专利名称：海仙报春的组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及植物组织培养，具体地说，涉及海仙报春(Primulapoisonii)的组织培养快速繁殖方法。
背景技术：
海仙报春(Primula poisonii)为报春花科报春花属植物，是一种非常美丽的园林观赏花卉。海仙报春(Primula poisonii)是多年生草本花卉，整个植株呈莲座状，根状茎发达，向上生5到多个叶丛，以播种繁殖为主，一般于春季播种后，经过营养生长于次年5月份始花，生长较慢，且繁殖系数低。除播种繁殖外，报春花属无性繁殖可用的方法有分株(叶丛)繁殖，组织培养繁殖，少数多年生种类可采用扦插繁殖，然而分株繁殖的方法远不能满足生产需求。
组织培养是快速繁殖优良植物品种的一条重要途径，报春花属已有不少种进行了组织培养的相关报道，但是海仙报春(Primulapoisonii)的组织培养却没有相关研究与报道，因此需要研究海仙报春(Primula poisonii)的组织培养，并形成一套专门的快繁技术体系。
发明内容
本发明的目的是提供一种海仙报春(Primula poisonii)的组培快繁方法，提高海仙报春(Primula poisonii)的繁殖系数、生根率及移栽成活率，并结合其它相关的技术措施，使海仙报春(Primulapoisonii)的种苗生产、种质保存等能够得到较好的保障。
为了实现本发明目的，本发明的一种海仙报春(Primula poisonii)的组培快繁方法，外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽。
所述的外植体为海仙报春(Primula poisonii)的腋芽。
所述不定芽诱导和继代的培养基为MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/lNAA，pH为5.8～5.9。其光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。Lux(勒克司)为照度的单位。
所述生根培养基为MS或MS+0.2mg/l NAA，优选为MS+0.2mg/lNAA，pH为5.8～5.9。
其光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux。
经在生根培养基中培养2～3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。
外植体采用0.1％升汞溶液消毒3～4min。
组培苗适宜的培养温度为20～23℃之间，超过25℃组培苗变黄甚至逐渐死亡。
组培苗的移栽适宜温度为18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活。
具体地组培快繁方法为选海仙报春(Primula poisonii)的腋芽为外植体，经水冲洗干净，采用0.1％升汞溶液消毒3～4min，在无菌条件下经蒸馏水反复清洗，接种至诱导培养基MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/l NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux以内加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。2周后逐步揭去覆盖膜正常培养。
一般来说以腋芽为外植体，对植株的破坏性比较大，但对于一些比较珍贵，且急需扩繁的材料，以腋芽为外植体进行扩繁，可以在短时间内获得大量的再生植株；通过腋芽再生的海仙报春(Primulapoisonii)试管苗生长健壮，对后期的生长观察发现，基本能保持其优良种性不变。组培快繁的试管苗，在生长过程中，不易受到病虫害的侵染，但为了进一步防止病虫害的产生，宜在生长季内喷施多菌灵、氧化乐果等3～4次为佳；试管苗移栽时的温度应控制在18～25℃之间，过高或过低都不利于试管苗的成活，夏季不宜进行试管苗的移栽。
本发明的组培快繁方法繁育海仙报春(Primula poisonii)，2个月内增殖系数达到3～4，生根率达95％以上，移栽成活率几乎为100％，极大地提高了海仙报春(Primula poisonii)的繁殖系数，缩短成苗周期，又可降低成本，为今后大面积园林应用和工厂化育苗提供了非常有效的方法；同时，以腋芽为外植体进行增殖和快繁，能够保持海仙报春(Primula poisonii)的种性不变，为新品种培育中出现的较为珍贵稀有变种的保存提供了保障。
与现有技术相比，本发明海仙报春(Primula poisonii)的组培快繁方法的优点在于1.建立了一种海仙报春(Primula poisonii)的组培快繁方法，相比传统的报春花属植物育苗繁殖方法，如播种繁殖和分株繁殖，极大地提高了海仙报春(Primula poisonii)的繁殖系数，为科研研究和生产栽培提供了技术支持；2.通过组培快繁得到的幼苗，生长强健，叶色浓绿，一致性强，成苗容易，适应性较强，病虫害少，易于管理；3.利用组培快繁方法繁育海仙报春(Primula poisonii)，解除了季节与气候的限制，从而缩短了育苗周期，增加了繁殖量；4.利用组培快繁方法繁育海仙报春(Primula poisonii)，可以保持优良种或品种的特性不变，从而为新品种选育研究中变异保存提供了有效的方法。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1以海仙报春(Primula poisonii)叶片为外植体探究不定芽诱导最适培养基选用长势良好的幼苗叶片作为外植体探究不定芽诱导最佳培养基配方。取海仙报春(Primula poisonii)的幼嫩叶片自来水冲洗2～3h，于水中滴一滴清洁剂震荡15min清除表面杂质，自来水反复冲洗干净；表面消毒70％酒精消毒10～15s，无菌水冲洗4～5次，0.1％的升汞消毒3～4min，再用无菌水冲洗4～5次。然后将消毒过的叶片切成1cm2的小块(带部分叶脉)接种在丛生芽的诱导培养基上，每瓶接种5～6块，每种培养基接10瓶，暗培养。其中，6-BA的浓度梯度0.5mg/l、1.0mg/l和2.0mg/l；NAA的浓度梯度0.05mg/l、0.1mg/l和0.5mg/l，培养基pH为5.8，采用两因素完全随机试验设计。
