却。打开水解管，将水解液全部过滤转移到 25mL容量瓶中，取滤液lmL用真空干燥器在40°C干燥，蒸干，用lmL O.lmol/L的盐酸溶解， 0.45μπι的滤膜过滤来高效液相色谱进样瓶中； Β、水解产物自动柱前衍生处理，获取衍生产物 吸取硼酸缓冲液5份，吸取邻苯二甲醛1份，吸收样品1份，混匀，再吸取9-芴基甲基氯甲 酸酯1份，混匀，准备上样； C、高效液相色谱法同时γ -氨基丁酸和16种氨基酸 高效液相色谱的分离条件为，色谱柱:X Bridge C18液相色谱柱;流动相A: 1000mL纯 水中，加入4g份结晶乙酸钠，混匀，pH调为7.15;加入3.5mL四氢呋喃；流动相B: 400mL纯水 中，加入6g结晶乙酸钠，混匀，pH调为7.15;按加入800mL乙腈和800mL甲醇，混匀；梯度洗脱 备件见下表：
(I) Asp，天门冬氨酸；（2)Glu，谷氨酸；（3)Ser，丝氨酸；（4)His，组氨酸；（5)Gly，甘氨酸；（6) Thr，苏氨酸；（7)Arg，精氨酸；（8)Ala，丙氨酸；（9)GABA，γ-氨基丁酸；（lO)Tyr，酪氨酸； (II) Val，缬氨酸；（12)Met，蛋氨酸；（13)Phe，苯丙氨酸；（14)Ile，异亮氨酸；（15)Leu，亮氨 酸；（16)Lys，赖氨酸；（17)Pro，脯氨酸。
[0024]上述描述仅作为本发明可实施的技术方案提出，不作为对其技术方案本身的单一 限制条件。
【主权项】
1. 含乳饮料中丫-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色 谱方法，其特征在于:设定样品水解、衍生处理、上柱检测=个操作步骤，然后针对含乳饮料 的特性设定上述=操作步骤所使用的处理试剂及试剂用量及处理参数，使得上述=操作步 骤的工艺参数相互严密配合，实现对含乳饮料中丫-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸的一 步式高精度检测。2. 根据权利要求1所述的含乳饮料中T-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的 专用高精度高效液相色谱方法，其特征在于:该检测方法包括如下步骤： A、 制备含乳饮料水解样品：取含乳饮料置于水解管中，加入盐酸和苯酪后随即冷冻处 理，然后充入惰性气体并梓紧水解管螺盖，再将水解管放入恒溫干燥箱进行充分水解，然后 将水解液取出过滤，取滤液干燥蒸干，再次用盐酸溶解并精滤到高效液相色谱的进样瓶中； B、 水解样品的自动柱前衍生处理:在室溫条件下，吸收步骤A所得样品并与和棚酸缓冲 液、邻苯二甲醒混匀，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋混匀，准备上样； C、 高效液相色谱检测丫 -氨基下酸和16种氨基酸的含量:高效液相色谱的分离条件为， 色谱柱:通用的C18液相色谱柱;柱溫:40°C ;流动相A:纯水中加入结晶乙酸钢混匀，调pH调 后加入四氨巧喃;流动相B:纯水中加入结晶乙酸钢混匀，调抑后加入乙腊和甲醇混匀;梯度 洗脱条件设定如下：^检测条件设定如下：检测器采用二极管阵列或紫外检测器；〇-25min，设定检测波长 338nm; 25-32min，设定检测波长262nm; 32-35.5min，设定检测波长338nm。3. 根据权利要求1所述的含乳饮料中T-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的 专用高精度高效液相色谱方法，其特征在于:该检测方法包括如下步骤，下述步骤中设及的 重量份均W克为单位计算，设及的体积份均W毫升为单位计算： A、 制备含乳饮料水解样品：取含乳饮料1重量份置于水解管中，加入浓盐酸1-3体积份 或加入6mol/L盐酸10-15体积份，再加入新蒸馈的苯酪3-4滴，将水解管放入冷冻剂中，冷冻 3min-5i皿，充入高纯氮气并在充氮气状态下梓紧螺盖，将水解管放入109-11 TC的恒溫干 燥箱中，水解20-30小时后取出冷却，打开水解管，将水解液全部过滤转移到容量瓶中，取滤 液1-2体积份用真空干燥器在40°C-5(rC干燥，蒸干，用0.5-2体积份0.1mol/L的盐酸溶解， 然后采用0.