211)中，血管公开在非专利文 献3和非专利文献4中，脑公开在非专利文献15 (DeQuach J. A.等人，Tissue Eng. Part A，2011，17, 2583-2592)中，皮肤公开在非专利文献9中。
[0079] 脱细胞处理可包括清洗脱细胞生物组织的步骤。清洗脱细胞生物组织的方法可以 根据脱细胞处理的种类适当选择。作为清洗方法可以示例:浸在清洗液中的方法(专利文献 6:日本特开2010-227246号公报）、照射微波的方法(专利文献7:专利第4189484号公报）。 [0080]接下来，在本发明的制作方法中，对于脱细胞处理后的生物组织进行粉碎处理。粉 碎步骤可以包括:切碎脱细胞生物组织的步骤、将切碎了的脱细胞生物组织冷冻干燥或冻 结的步骤、以及将冷冻干燥或冻结了的脱细胞生物组织粉碎的步骤。制作颗粒状脱细胞组 织的方法公开在非专利文献5、6、7、8和专利文献2中。
[0081 ]对粉碎组织的方法没有特别限定，可以示例:在常温下粉碎生物组织的方法、将生 物组织冷冻并在冻结状态下进行粉碎的方法等。当为在常温下难以粉碎的生物组织、例如 肾脏等时，优选在冻结状态下进行粉碎。在冻结状态下进行粉碎时，由于在〇°C附近的温度 下冰晶体的生长，有时会导致组织受损。因此，在冻结状态下粉碎时的粉碎条件为-80°C~-5 °C、优选为-50 °C~-10 °C、更优选为-40 °C~-15 °C。
[0082]作为粉碎方法可以示例:球磨机、珠磨机、胶体磨、锥形球磨机、盘磨机、轮辗机、铣 磨机、锤磨机、制粒机、剪切磨(cutt ing mi 11 )、滚磨机、气流粉碎机等。优选剪切磨。
[0083]另外，还可以包括:将已粉碎的脱细胞生物组织根据颗粒大小进行筛分的步骤。
[0084] 对颗粒状脱细胞组织的粒径没有特别限定，当粒径太小时，组织再生的效果低，而 当粒径太大时，难以将该组织用作移植和治疗的基材，因此粒径为0.1~ΙΟΟΟμπι、优选为0.5 ~500μηι、更优选为1~I OOym。
[0085] 在本发明的颗粒状脱细胞组织的制作方法中，在采取生物组织、将生物组织进行 脱细胞处理、清洗除去已破坏的细胞、直至获得颗粒状脱细胞组织之间的任意阶段，可以将 脱细胞组织（或生物组织)粉碎成颗粒状。即，无论粉碎步骤是在脱细胞处理之前或之后进 行，所得的颗粒状脱细胞组织均未显示出差异，可同等地用于之后的混合凝胶制作中。
[0086] 在本发明的混合凝胶的制作方法中，将颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶 混合来制作混合凝胶。混合方法可以示例:将纤维蛋白原溶液和颗粒状脱细胞组织混合，再 向所得混合物中混合凝血酶溶液(或凝血酶粉末）的方法;或者，将凝血酶溶液和颗粒状脱 细胞组织混合，再向所得混合物中混合纤维蛋白原溶液(或纤维蛋白原粉末)的方法。
[0087] 混合凝胶中所含的纤维蛋白原浓度只要是可形成凝胶的浓度即可，没有特别限 定，可以根据混合凝胶的应用部位、用途而适当变更。例如可以示例30mg/mL~40mg/mL。
[0088] 混合凝胶中所含的凝血酶浓度只要是可形成凝胶的浓度即可，没有特别限定，可 以根据混合凝胶的应用部位、用途而适当变更。凝血酶浓度为〇.8U/mL以上时，容易形成混 合凝胶。因此，凝血酶浓度可以示例0.8U/mL~250U/mL。另外，当凝胶中的凝血酶浓度低时， 细胞粘附性优异。因此，作为优选的凝血酶浓度，可以示例〇. 8U/mL~125U/mL，更优选0.8U/ mL~12.5U/mL。但是，被认为即使是不足0.8U/mL的浓度，通过调整凝胶的凝固时间、温度也 可以制作混合凝胶，因此还可以使用不足0.8U/mL的浓度。