不同6-BA和NAA浓度影响海仙报春(Primula poisonii)叶片的分化。接种4～5天后，叶片开始肿胀皱缩，15天左右切口处变肥变厚，30天后，有培养基种叶片开始产生愈伤并有少量不定芽的产生。不定芽分化的最佳浓度是6-BA 2.0mg/l和NAA 0.1mg/l，此培养基上海仙报春(Primula poisonii)诱导率达到22.5％，并且部分分化成芽。
实施例2以海仙报春(Primula poisonii)腋芽为外植体进行初培养和继代培养选取生长健壮的植株上的腋芽，自来水冲洗2～3h，消毒灭菌过程同叶片，接种在MS+6-BA 2.0mg/+NAA 0.1mg/l丛生芽诱导培养基上，每瓶接种2～3个；光照条件为自然散射光3000Lux加上人工辅助光源1800±200Lux，光照时间14h。
当腋芽接种在分化培养基上，不断抽出新叶，10天开始，抽出新叶的叶柄粗壮，基部变红，逐渐形成浅绿色愈伤组织，2周后开始有不定芽的分化；接种40天后，在腋芽新抽出的叶柄和叶片上，分化出大量的不定芽。
统计结果显示在MS+6-BA 2mg/l+NAA 0.1mg/l的培养基上接种2个月后，平均每个腋芽能分化出不定芽的数目是40～50个，显著多于叶片诱导的不定芽的数量。同时，温度对于不定芽的诱导和组培苗的生长起到非常关键的作用，在20～23℃之间，组培苗叶色浓绿，生长健壮；超过25℃，组培苗变黄并逐渐死亡。在这样的培养条件下，试管苗2个月的增值系数达到3～4，极大地提高了海仙报春(Primula poisonii)的繁殖系数。
实施例3海仙报春(Primula poisonii)组培苗的生根培养当不定芽在分化培养基上长出2～3片叶子时，将其从愈伤组织上切除，转移至生根培养基，配方MS、MS+NAA(0.1mg/l、0.2mg/l、0.5mg/l)中，pH为5.8；光照条件为自然散射光3000 Lux加上人工辅助光源3000Lux，光照时间14h。
从生根所需要的时间来看，在培养基MS和MS+0.2mg/l NAA中生根所需时间最短，为8～10天，但在MS+0.2mg/l NAA中，组培苗生根量和长势明显好于MS基本培养基，组培苗平均高度可达4.8cm，生根率为95％以上。
实施例4海仙报春(Primula poisonii)组培苗的移栽生根培养两周以后，待组培苗平均每株生根4～5条，根长达到1cm时，即可开始为移栽作准备。炼苗是试管苗移栽前的过渡，可以帮助试管苗逐步适应外界环境，使试管苗更健壮，叶色更加深绿，从而提高成活率。
海仙报春(Primula poisonii)试管苗炼苗3～4天后，移栽至温室细草炭土中，草炭土提前铺满穴盘，清水浸透；试管苗移栽后保持湿度80％以上，覆薄膜并每天喷水2～3次，2周以后即可逐步进行正常管理，移栽成活率几乎为100％。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
权利要求
1.一种海仙报春的组培快繁方法，包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽，其特征在于，所述的外植体为海仙报春的腋芽，所述不定芽诱导和继代的培养基为MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA，pH为5.8～5.9，所述生根培养基为MS或MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8～5.9。
2.根据权利要求1所述的组培快繁方法，其特征在于，所述不定芽诱导、继代培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux。
3.根据权利要求1或2所述的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养基为MS+0.2mg/l NAA。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述生根培养时，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述组培苗的培养温度为20～23℃。
6.根据权利要求1～5任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述组培苗的移栽温度为18～25℃。
7.根据权利要求1～6任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述外植体采用0.1％升汞溶液消毒3～4min。
8.根据权利要求1～7任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，所述的组培苗经在生根培养基中培养2-3周后，炼苗3～4天移栽至温室细草炭土中培养。
9.根据权利要求1～8任意一项所述的组培快繁方法，其特征在于，选海仙报春的腋芽为外植体，经水冲洗干净，采用0.1％升汞溶液消毒3～4min，在无菌条件下经蒸馏水反复清洗，接种至诱导培养基MS+2.0mg/l 6-BA+0.1mg/l NAA中，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光1500～2000Lux；之后移至相同培养基增殖，继代2～3次，生根培养基为MS+0.2mg/l NAA，pH为5.8，光照条件为自然散射光2500～3000Lux加人工辅助光2500～3000Lux；温度保持在20～23℃之间；生根培养2～3周，炼苗3～4天后，移至细草炭土中培养，保持湿度高于80％，每天喷水2～3次。
全文摘要
本发明提供了一种海仙报春的组培快繁方法，包括外植体选择、表面消毒、不定芽诱导、继代培养、生根培养与试管苗移栽。本发明的海仙报春(Primula poisonii)组培快繁方法，一个腋芽可诱导产生40～50个左右的新芽，经过继代30～40天左右增殖系数为3～4，生根率可达到95％以上，移栽成活率几乎为100％，实现了通过快繁技术对优良海仙报春(Primula poisonii)单株的保存，同时大大提高了海仙报春的育苗生产能力，缩短成苗时间又可降低成本，为报春花的大面积推广应用提供了技术支持。
文档编号A01G7/00GK101015279SQ20071006405
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月16日 优先权日2007年2月16日
发明者张启翔, 李翠娟, 潘会堂, 梁树乐, 程堂仁, 孙明 申请人:北京林业大学