专利名称：新疆阿魏无菌苗培育方法
技术领域：
本发明涉及一种阿魏育苗方法，特别是一种新疆阿魏无菌苗培育方法。 技术背景
新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K. M. Shen)为伞形科(Umbel 1 iferae)阿魏属 (Ferula L.)多年生一次结实类早春短命植物，是我国多个少数民族传统民族药材和 中药阿魏惟一的国内来源，为历版《中华人民共和国药典》收载，具有极高的药用价 值。但目前新疆阿魏植物资源处于渐危状态，难以满足目前日益扩大的中药、民族药 的市场需求，因此对其进行人工快繁和资源保护非常迫切。
新疆阿魏为早春短命植物，生长迅速，加上生长环境恶劣，组织很易衰老，采集 培养材料最佳时间难以掌握，因此细胞培养成功机率大大降低，目前采用的方法和手 段仅限于早春培养，使阿魏育苗工作受限，不能形成规模化，特别是新疆阿魏种子在 自然环境中存在生理休眠现象，采用通常方法育苗，发芽率、成功率很低，特别是难 以培养出无菌苗，而采用室内培养繁育新疆阿魏无菌苗，不仅可以在一年四季提供实 生苗，而且可以保证拥有较嫩的培养组织及避免消毒剂对幼嫩组织的直接伤害，提高 培养成功率，进而能有效地保护新疆野生药物资源，维持生物多样性，为医药业，特 别是中药、民族药的市场需求提供稳定、可持续利用的药材资源。
因此， 一种能够在一年四季提供实生苗，而且可以保证拥有较嫩的培养组织并避 免消毒剂对幼嫩组织的直接伤害，提高培养成功率的阿魏育苗方法，特别是一种新疆 阿魏无菌苗培育方法就应运而生。
发明内容
本发明的目的是提供一种阿魏育苗方法，特别是一种新疆阿魏无菌苗培育方法， 以实现新疆阿魏的规模化组培快繁体系，满足目前日益扩大的中药、民族药的市场需 求，进而有效地保护新疆野生药物资源，维持生物多样性，为医药业，特别是中药、 民族药的市场需求提供稳定、可持续利用的药材资源。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子；
消毒将所选种子浸入50 80%酒精消毒25 35s，沥干至无滴液现象后置入体 积百分比浓度为10 15%的HA溶液浸泡10 20min，沥干至无滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况。
上述消毒程序中的&02也可由重量百分比浓度为3 8%的NaC10溶液或重量百分比 浓度为0. 8 1. 2%的HgCI溶液替换。
置床培养将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，厚度最好为种子之间无上下叠 加情况为宜，保持环境相对湿度为25 75%，在温度2 20。C下培养7 60天；
上述的置床优选为下列的一种-
a. 取消毒后的种子，置于灭菌后的发芽床上，在2 15。C条件下培养20 60天； 所述的温度条件优选为4 10°C;
b. 取消毒后的种子，经浓度800 1200 mg/L的赤霉素(GA3)溶液中浸种15 30h， 用无菌水冲洗干净，置于灭菌后的发芽床上，在15 2(TC条件下培养7 15天。
上述的发芽床优选为砂床或至少一层滤纸所构成的滤纸床中的一种
发芽期间观察记载发芽情况，当胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为 下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
本发明突破了传统阿魏育苗的限制，大大提高了种子的发芽率，能够实现阿魏育 苗的规模化，特别是可采用室内培养新疆阿魏无菌苗，可以在一年四季提供种苗，而 且可以保证拥有较嫩的培养组织及避免消毒剂对幼嫩组织的直接伤害，提高培养成功 率，实现新疆阿魏的规模化组培快繁体系，有效地保护新疆野生药物资源，维持生物 多样性，为医药业，特别是中药、民族药的市场需求提供稳定、可持续利用的药材资 源，具有重要的意义。
具体实施例方式
实施例1:
选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入70%酒精消毒25s，沥干至 无滴液后置入体积百分比浓度为10%的HA溶液浸泡15min，沥干至无滴液后用无菌水 冲洗干净，沥干至无滴水情况。沥干至无滴液后用种子重量2倍量的无菌水冲洗2遍， 沥干至无滴水情况，所述的发芽床为砂床，先将砂床在150。C蒸汽下30min，冷却至4 l(TC，取消毒后的种子置于所述的种子发芽床上，在4。C条件下培养30天，发芽期间 并随时观察记载发芽情况，当胚根突破种子1/2以上长度时即可作为下一步进行组织 培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例2:
选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入50%酒精消毒35s，沥干至无滴液现象后置入体积百分比浓度为15%的&02溶液浸泡10min，沥干至无滴液现象后 用5倍重量无菌水冲洗3，沥干至无滴水情况，在充分灭菌后的砂床上将消毒后的种子 平铺于无菌发芽床中，厚度为种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为55%， 在温度1(TC下培养60天，发芽期间观察记载发芽情况，当70%以上种子胚根突破种子 1/2以上长度时即可，所得胚芽可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材 料。
实施例3:
选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入60%酒精消毒30s，沥干至 无滴液后置入体积百分比浓度为14%的H2(V溶液浸泡14min，沥干至无滴液后用无菌水 冲洗干净，沥干至无滴水情况。沥干至无滴液后用种子3倍重量的无菌水冲洗2遍， 沥干至无滴水情况，所述的发芽床为砂床，先将砂床在紫外线消毒60min，取消毒后的 种子置于所述的种子发芽床上，在7'C条件下培养30天，发芽期间并随时观察记载发 芽情况，当有一半以上种子的胚根突破种子1/2以上长度时，即可作为下一步进行组 织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例4:
选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入65%酒精消毒30s，沥干至 无滴液现象后置入体积百分比浓度为11%的^02溶液浸泡10min，沥干至无滴液现象后 用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，经浓度800 mg/L的赤霉素溶液中浸种20h， 用2倍重量无菌水冲洗1遍，取无菌滤纸两层平铺作为发芽床，将消毒后的种子平铺 于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度70%，在温度15'C下 培养10天并随时观察记载发芽情况，当有60%以上种子的胚根突破种子2/3以上长度 时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例5:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入75%酒精消毒25s， 沥干至无滴液现象后置入体积百分比浓度为15%的仏02溶液浸泡15min，沥干至无滴液 现象后用2倍重量的无菌水冲洗3遍，沥干至无滴水情况，经浓度1000 mg/L的赤霉 素0溶液中浸种15h，用3倍重量无菌水冲洗2遍，取无菌滤纸3层平铺作为发芽床， 将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度 60%,在温度2(TC下培养7天并随时观察记载发芽情况，当有50%以上种子的胚根突破 种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的实施例6:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入55%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入体积百分比浓度为13%的&02溶液浸泡12mim沥干至无滴液 现象后用3倍重量的无菌水冲洗3遍，沥干至无滴水情况，取消毒后的种子，经浓度 1100mg/L的赤霉素溶液中浸种30h，用3倍重量无菌水冲洗2遍，取无菌滤纸2层平 铺作为发芽床，将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保 持环境相对湿度55%，在温度18'C下培养10天并随时观察记载发芽情况，当有80%以 上种子的胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生 苗种植或移裁等的材料。