[0089] 混合凝胶中所含的颗粒状脱细胞组织的浓度可以根据颗粒的种类、混合凝胶的应 用部位、用途而适当变更。例如可以示例16yg/mL~64yg/mL。
[0090] 2.混合凝胶 本发明包括混合凝胶，所述混合凝胶包含:将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得 的组织(脱细胞生物组织)粉碎而获得的颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白原和凝血酶。
[0091] 如上所述，关于本发明的混合凝胶，对回收生物组织的动物种类没有特别限定。优 选为人以外的动物，优选哺乳类的家畜、鸟类的家畜。作为哺乳类的家畜可以举出：牛、马、 骆驼、美洲驼、驴、牦牛、绵羊、猪、山羊、鹿、羊驼、狗、貉、黄鼠狼、狐狸、猫、兔、仓鼠、豚鼠、大 鼠、小鼠、松鼠、综熊等。作为鸟类的家畜可以举出：长尾小婴鸟鹉、鹤鹉、鸡、鸭、火鸡、鹅、珍珠 鸡、野鸡、鸵鸟、鹌鹑等。其中，从获取的稳定性方面考虑，优选猪或兔。
[0092]生物组织可以示例：具有细胞外基质结构且可进行脱细胞处理的组织。这样的组 织为选自肝脏、肾脏、输尿管、膀胱、尿道、舌、扁桃体、食道、胃、小肠、大肠、肛门、胰脏、心 脏、血管、脾脏、肺、脑、骨、脊髓、软骨、精囊、子宫、输卵管、卵巢、胎盘、角膜、骨骼肌、肌腱、 神经、皮肤等的组织。特别优选为选自心脏、肝脏、肾脏、肺、脑、脊髓、精囊、脾脏、膀胱、血管 和皮肤等的组织。生物组织特别优选为心脏、肝脏、肾脏、肺、脑和脊髓。
[0093] 如上所述，关于本发明的混合凝胶，对脱细胞处理方法没有特别限定。优选为高静 水压处理。
[0094] 如上所述，对混合凝胶中的纤维蛋白原浓度没有特别限定，只要是可形成凝胶的 浓度即可。可以示例30mg/mL~40mg/mL。
[0095] 如上所述，对混合凝胶中的凝血酶浓度没有特别限定，只要是可形成凝胶的浓度 即可。可以示例0.8U/mL~250U/mL。作为优选的浓度可以示例0.8U/mL~125U/mL，更优选 0.8U/mL~12.5U/mL。另一方面，也可以使用不足0.8U/mL的浓度。
[0096] 如上所述，对混合凝胶中的颗粒浓度没有特别限定，可以示例16yg/mL~64yg/mL。 对颗粒状脱细胞组织的粒径没有特别限定，为0.1~ΙΟΟΟμπι、优选为0.5~500ym、更优选为1 ~IOOum0
[0097] 3.疾病治疗药 根据本发明，在上述混合凝胶中确认到了 ：分化诱导来自心脏的细胞的效果、改善心肌 梗塞预后的效果、分化诱导神经前体细胞的效果、以及在皮肤冻伤部位抑制挛缩的发生以 治愈患处的效果。因此，本发明包括疾病治疗药，所述疾病治疗药包含上述混合凝胶。混合 凝胶可以是凝胶状态、冻结状态、冷冻干燥状态的任一种状态。当为冻结状态时，应用前可 以将其融化。当为冷冻干燥状态时，应用前可以进行水合。混合凝胶可直接应用于患处。本 发明的疾病治疗药可以示例:心肌梗塞治疗药、神经损伤疾病治疗药和皮肤冻伤治疗药。
[0098] 4.细胞移植辅剂、细胞培养基材 本发明的混合凝胶确认到了以下效果:对于来自心脏的细胞的分化诱导效果和获得搏 动功能的效果、以及对于神经前体细胞的分化诱导效果。因此，本发明包括含有上述混合凝 胶的细胞移植辅剂和细胞培养基材。细胞移植辅剂可以示例：主要由混合凝胶和移植细胞 构成的情形和主要由混合凝胶构成的情形。在前一种情形下，可以以使移植细胞存在于混 合凝胶内或表面上的状态应用于动物组织。在后一种情形下，可以在将混合凝胶应用于动 物组织的前后，组合移植细胞来进行应用。
