专利名称：一种非洲菊组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及花卉培养技术领域，尤其是一种非洲菊组培快繁方法——非洲 菊"两步成苗法"。
背景技术：
非洲菊(Ce/^era ^/zze^77j'j'力oAa )又名扶郎花、太阳菊等，是菊科大 丁草属多年生常绿宿根草本花卉。非洲菊观赏价值较高，其花朵硕大，花盘直 径可达8-10cm，花枝挺拔，因有"扶持郎君，事业发达"之意而倍受消费之 青睐，目前已成为世界花卉市场中最为畅销的花卉品种之一。非洲菊扩繁技术 落后是导致我国非洲菊发展缓慢的主要原因，非洲菊为异花授粉植物，自交不 孕，自然条件下结实率很低且种子寿命短极易丧失萌发力，同时其种子后代繁 殖容易失去原有种性，发生变异，导致花梗变细、变软、花型变小等。分株繁 殖可以保持原有的种性特征，不发生变异，但在繁殖过程中种苗容易被病虫侵 染，而且增殖速度比较慢，难以满足旺盛的市场对生产用苗的迫切需求。因此 建立快速高效的非洲菊种苗生产技术体系对我国非洲菊花卉业的产业化发展 具有重大的现实意义。
非洲菊在国际花卉市场上正处于迅速发展的阶段，生产上需要大量的良 种种苗，我国正处在推广阶段，良种种苗供不应求，种子和种苗全部从国外引 进，成本非常高。许多研究院(所)已通过组培的方法获得了再生植株，但多采 用常规的"三步成苗"法，即从外殖体诱导出愈伤组织，再由愈伤组织诱导出 不定芽，然后进行不定芽生根诱导三个步骤，其繁殖种苗的周期在7个月以上， 因组培成本较高而导致非洲菊种苗价格贵。另外非洲菊品种多、种质类型复杂， 尽管以花托、花瓣、嫩叶、茎尖、叶茎为起始外殖体培养配方已经公布，但不同品种间的研究结果差异大，特别是利用同一种培养基配方难以实现非洲菊绿 蕊与黑蕊品种的植株再生，对于种苗生产企业来讲，仍需要进一歩优化组培技 术。
发明内容
本发明的目的是提供一种针对不同非洲菊绿蕊品种和黑蕊品种可以共用 的植株再生培养基配方，简化非洲菊的组培程序，降低组培成本。 为了达到上述目的，本发明采用的技术方案包括以下步骤
(1) 在超净工作台上剪取非洲菊试管苗叶片作为外殖体；
(2) 将所述的外殖体沿垂直中脉方向横切成2-6mm的方块，叶背朝下接 种于诱导培养基中，每瓶接种数10-25株，所述诱导培养基为加6-BA3.0-6.0 mg/L、 IAA 0.1-0.4 mg/L的MS培养基；
(3) 将接种在培养瓶中的外殖体先进行3天暗处理，然后在光照强度为 800-2000Lux、光照时间12-14 h/d、温度为20-28° C的条件下置于绿色的滤 光膜下培养50-65天即得到诱导的不定芽；
(4) 将所述诱导的不定芽接种到生根培养基中，每瓶接种数为10-20株， 在光照强度为800-2000Lux、光照时间12-14h/d、温度为20-28° C的条件下 培养60-70天即可生根，所述的生根培养基为加有IAA0.1-0.3 mg/L的MS培 养基。
本发明提供的非洲菊组培快繁方法，不仅解决了非洲菊黑蕊品种不定芽诱 导困难的难题，而且打破了非洲菊绿蕊品种和黑蕊品种的界限，可通过一种培 养基实现两个品系的不定芽高效诱导；另外本发明通过以试管苗片为外殖体直 接诱导不定芽和生根培养两步完成非洲菊组培苗生产全过程，简化了组培程 序，不仅组培周期由原来的7个月縮短到4个月，而且减少了一次转接过程， 组培成本节省了三分之一。
具体实施例方式
下面通过具体实施例对本发明进行详细描述 实施例1
(1)在超净工作台上剪取非洲菊试管苗叶片作为外殖体； -切-将外殖体沿垂直中脉方向横切3刀，切断叶脉，切成2mm的方块，叶 背朝下接种于加有6-BA3.0mg/L、 IAA0.1mg/L的MS培养基中，每瓶接种数 为25株；
(3) 将接种在该培养瓶中的外殖体先进行3天暗处理，然后在光照强度为 800Lux、光照时间14h/d、温度为28° C的条件下置于绿色的滤光膜下培养 65天，得到诱导的长度为4cm的不定芽，其中绿蕊品种的诱导率为99.8%，黑 蕊品种的诱导率为91%;
(4) 将得到的不定芽接种到加有IAA0.3mg/L的MS培养基中，每瓶接种 数为10株，在光照强度为1500Lux、光照时间12h/d、温度为24° C的条件 下培养60天，得到长度为7 cm的根，生根率为100%，每个植株平均生根8 个，呈粗短的鸡爪状，植株挺拔，平均高度在12cm，叶片为淡绿色。
