一种奶粉中肌醇测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种奶粉中肌醇测定方法，该方法包括以下步骤：用三氯乙酸溶液充分溶解待测奶粉；吸取上述待测奶粉溶液至烧杯中，烘干，以便快速得到干燥样品；上述干燥样品中加入硅烷化试剂，超声溶解，进行衍生反应，以便得到衍生反应产物；上述衍生反应产物冷却后加入正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，离心，取上清液过滤，以便获得待上机检测溶液；用气相色谱仪测定上述待上机检测溶液。本发明提供的奶粉中肌醇测定方法，操作简单、快速、成本较低，精密度、稳定性和准确度较现有方法高。
【专利说明】
一种奶粉中肌醇测定方法
技术领域
[0001] 本发明涉及食品化学检测领域，具体的，本发明涉及肌醇测定领域，更具体的，本 发明涉及一种奶粉中肌醇测定方法。
【背景技术】
[0002] 肌醇，学名环己六醇，广泛存在于各种天然动物、植物及微生物组织中，因最初由 肌肉组织中提取，故得肌醇之名。肌醇属于B族维生素，有类似于B1和维生素 H的作用，是人 类与动物维持正常生理功能不可缺少的低分子有机物，能促进肝和脂肪的代谢，在婴幼儿 奶粉中也是不可缺少的营养强化剂。
[0003] 目前肌醇的检测方法主要是《食品安全国家标准-婴幼儿食品和乳品中肌醇的测 定》(GB5413.25-2010)中的第二法，前处理方法是将奶粉用水溶解之后用95%乙醇定容，旋 蒸干后用衍生剂衍生上机检测。因为衍生过程不能有水，否则衍生效果不好导致检测结果 不准确，所以旋蒸必须彻底，导致旋蒸时间较长，批量性处理样品较繁琐，样品平行性较差。 另外，在《食品安全国家标准_婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定》(GB5413.25-2010)中的第 二法中，奶粉用水溶解之后用95%乙醇定容，奶粉中的蛋白质和脂肪与肌醇一同溶解于乙 醇中，导致肌醇检测的准确度、精密度和稳定性低。
[0004] 因而，对奶粉中肌醇测定的方法仍有待改进。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的 一个目的在于提出一种能够快速、稳定、准确测定奶粉中肌醇的方法。
[0006] 本发明是基于发明人的下列发现而完成的：第一，奶粉中肌醇测定方法中旋蒸时 间过长，一方面检测周期长，另一方面导致测定的稳定性和和精密度低。第二，奶粉中的蛋 白质、脂肪以及杂质溶解于乙醇中，会造成肌醇测定的准确度、精密度和稳定性低。
[0007] 因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种奶粉中肌醇的测定方法。根据本 发明的实施例，该方法包括以下步骤:用水或三氯乙酸溶液充分溶解待测奶粉;吸取上述待 测奶粉溶液至烧杯中，烘干，以便快速得到干燥样品；上述干燥样品中加入硅烷化试剂，超 声溶解，进行衍生反应，以便得到衍生反应产物;上述衍生反应产物冷却后加入正己烷，震 荡混合，静置分层，取上清液至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，离心，取上清液过滤， 以便获得待上机检测溶液;用气相色谱仪测定上述待上机检测溶液。
[0008] 发明人惊奇的发现，利用本发明的奶粉中肌醇测定方法，采用干燥箱烘干待测奶 粉溶液，不仅操作简单，检测周期缩短，而且提高了肌醇测定的精密度和稳定性。
[0009] 根据本发明实施例的奶粉中肌醇的测定方法还可以进一步增加步骤：用三氯乙酸 溶液充分溶解待测奶粉，然后加入乙酸铅溶液，最后用三氯乙酸溶液定容。
[0010] 在奶粉溶解于三氯乙醇溶液的过程中，肌醇，蛋白质，脂肪，以及其它杂质一并溶 解于三氯乙醇溶液，并且在后续步骤中一直共同存在，对肌醇测定造成干扰。利用乙酸铅作 为沉淀剂，将蛋白质、脂肪沉淀后，待上机检测溶液更加澄清，有效提高了肌醇测定的稳定 性和准确度。
[0011] 另外，根据本发明实施例的奶粉中肌醇的测定方法还可以进一步增加步骤：
[0012] 根据气相色谱仪测定的结果计算奶粉中肌醇的含量。
[0013] 配制肌醇标准溶液，制备肌醇标准曲线。
[0014] 根据本发明的实施例，肌醇标准溶液的浓度为0.010mg/ml。
[0015]根据本发明的实施例，待测奶粉用浓度为2%的三氯乙酸溶解后，加入12%乙酸铅 溶液沉淀蛋白质和脂肪，并用浓度为2 %的三氯乙酸定容。
[0016]根据本发明的实施例，称取lg待测奶粉，用10ml浓度为2%的三氯乙酸溶解后，加 入2ml浓度为12%的乙酸铅溶液沉淀蛋白质和脂肪，并用浓度为2%的三氯乙酸定容至 50ml 〇
[0017]根据本发明的实施例，待测奶粉溶液在温度为102°C±1°C的干燥箱中，烘45min~ 60min，至其完全干燥。
