在本发明的肿瘤细胞浓缩分离设备中，可W根据需要添加抗血液凝固剂。该抗血 液凝固剂只要采取在后面说明的细胞凝聚药剂和源自血液的样品的反应时两者共存的形 态即可。即，该抗血液凝固剂可W采取预先被收纳在上述容器内的形态，另外，也可W采取 预先另行添加到源自血液的样品中的形态。在采用预先被收纳在上述容器内的形态的情况 下，可W采取涂布在容器内壁面的形态或制成颗粒状、片状等易于溶解于源自血液的样品 中的形状收纳在容器内的形态。
[0079] 作为本发明中所使用的抗血液凝固剂，没有特别限定，可W使用巧樣酸、肝素、 邸TA等公知的抗血液凝固剂。
[0080] (细胞凝聚药剂）
[0081] 本发明的肿瘤细胞浓缩分离设备根据需要含有细胞凝聚药剂。所谓本发明中的细 胞凝聚药剂是指:选择性地使期望的肿瘤细胞W外的血液细胞凝聚，通过使用了比重差的 离屯、分离操作，使其变得容易沉淀、分离，由此，能够提高该肿瘤细胞的纯度的药剂。因此， 只要为具有运样的作用机理的药剂就可应用公知的药剂，可优选使用具备与白血球表面上 特有的抗原结合的抗原识别部位和与红血球表面上特有的抗原结合的抗原识别部位运两 者的抗体（RosetteS邱 human CD45 d邱letion cocktail、STEMCE；LL Technologies公司制 造)。
[0082] 另外，作为具有其它凝聚方法的药剂，可W使用将能够与白血球表面上特有的抗 原结合的抗原识别部位与比重较大的载体物理结合或者化学结合而成的药剂、使血球细胞 微球等物理吸附于不溶性载体的药剂。
[0083] (细胞分离剂的制造方法）
[0084] 本发明的细胞分离剂的制造方法可W使用现有公知的方法，没有特别限定。即，只 要将上述液体成分、上述无机粉末及上述特定的聚亚烷基二醇W适宜的方法混合即可。混 合方法没有特别限定，可W举出使用了行星式混合器、开放式炼胶机、均质机等公知的混炼 机的方法。
[0085] (循环肿瘤细胞浓缩分离设备）
[0086] 本发明的循环肿瘤细胞浓缩分离设备具备容器主体和被收纳在容器主体内且上 述本发明的细胞分离剂、W及根据需要添加的抗血液凝固剂及细胞凝聚药剂作为构成要 素。作为该容器主体，没有特别限定，W广泛用作采血管的有底的管状容器为代表，可W使 用试验管、离屯、管、微管等任意的可进行离屯、分离的有底的管状容器。
[0087] 图1是示出运样的循环肿瘤细胞浓缩分离设备的一种结构例子的示意性的正面剖 视图。循环肿瘤细胞浓缩分离设备1具有由有底的管状容器构成的容器主体2。该容器主体2 内收纳有细胞分离剂3。
[0088] 上述有底的管状容器的开口的一端由栓体密封，且该容器的内部可W进行减压， 构成所述栓体的至少一部分能够被刺穿。另外，关于上述容器主体的材质，只要可耐受离屯、 分离即可，没有特别限定，可W使用合成树脂及玻璃等任意的材料。
[0089] 就容器主体及栓体而言，为了分别起到防止血块附着等效果，可W实施内部表面 处理。
[0090] 另外，细胞分离剂的添加量通常优选该容器每1根添加0.3g~3. Og左右，但可W根 据使用的容器的容积及形状选择最佳的添加量。
[0091] 另外，就本发明的循环肿瘤细胞浓缩分离设备而言，上述细胞凝聚药剂优选收纳 在容器中，并使其添加量相对于源自血液的样品ImL为25~15化L。由此，可W按照本发明更 加有效地分离肿瘤细胞和肿瘤细胞W外的血液细胞。
[0092] 另外，在本发明中，包括使用用于将源自血液的样品中的循环肿瘤细胞浓缩分离 的循环肿瘤细胞浓缩分离设备。本发明使用一种用于将源自血液的样品中存在的循环肿瘤 细胞浓缩分离的设备，其具备:具有触变性的细胞分离剂，其被收纳于所述管状容器内，所 述触变性能够在离屯、分离后，使肿瘤细胞与所述肿瘤细胞W外的血液细胞分离，所述细胞 分离剂的比重在1.050~1.080的范围内。
[0093] 如上所述，通过使用本发明的循环肿瘤细胞浓缩分离设备，可实现源自血液的样 品中的肿瘤细胞的浓缩分离方法。使用了本发明的循环肿瘤细胞浓缩分离设备的源自血液 的样品中的肿瘤细胞的浓缩分离方法具备W下的工序。
[0094] (使用循环肿瘤细胞浓缩分离设备的源自血液的样品中的循环肿瘤细胞的浓缩分 离方法）
[00M] (1)在收纳有细胞分离剂且一端封闭且另一端开口的有底管状容器内，使源自血 液的样品、细胞凝聚药剂W及抗血液凝固剂共存的工序，上述细胞分离剂的比重在1.050~ 1.080的范围内且通过离屯、分离操作能够使上述肿瘤细胞与上述肿瘤细胞W外的血液细胞 分离，上述细胞凝药剂用于使肿瘤细胞W外的血液细胞彼此选择性地凝聚且通过离屯、分离 操作而沉淀；
