专利名称：动物血液固定保存新方法
技术领域：
本发明涉及一种采集试验动物血样标本保存的方法，特别是野外采集试验动物血液固定保存的方法，属于分子生物学技术领域。
背景技术：
分析DNA水平上的变异要求有纯度好、分子量至少为约50kb的DNA样品，往往还要求有大量的平行样品作比较生物学分析。研究中采集的血样必须尽可能快地放在冷环境中，否则血样DNA可能发生破坏或原位降解。目前传统的采集血样的保存方法，是在采集的血样中加入一定比例的抗凝剂，使血液不会凝固，然后立即离心并重悬于抽提缓冲液或运用液氮罐、干冰箱、冰壶、冰袋等设备0℃低温保存运至实验室备用，以保证血样发生的破坏程度最低。动物血样的采集通常在野外边远地区和山区，这些地区大多交通不便，给采集试验动物血样标本的保存带来很多困难，采血地点没有电力供应，就无法完成离心；较大的血液样本量不能保证低温保存；采血地点离实验室远，运输时间长，采集血液样本不能及时运至实验室，运输途中冰块融化，会导致血样的破坏等。因此，要采集和及时运输新鲜血样供提取DNA用十分困难，传统的采集血样保存方法不能满足实验要求。
发明内容
本发明的目的是要克服传统的采集血样保存方法的不足，提供一种简易方便的，既无需电力供应，也无需低温保存运输的动物血液固定保存新方法。
本发明的技术方案是将采集的血样标本加入预先装有酒精溶液的试管中混匀，保存，血样和酒精溶液的体积比为1∶3.5-4.5。所述的酒精溶液为75％乙醇(V/V)。所述的血样加入装有酒精溶液的试管中混匀，是先将装有血样标本和酒精溶液的试管口迅速封闭，再立即进行轻轻晃动，使血样和酒精溶液混匀。所述的保存是将装有血样和酒精溶液的试管口向上放入容器后密封，在常温下存放、及时运输至实验室。
将采集的血样加入装有一定比例酒精溶液的试管中，不需进行抗凝处理和离心而直接进行固定处理，轻轻混匀后，常温下运输至实验室进行DNA的提取等。主要原理是乙醇是保存核酸的最佳固定剂，乙醇保存只会引起DNA很小程度的剪切，用无水乙醇固定标本48h后直接保存，保存时间最长达2年，从这样标本中提取的DNA对DNA-DNA杂交、RFLP、RAPD、AFLP、基因克隆以及序列分析都能成功。据此进行了试验工作，在全血中直接加入酒精(75％乙醇)溶液进行固定，在常温下运输至实验室分析。用该方法获得的DNA的产率和纯度均优于传统方法获得的结果，试验结果证明这是一种理想的血样固定保存方法，该方法特别适用于在野外、农村等偏僻地区进行血液采集工作，不需有液氮或干冰设备，无需电力供应，也无需低温运输，简易方便，可便利地应用于生产实际，提高工作效率，降低成本。
具体实施例方式
将采集到的一定体积的血液加入预先装有酒精(75％乙醇)溶液的试管中，血样和酒精(75％乙醇)溶液的体积比为1∶3.5-4.5。将上述装有血样的试管口迅速封闭，立即轻轻晃动混匀。将所有的装有血样的试管口向上放入一容器后密封，在常温下保存，及时运输至实验室提取DNA。
权利要求
1.一种动物血液固定保存新方法，其特征是将采集的血样标本加入预先装有酒精溶液的试管中混匀，保存，血样和酒精溶液的体积比为1∶3.5-4.5。
2.根据权利要求1所述的动物血液固定保存新方法，其特征是所述的酒精溶液为75％乙醇。
3.根据权利要求1所述的动物血液固定保存新方法，其特征是所述的血样加入装有酒精溶液的试管中混匀，是先将装有血样标本和酒精溶液的试管口迅速封闭，再立即进行轻轻晃动，使血样和酒精溶液混匀。
4.根据权利要求1所述的动物血液固定保存新方法，其特征是所述的保存是将装有血样和酒精溶液的试管口向上放入容器后密封，在常温下存放、及时运输至实验室。
全文摘要
动物血液固定保存新方法，属于分子生物学技术领域。将采集血样加入装有酒精(75％乙醇)溶液的试管中混匀，保存，血样和酒精溶液的体积比为1∶3.5－4.5。将装有血样和酒精溶液的试管口向上放入容器后密封，在常温下存放、运输至实验室。本发明工艺科学先进简单，不需进行抗凝处理和离心而直接进行固定处理，在常温下运输至实验室进行DNA的提取等。有助于在偏僻地区进行血液采集工作，不需有液氮或干冰设备，无需电力供应，也无需低温运输，简易方便，可方便地应用于生产实际，提高工作效率，降低成本。有很好的推广应用价值。
文档编号A01N1/00GK1596636SQ20041004185
公开日2005年3月23日 申请日期2004年8月31日 优先权日2004年8月31日
发明者陈宽维, 章双杰, 李慧芳, 章明, 汤青萍, 屠云洁 申请人:陈宽维, 章双杰, 李慧芳, 章明, 汤青萍, 屠云洁