专利名称：用6－dmap诱导牡蛎三倍体的育苗方法
技术领域：
本发明公开了一种用6-DMAP(6-二甲氨基嘌呤)诱导牡蛎三倍体的育苗方法，属于海洋生物养殖技术领域。主要用于牡蛎养殖。
在现有技术中，作为我国贝类养殖支柱产业的牡蛎养殖，一直是养二倍体牡蛎。这种二倍体牡蛎，由于在其繁殖季节里必然要产卵或排精，因而使其软体消瘦，产量低，而且其风味和品质均受到很大影响。
本发明的目的在于提供一种方法比较简单实用，可操作性强，能够有效地和大规模地培育出育性差、生长快、品质优，一年四季都能保持鲜美口味的三倍体牡蛎苗种，为牡蛎养殖提供优良品种并在生产上能够直接推广应用的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法。
根据三倍体育种的一般机理和6-DMAP的性能特点，针对现有技术中所存在的主要问题，本发明的基本构思是通过解剖方法获取牡蛎的精卵，经对卵子体外促熟(卵子从性腺中剥离出后，用人工的方法如用维生素液浸泡法使其在体外加速成熟)后，人工受精，并利用6-DMAP作为诱导剂，处理牡蛎的受精卵，抑制第二极体的释放，从而获得三倍体。
本发明所述的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于该方法包括下列步骤1．解剖打开贝壳进行检查，镜检分雌雄，隔离存放；2．取卵先解剖雌性生殖腺取出卵子，经过滤后进行体外促熟并将环境温度调至23～25℃；3．取精子再解剖雄性生殖腺取出精子并通过镜检选取活泼的成熟精子；4．人工授精按雌雄比=15～30∶1的比例将上述的3选取的精子放入卵液中并迅速均匀搅动使卵子受精；5．诱导当第一极体出现率达30～50％时，往受精卵液中按30～90mg/L加入6-DMAP，处理10～15分钟；6．分池孵化；7．择优选幼当胚胎发育至D形幼虫时，将优良的D形幼虫选入其它池进行幼虫培育。
上述的步骤2中对卵子的过滤先使用100～250目筛绢，再用500目筛绢过滤。
在上述的第4和第5两个步骤之间还可在受精后5～15分钟后对受精卵进行洗卵。
在上述的最后一个步骤7之前，即当胚胎发育至4～16细胞期时还可分别用滴片法和压片法或者用流式细胞计检查三倍体率。
在上述的步骤6中所述的分池孵化，可按每毫升20～120个受精卵的密度进行分池孵化。
本发明的优点是方法比较简单，所需仪器设备不多而且全为水产养殖业常用仪器设备，因而培育成本较低，用6-DMAP诱导属于首创，经济实惠可操作性强，能直接在生产上大规模推广应用，三倍体诱导率可稳定在70％以上，用此法育出的苗种养成的三倍体牡蛎，育性差，生长快，产量高，养成单产比二倍体增产20％以上，品质优，一年四季保持鲜美的口味，倍受人们的青睐。
本发明的实施例之一是；取体长10厘米以上体质健壮并经过亲贝蓄养促熟的太平洋牡蛎，打开贝壳先用肉眼观察再用显微镜复查分选雌雄并分别隔离，然后分别取出它们的生殖腺，隔离存放；先解剖(撕破)雌性生殖腺取出卵子，经过先用200目筛绢过滤再用500目筛绢过滤后进行体外促熟；再解剖(撕破)雄性生殖腺取出精子并通过镜检选出活泼之成熟精子；按照雌雄比=20∶1的比例将选出的精子放入1～2千万个卵/升的卵液中，并迅速均匀搅动使卵在温度24℃条件下人工受精；10分钟后进行洗卵；当第一极体出现率达40％时，往受精卵液中按60mg/L加6-DMAP，处理13分钟后即按每毫升80个受精卵的密度分池孵化；当胚胎发育至4细胞期时用滴片法检查，发育至8～16细胞期时用压片法检查三倍体率；当胚胎发育至D形幼虫时，将优良的D形幼虫选入其它池按常规进行幼虫培育。
实施例之二是将实施例一中的雌雄比改为30∶1；受精温度改为23℃，受精后5分钟洗卵，当第一极体出现率达30％时按90mg/L加6-DMAP，处理10分钟，按每升20个受精卵分池，其它皆同实施例之一。
实施例之三是将实施例之一中的雌雄比例改为15∶1，受精温度改为25℃，受精后15分钟洗卵，当第一极体出现率达50％时，按30mg/L加6-DMAP，处理15分钟，按每毫升120个受精卵分池，其它皆同实施例之一。
作为上述实施例的变更1、受精卵可以不经洗卵，即往受精卵液中加6-DMAP；2、三倍体率的检查可改为用流式细胞计，也可以不进行这项检查。
权利要求
1.一种用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于该方法包括下列步骤1．解剖打开贝壳进行检查，镜检分雌雄，隔离存放；2．取卵先解剖雌性生殖腺取出卵子，经过滤后进行体外促熟并将环境温度调至23～25℃；3．取精子再解剖雄性生殖腺取出精子并通过镜检选取活泼的成熟精子；4．人工授精按雌雄比=15～30∶1的比例将上述的3选取的精子放入卵液中并迅速均匀搅动使卵子受精；5．诱导当第一极体出现率达30～50％时，往受精卵液中按30～90mg/L加入6-DMAP，处理10～15分钟；6．分池孵化；7．择优选幼当胚胎发育至D形幼虫时，将优良的D形幼虫选入其它池进行幼虫培育。
2.根据权利要求1所述的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于上述的步骤2中对卵子的过滤先使用100～250目筛绢，再用500目筛绢过滤。
3.根据权利要求1所述的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于在上述的第4和第5两个步骤之间还可在受精后5～15分钟后对受精卵进行洗卵。
4.根据权利要求1所述的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于在上述的最后一个步骤7之前，即当胚胎发育至4～16细胞期时还可分别用滴片法和压片法或者用流式细胞计检查三倍体率。
5.根据权利要求1所述的用6-DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法，其特征在于在上述的步骤6中所述的分池孵化，可按每毫升20～120个受精卵的密度进行分池孵化。
全文摘要
一种用6－DMAP诱导牡蛎三倍体的育苗方法,属海洋生物养殖技术,主要用于牡蛎养殖。其特征是该方法包括:解剖镜检分雌雄、先取卵子过滤和体外促熟、再取精子并按雌雄比15～30∶1在23～25℃下进行人工受精、加入6－DMAP诱导、分池孵化、胚胎发育至D形幼虫时选入它池进行幼虫培育等步骤。具有方法较简单,可操作性强,便于直接推广应用,三倍体率稳定在70%以上,养生长快产量高,品质优,一年四季口味鲜美等优点。
文档编号A01K61/00GK1308856SQ01107849
公开日2001年8月22日 申请日期2001年2月27日 优先权日2001年2月27日
发明者王如才, 王昭萍, 田传远, 于瑞海, 李赟 申请人:青岛海洋大学