化m-0. Sym的滤膜过滤到高效液相色谱进样瓶中； B、 水解样品的自动柱前衍生处理:在室溫条件下，吸收步骤A所得样品0.5-2体积份，吸 取棚酸缓冲液3-7体积份，吸取邻苯二甲醒0.5-2体积份，混匀，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋 0.5-2体积份，混匀，准备上样； C、 高效液相色谱检测丫 -氨基下酸和16种氨基酸的含量:高效液相色谱的分离条件为， 色谱柱:通用的C18液相色谱柱;柱溫:40°C;流动相A: 1000体积份纯水中加入4-8重量份结 晶乙酸钢，混匀，pH调为7.15-7.25，再加入3-5体积份四氨巧喃;流动相B: 400体积份纯水中 加入6-12重量份结晶乙酸钢，混匀，pH调为7.15-7.25，再加入600-1000体积份乙腊和600-1000体积份甲醇，混匀;梯度洗脱条件设定如下：检测条件设定如下：检测器采用二极管阵列或紫外检测器；〇-25min，设定检测波长 338nm; 25-32min，设定检测波长262nm; 32-35.5min，设定检测波长338nm。4. 根据权利要求1所述的含乳饮料中T-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的 专用高精度高效液相色谱方法，其特征在于:该检测方法包括如下步骤，下述步骤中设及的 重量份均W克为单位计算，设及的体积份均W毫升为单位计算： A、 制备含乳饮料水解样品：取含乳饮料1重量份置于水解管中，加入浓盐酸2体积份或 加入6mol/L盐酸12体积份，再加入新蒸馈的苯酪3滴，将水解管放入冷冻剂中，冷冻4imn，充 入高纯氮气并在充氮气状态下梓紧螺盖，将水解管放入ll〇°C的恒溫干燥箱中，水解24小时 后取出冷却，打开水解管，将水解液全部过滤转移到25mL容量瓶中，取滤液1.5体积份用真 空干燥器在45°C干燥，蒸干，用1体积份0.1mol/L的盐酸溶解，然后采用0.45叫!的滤膜过滤 到高效液相色谱进样瓶中； B、 水解样品的自动柱前衍生处理:在室溫条件下，吸收步骤A所得样品1体积份，吸取棚 酸缓冲液5体积份，吸取邻苯二甲醒1体积份，混匀，再吸取9-巧基甲基氯甲酸醋1体积份，混 匀，准备上样； C、 高效液相色谱检测丫-氨基下酸和16种氨基酸的含量:高效液相色谱的分离条件为， 色谱柱:通用的C18液相色谱柱;柱溫:40°C;流动相A: 1000体积份纯水中加入6重量份结晶 乙酸钢，混匀，pH调为7.15-7.25，再加入4体积份四氨巧喃;流动相B: 400体积份纯水中加入 9重量份结晶乙酸钢，混匀，P的周为7.15-7.25，再加入800体积份乙腊和800体积份甲醇，混 匀;梯度洗脱条件设定如下：检测条件设定如下：检测器采用二极管阵列或紫外检测器；〇-25min，设定检测波长 338nm; 25-32min，设定检测波长262nm; 32-35.5min，设定检测波长338nm。5. 根据权利要求1或2或3或4所述的含乳饮料中T-氨基下酸和16种蛋白水解氨基酸同
【专利摘要】本发明公开了一种含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸同时检测的专用高精度高效液相色谱方法，设定样品水解、衍生处理、上柱检测三个操作步骤，然后针对含乳饮料的特性设定上述三操作步骤所使用的处理试剂及试剂用量及处理参数，使得上述三操作步骤的工艺参数相互严密配合，实现对含乳饮料中γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式高精度检测。本发明能够实现对含乳饮料中的γ-氨基丁酸和16种蛋白水解氨基酸的一步式检测，且具有极高的灵敏度和优越的稳定性。
【IPC分类】G01N30/02, G01N30/06
【公开号】CN105651874
【申请号】
【发明人】房新平, 贾云虹, 李朝旭, 凌森, 李志钧
【申请人】河北三元食品有限公司
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2015年12月30日