[0096] (2)使该细胞凝聚药剂和该源自血液的样品在该容器内进行反应的工序；
[0097] (3)对该容器进行离屯、分离，从而在该肿瘤细胞和该其它血液细胞之间由细胞分 离剂形成隔壁的工序；
[0098] (4)对被浓缩分离至隔壁上方的血浆中的该肿瘤细胞进行回收的工序。
[0099] 设及设备的详细内容如上所述，接触了本说明书的本领域技术人员可W参照说明 书的记载适宜地进行变更等，实施本发明的源自血液的样品中的循环肿瘤细胞的浓缩分离 方法。
[0100] 使用本发明中的设备所浓缩分离的循环肿瘤细胞可W在使用检测试剂标记后采 用流式细胞术等方法计数、分析。作为检测试剂，可W举出例如:含有识别循环肿瘤细胞的 表面上表达的特有的抗原的抗体的试剂、含有感染肿瘤细胞而W肿瘤细胞特有的端粒酶活 性反应增殖并发出巧光的病毒的试剂等。
[0101] 通过使用本发明的设备能够W高纯度回收肿瘤细胞，因此，期待利用流式细胞仪 的肿瘤细胞的检测效率及检测精度的提局。
[0102] 实施例
[0103] 下面，举出本发明的具体的实施例及比较例，由此明确本发明。需要说明的是，本 发明并不限定于W下的实施例。
[0104] [实施例1~12及比较例1~2]
[0105] (实施例1~12及比较例1~2中使用的物质）
[0106] 1)液体成分
[0107] 液体成分1:丙締酸醋聚合物(比重1.032、25°(：下的粘度=65化.3)
[0108] 粘度的测定利用流变仪DV-III (Brookf i e 1 d公司制造)进行。
[0109] 2)无机粉末
[0110] 作为无机粉末，组合使用疏水性二氧化娃（日本AER0SIL公司制造、AER0SIL R974、 粒径:约12nm、比表面积:约170mVg、将表面用C出基化学处理而成为疏水性)和氧化铁(石原 产业公司制造 、TIPAQUE A-100、粒径0.15皿）。
[01川 3)聚亚烷基二醇
[0112] 准备下述的表1所示的聚亚烷基二醇作为触变性增强剂1~3。
[0113] 增强剂1:聚氧丙締甘油酸(旭硝子公司制造 、Preminol S3011)
[0114] 增强剂2:聚下二醇（日油公司制造、UNI0L PB700)
[0115] 增强剂3:聚氧丙締甘油酸(ADEKA公司制造、ADEKA聚酸G300)
[0116] [表 1]
[0117]
[0118] ~(细胞分离剂的制作)
[0119] (实施例1)
[0120] 如下述的表2所示，配合下述物质，使得含有94.9重量％的液体成分1、上述混合物 即无机粉末共4.6重量％、0.5重量％的作为聚亚烷基二醇的表1示出的触变性增强剂1，在 室溫下使用行星式混合器揽拌混合，制作细胞分离剂。
[0121] (实施例2~12及比较例1~2)
[0122] 如下述的表2所示，变更使用的材料及配合比例，除此W外，与实施例1同样地制作 细胞分离剂。需要说明的是，在实施例11中，不使用聚亚烷基二醇。在实施例12中，使用数均 分子量350的触变性增强剂3。在比较例1中，将细胞分离剂的比重调整为1.045。在比较例2 中，将细胞分离剂的比重调整为1.085。
[0123] [表 2]
[0124]
[0125] (循环肿瘤细胞浓缩分离设备的制作）
[01%]准备15mL容量的锥形管(m)公司制造），在各管中收纳实施例1~12及比较例1~2 的细胞分离剂各约1.8g，由此，制作循环肿瘤细胞浓缩分离设备。
[0127] (评价）
[0128] W下的评价使用如下得到的拟患者血进行:在利用邸TA进行了抗凝固处理的健康 人血中添加结肠腺癌培养细胞(DLD-1)，使其成为50个/血液ImL。
[0129] 1)细胞分离剂的流动性评价
[0130] 在循环肿瘤细胞浓缩分离设备討良中注入拟患者血各2mL后，在1200gX20分/室溫 的条件下进行离屯、分离。在基于细胞分离剂的隔壁的平均厚度为5mmW上的情况下，标记为 0,在2mmW上且低于5mm的厚度的情况下，标记为Δ，在低于2mm的厚度的情况下，标记为 X。将结果示于下述的表3。
[0131] 2)隔壁强度
[0132] 将离屯、分离后的循环肿瘤细胞浓缩分离设备倾斜，W60化给予1小时的振动。在隔 壁不移动的情况下，标记为0,在移动但保持隔壁的情况下，标记为Δ，在隔壁崩塌与血球 细胞混合的情况下，标记为X。将结果示于下述的表3。
[0133] 3)隔壁形成状态评价
[0134] 利用目视对离屯、分离后所形成的隔壁的状态W及有无油状浮游物及油膜进行观 察。将结果示于下述的表3。在表3中，在隔壁产生龟裂的情况下，标记为"