专利名称：茅苍术组培繁殖的种质保存方法
技术领域：
本发明涉及植物的种质保存方法，特指茅苍术组培繁殖的种质保存技术。
背景技术：
茅苍术(Atractylodes lancea(thunb.)DC)为菊科植物，是多年生草本植物。茅苍术是道地中药材，可用于治疗消化不良、胃痛及夜盲症等症，科学研究正不断丰富人类对它的药理认识。现在人们还利用它预防感冒和SARS、治疗窦性心动过速、糖尿病、细菌性痢疾等上。
但是，由于生态环境的破坏和过去掠夺式的采挖，野生茅苍术的资源日渐稀缺，已处于濒危状态。药材市场上茅苍术是有价无货的。目前，全国各大药材市场上均为北苍术，其质量和疗效均逊于茅苍术。除了保护茅苍术的生境外，人工驯化和栽培就成为拯救茅苍术资源的重要手段。目前的研究发现，野生茅苍术具有多种类型，各种类型的产量和品质具有较大的差异，因此栽培优质茅苍术成为高产优质栽培的关键。而选择优良无性系，保存优质种质资源又是栽培优质茅苍术的关键。
茅苍术的繁殖主要通过两种途径一是有性繁殖，即通过种子繁衍下一代种苗；由于，野生茅苍术具有多种类型，长期混栽，将会引起不同类型的茅苍术之间的天然杂交，种质资源迅速退化。另一种繁殖途径是无性繁殖，即通过分根的方法，这类繁殖方法受季节性及自然条件的限制，同时一旦母株感染了病虫害等，通过无性繁殖很快地造成病菌蔓延，也将使茅苍术的产量和质量受到很大影响。因此，很有必要利用组织培养技术来解决茅苍术优质资源的种质保存问题。但迄今未有茅苍术优质资源的种质保存成功的报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中存在的问题，提供一种茅苍术种质保存技术，该技术不受自然条件或地区差异的限制，有利于种质的长期保存，随时能提供优质纯化的种苗，且保存后栽培的幼苗生长快，能使茅苍术达到优质高产。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下技术方案茅苍术组培繁殖的种质保存方法，包括选用无性系的根茎为外植体，在附加激素的MS培养基上直接诱导出芽，芽经增殖、继代、生根、试管苗移栽，完成优质资源的种质保存过程，基本培养基选用MS附加蔗糖3％、琼脂0.8％；芽诱导和增殖培养基选用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；继代培养基选用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常规高压灭菌；试管苗培养条件选20±2℃；光照12h/d，光照强度1500～2000Lux。
上述方法可选用生殖生长期的根茎为外植体。
上述方法根茎的取材时期选择进人生殖生长期、植株开始结实的季节。
上述方法外植体选择长度0.5-1.5厘米的根茎。
上述方法可以根据需要进行继代培养，常规情况应每隔1-2月继代培养一次。
试管苗的移栽选择在生根培养10-15天后，小苗茎叶长4-6厘米时，在移栽前2-3天打开瓶盖，待叶色加深，再移栽到温室，开始一周使湿度保持在90％以上，其后使湿度保持在75％左右，10-15天后栽到露地，再经一月定植田间。
与常规方法相比，本发明的优点在于1、与以种子进行种质保存的方法相比，本发明不受自然条件或地区差异的限制。种子繁殖受所在地区的气候及地理条件的限制，而本发明是通过对营养体进行组织培养获得种苗，不受气候条件的限制，由于组培苗能长期继代培养保存，因此一旦需要可以随时提供种苗。
2、方便保存后的栽培由于组培苗繁殖系数高，速度快，可以迅速提供优质苗，移栽后的苗的生长速度快，有利于大规模的栽培。
3、减少常规的无性系种质保存的用地常规的无性系保存种质需要占用一定的土地，且易感染病毒、病害造成种质资源退化。利用本发明技术，可以减少用地，同时可以对生长过弱、严重感染病毒、病害的无性系在培养基上进行脱毒培养，使无性系复壮、纯化，达到种质长期保存的目的。
4、本发明技术稳定可靠，可重复性强，可以满足既扩繁又保存种质资源的目的。
5、本发明技术提供的种质资源移栽到田间后苗齐、生长健壮，抗性强、生长势胜于种子培育的苗且能保持培养前的无性系的优良性状。
图1为继代培养9次的组培苗
具体实施例方式
下面用实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此。
实施例一选用茅苍术优良无性系的根茎为外植体，根茎的取材时期选在当年10月份，外植体选择长度0.5厘米的根茎。在附加不同种类和浓度激素的MS培养基上直接诱导出芽，然后通过增殖、继代、生根到试管苗移栽培完成种质保存过程；上述繁殖的培养基选用MS附加蔗糖3％、琼脂0.8％，芽诱导和增殖培养基选用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；继代培养基选用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/l，pH为5.5，常规高压灭菌；试管苗培养条件选20±2℃；光照12h/d，光照强度为1500Lux，继代培养1次。
试管苗的移栽选择在生根培养10天后，小苗茎叶长4厘米时，在移栽前2天打开瓶盖，待叶色加深，再移栽到温室，开始一周使湿度保持在90％以上，其后使湿度保持在75％左右，10天后栽到露地，再经一月定植田间。
