专利名称：一种香柚的组培快繁方法
技术领域：
本发明属生物组培育苗技术领域，具体涉及一种香柚的组培快繁方法。
基于上海及长江中下游地区城市绿化所面临的现状，又要重视地方特色品种的应用，这样的任务无疑给目前保存于上海市宝山区长兴岛和横沙岛上的一种属于柑桔类(芸香科，柑桔属)的优良树种—香柚提供了一个广阔的发展空间。香柚适宜作为上海及长江中下游地区行道果树、公园装饰树种、城市小区绿化或生态林优势种群，它具有的园艺性状优势是1树干挺拔，四季翠绿，适合行道果树特点，易与其他树种混种，形成的森林生态网络；2每年五一节假日前后是盛花季节，满树白花，香气宜人，树叶散发的气体具有净化空气的作用；3成年树金色硕果，由于果酸，枝条有刺，不宜失窃，总挂果时间长达半年(尤其从国庆节可持续到春节，满树金黄色果子)，每个直径达10-12cm，沿道路两旁形成一条美丽的风景线，宜作为园庭果树和组成城市生态林；4果实虽有酸味，加工后仍可食用，干果为中药材；5树种抗病性强，无致命病虫害发生。
香柚虽具有上述优势，但是目前香柚种苗培育遇到的困难就是由于其繁殖为有性繁殖因易发生植株变异，导致种苗整齐度与种苗质量差；利用种子或枝条扦插，则无法短时间内提供大批优质苗木。因此需要一种技术既能保证苗木的整齐一致，又能快速繁殖，这就是本发明所要解决的问题。
发明内容
本发明目的是提出一种快速繁殖香柚的方法，克服有性繁殖植株变异与整齐度差的缺点，达到快速获得植株整齐一致的优良香柚苗木。
本发明提出的香柚组培快繁方法，以香柚成熟种子为材料，经种子培养、微不定芽诱导与扩繁、丛生苗壮苗、诱导生根获得香柚组培苗，具体步骤如下(1)籽种培养种子接种于培养基MS1，该培养基MS1为MS无机盐、蔗糖和不同激素配比组合；(2)微不定芽诱导与扩繁种子经过15-30培养，发芽成绿苗；取膨大绿色子叶接种于培养基MS2，该培养基MS2为MS无机盐、蔗糖与不同激素配比组合；(3)丛生芽壮苗将丛生苗组织切块，接种于MS3培养基增殖，该培养基MS3为MS无机盐、蔗糖与不同激素配比组合；(4)诱导生根将单株株苗扦插于诱导根的培养基MS4中，该培养基MS4为MS无机盐、蔗糖与激素配比组合；本发明中培养基组分比较好的重量配比如下籽种培养基MS1MS无机盐 0.3-0.6％蔗糖 1-2％6BA 0.5-1.5×10-6NAA 1-3×10-7植物凝胶 0.2-0.4％pH5.6-5.9微不定芽诱导及扩繁培养基MS2MS无机盐 0.3-0.6％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％NAA 1-3×10-76-BA 0.5-1.5×10-6生物素0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7
维生素C 2-6×10-7核黄素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9丛生芽壮苗培养基MS3MS无机盐 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％IBA 0.5-1.5×10-6IAA 0.1-0.3×10-6生物素0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7维生素C 2-6×10-6核黄素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9诱导根培养基MS4MS无机盐 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％IBA 0.5-2×10-7IAA 0.1-0.3×10-6生物素0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7维生素C 2-6×10-6核黄素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9本发明提出的香柚组培快繁技术可达到每年扩繁速度为103-104倍，组培苗生根系发达并且植株长势良好，是一种理想的快繁技术。