[0018]根据本发明的实施例，干燥样品加入硅烷化试剂，超声溶解后，于80°C±2°C水浴 中衍生反应75min，期间每隔20min取出震荡一次。
[0019]根据本发明的实施例，衍生反应产物冷却至室温后加入5ml正己烷，震荡混合，静 置分层，取上清液3ml至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，4000r/min离心5min，取上清 液用0.22mi有机滤头过滤，以便获得待上机检测溶液。衍生反应产物，经正己烷震荡混合又 静置分层后，先离心，再用〇 . 22mi有机滤头过滤，充分去除杂质，最大程度上保证了测定的 精密度、稳定性和准确度。
[0020] 需要说明的是，据发明人所知，利用干燥箱将待测奶粉溶液烘干;并利用三氯乙酸 溶液充分溶解待测奶粉，然后加入乙酸铅溶液作为沉淀剂，将蛋白质，脂肪及其它杂质去除 的样品前处理方法，目前尚未见相关报道。发明人提供的奶粉中肌醇测定方法，用烘干方法 将样品中水分去除，操作简单、快速、成本较低，提高了测定的精密度和稳定性;另一方面， 采用沉淀剂将样品溶液中的蛋白质，脂肪及其它杂质去除，使待上机检测溶液更加澄清，有 效提高了肌醇测定的稳定性和准确度。
【附图说明】
[0021] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施方式的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0022] 图1显示本发明的一个实施例中肌醇标准曲线图。
【具体实施方式】
[0023] 下面【具体实施方式】是对本发明进行详细说明，下面描述的实施例是示例性的，仅 用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
[0024] 以下除另有交待，以下实施例中涉及的未特别交待的试剂及仪器，都可来自常规 市售产品。
[0025] 实施例中用到的试剂及溶液 [0026] 超纯水
[0027]三氯乙酸溶液(2%):准确称取20g三氯乙酸于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻 度，混匀后备用。
[0028] 12 %乙酸铅溶液（12 % ):准确称取120g乙酸铅于1L容量瓶中，用水溶解并定容至 刻度，混匀后备用。
[0029] 正己烷:色谱纯
[0030] 乙醇（95%)
[0031] 乙醇（70%)
[0032] 三甲基氯硅烷 [0033] 六甲基二硅胺烷 [0034] N，N-二甲基甲酰胺
[0035] 硅烷化试剂：分别吸取体积比为1:2:8的三甲基氯硅烷、六甲基二硅胺烷、N，N_二 甲基甲酰胺，超声混合，临用前配制。
[0036] 肌醇标准品：纯度彡99%，厂家:SIGMA，货号:090M142V [0037] 实施例中用到的仪器和设备
[0038]天平:感量为O.lmg，厂家:MEITLER TOLEDO,型号:XP205 [0039] 气相色谱仪:带FID检测器，厂家:瓦里安，型号:GC-450 [0040]离心机:厂家:Heal Force，型号:Neofuge 23R [00411超声波清洗机:厂家:旗美，型号:QC10260
[0042] 恒温干燥箱:厂家:上海福玛实验设备有限公司，型号:DGX-9243B-1 [0043] 恒温水浴锅:厂家:上海福玛实验设备有限公司，型号:HHW-21⑶-600B [0044] 30ml螺纹试管
[0045] 实施例1肌醇标准曲线制备
[0046] 1.配制肌醇标准溶液
[0047] 肌醇标准溶液(0.010mg/ml):准确称取100mg(精确至0. lmg)经过105°C烘干2h的 肌醇标准品于l〇〇ml容量瓶中，用25ml水溶解完全，用95%乙醇定容至刻度线。取lml此溶液 与100ml容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度线，混匀。
[0048] 2.制备肌醇标准曲线
[0049] 1)分别吸取0 ? 0ml，0 ? 2ml，0 ? 4ml，0 ? 6ml，0 ? 8ml，1 ? 0ml肌醇标准溶液于25ml烧杯 中，放入恒温中，102°c ±1°C，烘45min~60min至完全干燥，得到干燥肌醇；
[0050] 2)上述干燥肌醇中分别加入10ml硅烷化试剂，超声溶解5min并转移于30ml螺纹试 管中，放置于80°C±2°C水浴中衍生反应75min，期间每隔20min取出震荡一次，得到衍生反 应产物；
[0051] 3)上述衍生反应产物冷却至室温加入5ml正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液 3ml至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，4000r/min离心5min，吸取lml样品溶液用0.22 Mi有机滤头过滤，过滤液收集于2mL进样瓶中，待测。