定植后的组培苗生长健壮整齐，通过一系列生物学性状调查及统计，组培小苗表现出与上代母株极大的一致性，同一来源的无性系的田间植株长势整齐，各无性系之间仍保持原有品系的明显特征。
实施例二选用茅苍术优良无性系的根茎为外植体，根茎的取材时期选在当年12月份，外植体选择长度1.0厘米的根茎。在附加不同种类和浓度激素的MS培养基上直接诱导出芽，然后通过增殖、继代、生根到试管苗移栽培完成种质保存过程；上述繁殖的培养基选用MS附加蔗糖3％、琼脂0.8％，芽诱导和增殖培养基选用MS+6-BA3.0mg/l+NAA0.2mg/l；继代培养基选用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.1mg/l；生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/l，pH为5.6，常规高压灭菌；试管苗培养条件选20±2℃；光照12h/d，光照强度为1800Lux，继代培养1次。
试管苗的移栽选择在生根培养12天后，小苗茎叶长5厘米时，在移栽前3天打开瓶盖，待叶色加深，再移栽到温室，开始一周使湿度保持在90％以上，其后使湿度保持在75％左右，12天后栽到露地，再经一月定植田间。
定植后的组培苗生长健壮整齐，通过一系列生物学性状调查及统计，组培小苗表现出与上代母株极大的一致性，同一来源的无性系的田间植株长势整齐，各无性系之间仍保持原有品系的明显特征。
实施例三选用茅苍术优良无性系的根茎为外植体，根茎的取材时期选在后一年2月份，外植体选择长度1.5厘米的根茎。在附加不同种类和浓度激素的MS培养基上直接诱导出芽，然后通过增殖、继代、生根到试管苗移栽培完成种质保存过程；上述繁殖的培养基选用MS附加蔗糖3％、琼脂0.8％，芽诱导和增殖培养基选用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；继代培养基选用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/l，pH为5.8，常规高压灭菌；试管苗培养条件选20±2℃；光照12h/d，光照强度为2000Lux，继代培养1次。
试管苗的移栽选择在生根培养15天后，小苗茎叶长6厘米时，在移栽前2天打开瓶盖，待叶色加深，再移栽到温室，开始一周使湿度保持在90％以上，其后使湿度保持在75％左右，15天后栽到露地，再经一月定植田间。
定植后的组培苗生长健壮整齐，通过一系列生物学性状调查及统计，组培小苗表现出与上代母株极大的一致性，同一来源的无性系的田间植株长势整齐，各无性系之间仍保持原有品系的明显特征。
实施例四取用材料为实施例一中继代培养1次的组培苗，继续继代培养，8次后再进行生根和试管苗的移栽，如图1所示，通过田间生物学性状调查及统计发现，通过300多天继代保存后的试管苗仍保持良好的生活力，同一来源的无性系植株，田间生长势整齐，仍保持原有无性系的明显特征。由此可以看出本发明对茅苍术种质的保存表现出明显的效果。
权利要求
1.一种茅苍术组培繁殖的种质保存方法，其特征在于种质保存过程为选用无性系的根茎为外植体，在附加激素的MS培养基上直接诱导出芽，芽经增殖、继代、生根、试管苗移栽，其中基本培养基选用MS附加蔗糖3％、琼脂0.8％，芽诱导和增殖培养基选用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；继代培养基选用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常规高压灭菌；试管苗培养条件选20±2℃；光照12h/d，光照强度1500～2000Lux。
2.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培繁殖的种质保存方法，其特征是选用生殖生长期的根茎为外植体。
3.根据权利要求2所述的一种茅苍术组培繁殖的种质保存方法，其特征是选择长度0.5～1.5厘米的根茎作为外植体。
4.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培繁殖的种质保存方法，其特征是可以每隔1-2月继代培养一次。
5.根据权利要求1所述的一种茅苍术组培繁殖的种质保存方法，其特征是试管苗的移栽选择在生根培养10～15天后，小苗茎叶长4～6厘米时，在移栽前2～3天打开瓶盖，待叶色加深，再移栽到温室，开始一周使湿度保持在90％以上，其后使湿度保持在75％左右，10～15天后栽到露地，再经一月定植田间。
全文摘要
本发明提供了茅苍术组培繁殖的种质保存技术，包括选用优良无性系的根茎为外植体，在附加不同种类和浓度激素的MS培养基上直接诱导出芽，然后通过增殖、继代、生根、试管苗移栽，完成优质资源的种质保存过程。本发明技术稳定可靠，可重复性强，种质保存的时间长，经过保存的茅苍术的试管苗，移栽到田间后苗齐、生长健壮，抗性强、生长势优于种子培育的苗且能保持培养前的无性系的优良性状。
文档编号A01H4/00GK1653889SQ200510037859
公开日2005年8月17日 申请日期2005年2月25日 优先权日2005年2月25日
发明者吴沿友, 李萍萍, 李西腾, 赵新政 申请人:江苏大学