本发明的方法中，籽种培养包括浸种、消毒等预处理，具体操作为浸种种子在45℃-50℃温水中浸泡5-10分钟，再用55℃-60℃热水浸泡50-60分钟；消毒种子用15％次氯酸钠消毒20-25分钟；然后将种子接种于消毒的培养基MS1上，置于27℃-29℃黑暗条件下培养；本发明的方法中，培养种子时，每间隔10-15天可更换培养基一次。经过15-30天培养后，种子发芽成绿苗。取膨大绿色子叶接种培养基MS2，经20-30天培养成丛生芽；本发明的方法中，将长成0.5-1.5cm直径左右的丛生苗组织切成每块直径为0.3-0.5cm的小块，接种于MS3培养基，26℃-29℃下光照培养使之增殖；本发明的方法中，诱导生根包括丛生苗分株与诱导生根，具体为将长至2.5-3cm高度的丛生苗，无菌操作分离成单株株苗，扦插于诱导根的培养基MS4中。培养20-30天，诱导生根，待主根长到2-3cm，可作移植用。
本发明方法中，对于经诱导生根的组培苗还可进一步进行练苗和落地培养、苗圃培养，具体如下(1)练苗和落地培养，在落地前打开有生根的组培苗瓶盖，室温放置2-5天，然后移植至营养钵中，室温培养；(2)苗圃培养，20-30天后，将生长良好的组培苗直接移栽到室外苗床培养，定期进行种苗水、肥、药等技术管理，确保育苗良好质量。
实施例1(是1号处理)。种子在45℃温水中浸泡5分钟，再用60℃热水浸泡55分钟。种子经15％次氯酸钠消毒20分钟，将种子接种于无菌的培养基MS1(重量百分比为MS无机盐0.44％，蔗糖1.5％，6BA 1×10-6，NAA 2×10-7，植物凝胶0.25％)上，置于27℃黑暗条件下培养；培养的种子，每间隔10天更换培养基一次；在经过25天培养后，种子发芽成绿苗。取膨大绿色子叶接种培养基MS2(重量百分比为MS无机盐0.44％，蔗糖1.5％，NAA 2×10-7，6BA 1×10-6，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 5×10-6，植物凝胶0.25％)，经25天培养成丛生芽；将长成1.5cm直径左右的丛生苗组织切成每块直径为0.3cm的小块，接种于MS3培养基(重量百分比为MS无机盐0.22％，蔗糖1.5％，IAA2×10-7，IBA 8×10-7，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 5×10-6，植物凝胶0.25％)，28℃下光照培养使之增殖；将长至2.5cm左右高度的丛生苗，无菌操作分离成单株株苗，扦插于诱导根的培养基MS4(重量百分比为MS无机盐0.22％，蔗糖1.5％，IAA2×10-7，IBA 1×10-7，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 5×10-6，植物凝胶0.25％)中。培养25天，诱导生根，待主根长到2cm左右，进行移植。
实施例2(是2号处理)，种子在45℃温水中浸泡10min，再用55℃热水浸泡50min，种子用15％次氯酸钠消毒15min，将种子接种于消毒的培养基MS1(重量百分比为MS无机盐0.44％，蔗糖1.5％，6BA 1×10-6，NAA 2×10-7，植物凝胶0.25％)上，置于27℃黑暗条件下培养；培养的种子，每间隔10天更换培养基一次；在经过20天培养后，种子发芽成绿苗。取膨大绿色子叶接种培养基MS2(重量百分比为MS无机盐0.44％，蔗糖1.5％，NAA 1.5×10-7，6BA 1×10-6，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 3×10-6，植物凝胶0.25％)，经30天培养成丛生芽；将长成1.5cm直径左右的丛生苗组织切成每块直径为0.3cm的小块，接种于MS3培养基(重量百分比为MS无机盐0.22％，蔗糖1.5％，IAA1×10-7，IBA 8×10-7，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 3×10-6，植物凝胶0.25％)，28℃下光照培养使之增殖；将长至2.5cm左右高度的丛生苗，无菌操作分离成单株株苗，扦插于诱导根的培养基MS4(重量百分比为MS无机盐0.22％，蔗糖1.5％，IAA1×10-7，IBA 1×10-7，生物素1×10-7，叶酸1×10-7，核黄素1×10-7，维生素C 3×10-6，植物凝胶0.25％)中。培养20天，诱导生根，待主根长到2cm左右，进行移植。