[0052] 4)液相色谱仪检测，色谱柱:Agilient Technology DB-5色谱柱（60mX0.25mm， 0.25_);进样口温度:260°C ;检测器温度:300°C ;分流比：10:1;流速:2. OmL/min;进样量： lul;程序升温见表1:
[0053] 表1程序升温
[0056]以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线(相关系数R2多0.99 )，参见图1。 [0057] 实施例2
[0058] -种奶粉中肌醇的测定方法，包括以下步骤：
[0059] 1)称取lg奶粉试样(精确到0. lmg)于50mL容量瓶中，先加入20mL水溶解，超声10分 钟后用水定容混匀，得到待测奶粉溶液；
[0060] 2)取lml上述待测奶粉溶液于25ml烧杯中，同标准工作液一同在恒温干燥箱中， 102°C ±1°C，烘45min~60min至完全干燥，得到干燥样品；
[00611 3)上述干燥样品中加入10ml硅烷化试剂，超声溶解5min并转移于30ml螺纹试管 中，放置于80°C±2°C水浴中衍生反应75min，期间每隔20min取出震荡一次，得到衍生反应 产物；
[0062] 4)上述衍生反应产物冷却至室温加入5ml正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液 3ml至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，4000r/min离心5min，吸取lml样品溶液用0.22 Mi有机滤头过滤，过滤液收集于2mL进样瓶中，待测。
[0063] 5)液相色谱仪检测，色谱柱:Agilient Technology DB-5色谱柱（60mX0.25mm， 0.25_);进样口温度:260°C ;检测器温度:300°C ;分流比：10:1;流速:2. OmL/min;进样量： lul;程序升温见表1。
[0064]实施例2中奶粉试样的前处理过程中未加沉淀剂(12 %乙酸铅溶液）。
[0065] 实施例3
[0066] -种奶粉中肌醇的测定方法，包括以下步骤：
[0067] 1)称取lg奶粉试样(精确到0. lmg)于50mL容量瓶中，用2%三氯乙酸溶液溶解，超 声处理lOmin后，加入2ml 2%乙酸铅溶液，最后用2%三氯乙酸溶液定容至刻度线混匀； [0068] 2)取10ml上述待测奶粉溶液于50ml离心管中，10000r/min离心10min，准确吸取 1.00ml上清液于25ml烧杯中，同标准工作液一同在恒温干燥箱中，102°C ± 1°C，烘45min~ 60min至完全干燥，得到干燥样品；
[0069] 3)上述干燥样品中加入10ml硅烷化试剂，超声溶解5min并转移于30ml螺纹试管 中，放置于80°C±2°C水浴中衍生反应75min，期间每隔20min取出震荡一次，得到衍生反应 产物；
[0070] 4)上述衍生反应产物冷却至室温加入5ml正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液 3ml至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中，4000r/min离心5min，吸取lml样品溶液用0.22 Mi有机滤头过滤，过滤液收集于2mL进样瓶中，待测。
[0071 ] 5)液相色谱仪检测，色谱柱：Agilient Technology DB-5色谱柱（60mX0.25mm， 0.25_);进样口温度:260°C ;检测器温度:300°C ;分流比：10:1;流速:2. OmL/min;进样量： lul;程序升温见表1。
[0072] 实施例3中奶粉试样的前处理过程中添加沉淀剂(12%乙酸铅溶液）。
[0073] 实施例2与实施例3检测结果比对:
[0074]实施例2中奶粉试样的前处理过程中未加沉淀剂(12 %乙酸铅溶液）。
[0075] 实施例3中奶粉试样的前处理过程中添加沉淀剂(12 %乙酸铅溶液）。
[0076] 经对比发现，实施例2待测奶粉溶液比较浑浊，难以准确吸取，而且在衍生反应过 程中杂质比较多，准确性和平衡性比较差，对比分析结果表明样本前处理过程中加入沉淀 剂，检测结果的准确度、精密度以及稳定性都有所提高。具体实验数据见表2。
[0077] 表2实施例2与实施例3检测结果对比
[0079] 对比例
[0080]用《食品安全国家标准_婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定》(GB5413.25-2010)中的 第二法测定奶粉中肌醇含量；
