荡。30°C密封孵育1-2小时。加入含有TMP26的显色剂中止反应， 产生焚光。使用EnVision多标记微孔板检测仪（PerkinElmer)检测焚光强度（激发光： 490nm，发射光：520nm)。显色达到稳定后读取端点数值。使用GraphPadPrism4软件进行 百分数（相对于DMSO对照组）以及半数抑制率的计算。
[0065] 目标化合物对HDACl抑制活性结果（抑制率％，5 X 10 6mol/L)
[0066]
[0067] (2)目标化合物的体外抗肿瘤活性测定
[0068] 使用CTG方法测定化合物对白血病细胞株HL60、K562，结肠癌细胞株HCT116，淋巴 瘤细胞株HuT78等肿瘤细胞株的抑制作用。
[0069] 具体方法：收集处于指数生长期的细胞进行活细胞计数。用各细胞相应培养基调 整细胞悬液浓度。每孔加90yL细胞悬液于96孔细胞培养板。以DMSO溶解各供试化合物 为IOmM或5mM储存液。然后分别用培养基稀释至10倍溶液，各2复孔。每株细胞每孔分别 加入10yL相应的10倍溶液，最终药物浓度为10yM或25yM，DMSO终浓度分别为0. 1 %~ 0.5% (见化合物配制方法和加样设计：实验孔板加样设计）。置于37°C，5%C0J?箱中培 养72小时。药物处理72小时后，每孔加入50yL(l/2培养体积）预先融化并平衡到室温 的CTG溶液，用微孔板震荡器混匀2分钟，于室温放置10分钟后用Envisi〇n2104读板仪测 定萤光信号值。细胞抑制率用公式：（1-V sampleZVveIiiclecontrolxlOO% )计算。其中 Vsample^J药 物处理组的平均值，Vrehl^rantral为溶剂对照组的平均值。
[0070]目标化合物10 ym浓度下对上述肿瘤细胞株的体外抗肿瘤活性结果如下（抑制 率％ ):
【具体实施方式】
[0073] 实施例1
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