以上所述的MS培养基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的琼脂和300mg/L 的水解酪蛋白。 实施例2
(1) 在超净工作台上剪取非洲菊试管苗叶片作为外殖体；
(2) 将外殖体沿垂直中脉方向横切3刀，切断叶脉，切成4mm的方块，叶 背朝下接种于加有6-BA5.0mg/L、 IAA0.3mg/L的MS培养基中，每瓶接种数 为IO株；
(3) 将接种在该培养瓶中的外殖体先进行3天暗处理，然后在光照强度为 1500Lux、光照时间13h/d、温度为25° C的条件下置于绿色的滤光膜下培养
550天，得到诱导的长度为8cm的不定芽，其中绿蕊品种的诱导率为100%，黑 蕊品种的诱导率为97%;
(4)将得到的不定芽接种到加有IMO. 2mg/L的MS培养基中，每瓶接种 数为15株，在光照强度为800Lux、光照时间14h/d、温度为28° C的条件下 培养65天，得到长度为5cm的根，生根率为100%，每不植株平均生根6个， 呈粗短的鸡爪状，植株挺拔，平均高度在10cm，叶片为淡绿色。
以上所述的MS培养基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的琼脂和300mg/L 的水解酪蛋白。
实施例3
(1) 在超净工作台上剪取非洲菊试管苗叶片作为外殖体；
(2) 将外殖体沿垂直中脉方向横切3刀，切断叶脉，切成6mm的方块，叶 背朝下接种于加有6-BA6.0mg/L、 IAA0.4mg/L的MS培养基中，每瓶接种数 为15株；
(3) 将接种在该培养瓶中的外殖体先进行3天暗处理，然后在光照强度为 2000Lux、光照时间12h/d、温度为20° C的条件下置于绿色的滤光膜下培养 50天，得到诱导的长度为7cm的不定芽，其中绿蕊品种的诱导率为100%，黑 蕊品种的诱导率为94%;
(4) 将得到的不定芽接种到加有IAAO. lmg/L的MS培养基中，每瓶接种 数为20株，在光照强度为2000Lux、光照时间14h/d、温度为26° C的条件 下培养70天，得到长度为4cm的根，生根率为100%，每个植株平均生根4个， 呈粗短的鸡爪状，植株挺拔，平均高度在13cm，叶片为淡绿色。
以上所述的MS培养基中均附加有30%的蔗糖、0.6%的琼脂和300mg/L 的水解酪蛋白。
综上所述，本发明操作方法简单，不仅简化了组培程序，而且大大縮短了组培苗繁育周期，对非洲菊种苗产业化生产具有重大的现实意义。利用该发明 生产非洲菊种苗，不仅打破了非洲菊黑蕊品种和绿蕊品种的界限，而且解决了
生产中非洲菊黑蕊品种不定芽诱导率低的难题；此外,利用该方法生产非洲菊
种苗，能较好的保持原品种遗传稳定性，即使是多代繁殖,也不易发生变异，因 其诱导的再生植株是未经脱分化的细胞形成，细胞无性系变异小，可较好的保 持受体植株的优良特性。
权利要求
1、一种非洲菊组培快繁方法，其特征在于，包括以下步骤(1)在超净工作台上剪取非洲菊试管苗叶片作为外殖体；(2)将所述的外殖体沿垂直中脉方向横切成2-6mm的方块，叶背朝下接种于诱导培养基中，每瓶接种数10-25株，所述诱导培养基为加6-BA3.0-6.0mg/L、IAA0.1-0.4mg/L的MS培养基；(3)将接种在培养瓶中的外殖体先进行3天暗处理，然后在光照强度为800-2000Lux、光照时间12-14h/d、温度为20-28℃的条件下置于绿色的滤光膜下培养50-65天即得到诱导的不定芽；(4)将所述诱导的不定芽接种到生根培养基中，每瓶接种数为10-20株，在光照强度为800-2000Lx、光照时间12-14h/d、温度为20-28℃的条件下培养60-70天即可生根，所述的生根培养基为加有IAA0.1-0.4mg/L的MS培养基。
全文摘要
本发明公开了一种非洲菊组培快繁方法，非洲菊“两步成苗法”，通过以试管苗叶片为外殖体直接诱导不定芽和生根培养两步完成非洲菊组培苗生产全过程。利用该方法生产非洲菊种苗，不仅解决了非洲菊黑蕊品种不定芽诱导困难和诱导率低的难题，而且打破了非洲菊绿蕊品种和黑蕊品种的界限，可通过一种培养基实现绿蕊品种98％以上及黑蕊品种90％以上的不定芽高效诱导；另外本发明简化了组培程序，不仅组培周期由原来的7个月缩短到4个月，而且减少了一次转接过程，组培成本节省了三分之一。
文档编号A01H4/00GK101496496SQ20081001460
公开日2009年8月5日 申请日期2008年2月2日 优先权日2008年2月2日
发明者杨娟侠, 王之涵, 王家喜, 王少敏, 王江勇 申请人:山东省果树研究所