以上两种不同材料处理与培养基配方经过本发明上述技术籽种培养-微不定芽诱导-丛生苗扩繁-丛生苗分株与生根，培养出生根并且长势良好的香柚植株，繁殖效率为103-104倍左右，符合组培快繁与工厂化育苗的技术要求。
权利要求
1.一种香柚组培快繁方法，其特征在于以香柚成熟种子为材料，经种子培养、微不定芽诱导与扩繁、丛生苗壮苗、诱导生根获得香柚组培苗，具体步骤如下(1)籽种培养 将种子接种培养基MS1；(2)微不定芽诱导与扩繁种子经15～30天培养，发芽成绿苗，取膨大绿色子叶接种于培养基MS2；(3)丛生芽壮苗 将丛生苗组织切块，接种于MS3培养基增殖；(4)诱导生根 将单株株苗扦插于诱导生根培养基MS4中；上述步骤中，培养基组分重量配比如下籽种培养基MS1MS无机盐 0.3-0.6％蔗糖 1-2％6BA 0.5-1.5×10-6NAA 1-3×10-7植物凝胶 0.2-0.4％pH5.6-5.9微不定芽诱导及扩繁培养基MS2MS无机盐 0.3-0.6％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％NAA 1-3×10-76-BA 0.5-1.5×10-6生物素0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7维生素C 2-6×10-7核黄素0.5-1.5×10-7pH5.6-5.9丛生芽壮苗培养基MS3MS无机盐 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％IBA 0.5-1.5×10-6IAA 0.1-0.3×10-6生物素 0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7维生素C 2-6×10-6核黄素 0.5-1.5×10-7pH 5.6-5.9诱导根培养基MS4MS无机盐 0.15-0.3％蔗糖 1-2％植物凝胶 0.2-0.4％IBA 0.5-2×10-7IAA 0.1-0.3×10-6生物素 0.5-1.5×10-7叶酸 0.5-1.5×10-7维生素C 2-6×10-6核黄素 0.5-1.5×10-7pH 5.6-5.9
2.根据权利要求1所述的香柚组培苗快繁方法，其特征在于籽种培养还包括浸种、消毒预处理，具体操作为浸种种子在45℃-50℃温水中浸泡5-10分钟，再用55℃-60℃热水浸泡50-60分钟；消毒种子用15％次氯酸钠消毒20-25分钟；然后将种子接种于无菌培养基MS1上，置于27℃-29℃黑暗条件下培养。
3.根据权利要求1所述的香柚组培快繁方法，其特征在于培养种子时，每间隔10-15天更换培养基一次，经过15-20天培养后，种子发芽成绿苗；取膨大绿色子叶接种培养基MS2，经20-30天培养成丛生芽。
4.根据权利要求1所述的香柚组培快繁方法，其特征在于丛生壮苗阶段，将长成0.5-1.5cm直径的丛生苗组织切成每块直径为0.3-0.5cm的小块，接种于MS3培养基，26℃-29℃下光照培养使之增殖。
5.根据权利要求1所述的香柚组培快繁方法，其特征在于诱导生根包括丛生苗分株壮苗与诱导生根，具体为将长至2.5-3cm高度的丛生苗，无菌操作分离成单株株苗，扦插于诱导根的培养基MS4中，培养20-30天，诱导生根，待主根长到2-3cm，可作移植用。
6.根据权利要求1所述的香柚组培快繁方法，其特征在于还进行如下步骤(1)练苗和落地培养 在落地前打开有生根的组培苗瓶盖，室温放置2-5天，然后移植至营养钵中，室温培养；(2)苗圃培养20-30天后，将生长良好的组培苗直接移栽到室外苗床培养，定期进行种苗水、肥、药等技术管理，确保育苗良好质量。
全文摘要
本发明为香柚的一种组培快繁的技术。通过材料筛选处理、培养基成份改进和激素调控等技术手段形成了每年扩繁速度为10
文档编号A01H4/00GK1373993SQ0211141
公开日2002年10月16日 申请日期2002年4月18日 优先权日2002年4月18日
发明者明凤, 叶鸣明, 沈大棱 申请人:复旦大学