[0099] 细胞培养基材可以主要由混合凝胶构成，在培养基中可以与细胞共存使用。与细 胞共存时，可以将细胞直接接种在混合凝胶上进行使用，也可以在混合凝胶和细胞之间设 置细胞培养插件进行使用。
[01 00]对细胞移植辅剂、细胞培养基材中使用的细胞没有特别限定。优选为来自心脏的 细胞、神经前体细胞或来自组织干细胞的细胞。
[0101] 5.组织再生疗法 本发明包含组织再生疗法，该疗法包括:将使来自动物的生物组织进行脱细胞所得的 组织(脱细胞生物组织)粉碎而获得颗粒状脱细胞组织和纤维蛋白胶应用于动物组织。在上 述的组织再生疗法中，通过将颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白胶应用于动物组织，在动物组织 上形成混合凝胶。此时，对应用颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白胶的顺序没有特别限定。本发 明还包含组织再生疗法，该疗法包括:将上述的混合凝胶应用于动物组织。
[0102] 如上所述，在本发明的组织再生疗法中，对回收生物组织的动物种类没有特别限 定。优选为人以外的动物，优选哺乳类的家畜、鸟类的家畜。作为哺乳类的家畜，可以举出： 牛、马、骆盤、美洲盤、驴、牦牛、绵羊、猪、山羊、鹿、羊盤、狗、貉、黄鼠狼、狐狸、猫、兔、仓鼠、 豚鼠、大鼠、小鼠、松鼠、浣熊等。作为鸟类的家畜可以举出：长尾小鹦鹉、鹦鹉、鸡、鸭、火鸡、 鹅、珍珠鸡、野鸡、鸵鸟、鹌鹑等。其中，从获取的稳定性方面考虑，优选猪或兔。
[0103] 生物组织可以示例：具有细胞外基质结构且可进行脱细胞处理的组织。这样的组 织为选自肝脏、肾脏、输尿管、膀胱、尿道、舌、扁桃体、食道、胃、小肠、大肠、肛门、胰脏、心 脏、血管、脾脏、肺、脑、骨、脊髓、软骨、精囊、子宫、输卵管、卵巢、胎盘、角膜、骨骼肌、肌腱、 神经、皮肤等的组织。特别优选为选自心脏、肝脏、肾脏、肺、脑、脊髓、精囊、脾脏、膀胱、血管 和皮肤等的组织。作为生物组织特别优选为心脏、肝脏、肾脏、肺、脑和脊髓。
[0104] 如上所述，在发明的组织再生疗法中，对脱细胞处理的方法没有特别限定。优选为 高静水压处理的方法。
[0105] 对应用本发明的组织再生疗法的组织没有特别限定。优选为心脏、神经或皮肤。
[0106] 对本发明的纤维蛋白胶的种类没有特别限定。优选示例Bolheal (-般财团法人 化学及血清疗法研究所制造）。
[0107] 如上所述，对混合凝胶中的纤维蛋白原浓度没有特别限定，只要是可形成凝胶的 浓度即可。可以示例30mg/mL~40mg/mL。
[0108] 如上所述，对混合凝胶中的凝血酶浓度没有特别限定，只要是可形成凝胶的浓度 即可。可以示例是〇.8U/mL~250U/mL。作为优选的浓度可以示例0.8U/mL~125U/mL，更优选 0.8U/mL~12.5U/mL。另一方面，还可以使用不足0.8U/mL的浓度。
[0109] 如上所述，对混合凝胶中的颗粒浓度没有特别限定，可以示例16yg/mL~64yg/mL。 对颗粒状脱细胞组织的粒径没有特别限定，为0.1~ΙΟΟΟμπι，优选为0.5~500ym，进一步优 选为1~100μπι。
[0110] 6.细胞移植方法 本发明包含细胞移植方法，该方法包括:将该颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白胶和细胞应 用于动物组织。在该细胞移植方法中，由颗粒状脱细胞组织和纤维蛋白胶形成混合凝胶，细 胞存在于混合凝胶内和表面上。对将颗粒状脱细胞组织、纤维蛋白胶和细胞的应用于动物 组织的顺序没有特别限定。各种成分可以分开应用，也可以同时应用。
[0111] 本发明还包含细胞移植方法，该方法包括:将上述的混合凝胶和细胞一起应用于 动物组织。细