[0081]同时用实施例3所述方法测定奶粉中肌醇含量。
[0082] 检测奶粉样品中不含肌醇，肌醇定量添加。
[0083]《食品安全国家标准-婴幼儿食品和乳品中肌醇的测定》(GB5413.25-2010)中第二 法的测定结果，如表3所示。
[0084]表3本发明的精密度和准确度(n = 6)试验
[0086]实施例3所述方法测定结果，如表4所示。
[0087] 表4国标方法的精密度和准确度(n = 6)试验
[0089]结论:通过以上对比试验证明本发明所述方法的精密度和准确度都高于国标方 法。
[0090] 在本说明书的描述中，参考术语"一个实施例"、"一些实施例"、"示例"、"具体示 例"、或"一些示例"等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、材料或者特点包含 于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指 的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个 或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0091] 尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解:在不 脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本 发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1. 一种奶粉中肌醇测定方法，其特征在于，包括： 1) 用水或三氯乙酸溶液充分溶解待测奶粉； 2) 吸取上述待测奶粉溶液至烧杯中，烘干，以便快速得到干燥样品； 3) 上述干燥样品中加入硅烷化试剂，超声溶解，进行衍生反应，以便得到衍生反应产 物； 4) 上述衍生反应产物冷却后加入正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液至预先加入少 量无水硫酸钠的离心管中，离心，取上清液过滤，以便获得待上机检测溶液； 5) 用气相色谱仪测定上述待上机检测溶液。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用三氯乙酸溶液充分溶解待测奶粉，然后 加入乙酸铅溶液，最后用三氯乙酸溶液定容，以便沉淀蛋白质和脂肪。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，进一步包括步骤，根据气相色谱仪测定 的结果计算奶粉中肌醇的含量。4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，进一步包括步骤，配制肌醇标准溶液，制备 肌醇标准曲线。5. 根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于，所述待测奶粉用浓度为2%的三氯乙酸 溶解后，加入12 %乙酸铅溶液沉淀蛋白质和脂肪，并用浓度为2 %的三氯乙酸定容。6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，称取Ig待测奶粉，用IOml浓度为2%的三氯 乙酸溶解后，加入2ml浓度为12 %的乙酸铅溶液沉淀蛋白质和脂肪，并用浓度为2 %的三氯 乙酸定容至50ml。7. 根据权利要求1、2或4所述的方法，其特征在于，所述待测奶粉溶液在温度为102°C± I °C的干燥箱中，烘45min~60min，至其完全干燥。8. 根据权利要求1、2或4所述的方法，其特征在于，所述干燥样品加入硅烷化试剂，超声 溶解后，于80°C±2°C水浴中衍生反应75min，期间每隔20min取出震荡一次。9. 根据权利要求1、2或4所述的方法，其特征在于，所述衍生反应产物冷却至室温后加 入5ml正己烷，震荡混合，静置分层，取上清液3ml至预先加入少量无水硫酸钠的离心管中， 4000r/min离心5min，取上清液用0.22μηι有机滤头过滤，以便获得待上机检测溶液。10. 根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述肌醇标准溶液的浓度为0.010mg/ml。
【文档编号】G01N30/02GK105929051SQ201610247906
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2016年4月20日
【发明人】吴腾, 扎木则仁, 魏文平, 徐向峰, 张雪峰, 常建军, 焦芳, 李秋琴, 王丽丽, 薛志清, 任丽, 刘美霞, 王秀波
【申请人】内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司