实施例7:
选择干净、饱满、整齐一致的种子；将所选种子浸入70%酒精消毒25s，沥干至 无滴液现象后置入体积百分比浓度为15%的&02溶液浸泡18min，沥干至无滴液现象后 用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，取消毒后的种子，经浓度900 mg/L的赤霉素 溶液中浸种25h，用4倍重量无菌水冲洗1遍，铺1层无菌滤纸作为发芽床，将消毒后 的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为70%，在 温度16'C下培养8天，发芽期间观察记载发芽情况，当2/3以上和种子的胚根突破种 子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材 料。
实施例8:
选择干净、饱满、整齐一致的种子；将所选种子浸入55%酒精消毒30s，沥干至 无滴液现象后置入体积百分比浓度为12。/。的H202溶液浸泡20min，沥干至无滴液现象后 用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，取消毒后的种子，经浓度1200 mg/L的赤霉 素溶液中浸种20h，用3倍重量无菌水冲洗2遍，铺3层无菌滤纸作为发芽床，将消毒 后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为65%， 在温度15'C下培养12天，发芽期间观察记载发芽情况，当2/3以上和种子的胚根突破 种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的 材料。
实施例9:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入75%酒精消毒30s，
6沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为5%的NaClO溶液浸泡15min，沥干至无滴 液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，在充分灭菌后的砂床上将消毒后的 种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为70%,在温 度5。C下培养50天，发芽期间观察记载发芽情况，当70%种子的胚根突破种子1/2以 上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。 实施例10:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入65%酒精消毒25s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为8%的NaClO溶液浸泡20min，沥干至无滴 液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将砂床在20(TC蒸汽灭菌30min后， 冷却至l(TC,将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环 境相对湿度为55%，在温度10'C下培养40天，发芽期间观察记载发芽情况，当75%种 子的胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种 植或移裁等的材料。
实施例ll:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入50%酒精消毒25s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为3%的NaClO溶液浸泡20min，沥干至无滴 液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，在2层无菌滤纸上将消毒后的种子 平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为75%，在温度4 。C下培养40天，发芽期间观察记载发芽情况，当70%种子的胚根突破种子1/2以上长 度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例12:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入50%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为6%的NaClO溶液浸泡15min，沥干至无滴 液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将消毒后的种子平铺于无菌发芽床 中，种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为55%，在温度8'C下培养50 天，发芽期间观察记载发芽情况，当80%种子的胚根突破种子1/2以上长度时即可，所 得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例13:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入75%酒精消毒30s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为0. 8%的HgCI溶液中浸泡15min，沥干至无滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，在充分灭菌后的砂床上将消毒后 的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为70%，在 温度5'C下培养50天，发芽期间观察记载发芽情况，当70%种子的胚根突破种子1/2 以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例14:
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沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1. 2%的HgCI溶液中浸泡25min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将砂床在18(TC蒸汽灭菌30min 后，冷却至8"，将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保 持环境相对湿度为70%，在温度8'C下培养55天，发芽期间观察记载发芽情况，当75% 种子的胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗 种植或移裁等的材料。 实施例15:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入60%酒精消毒25s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1%的HgCI溶液中浸泡20min，沥干至无滴 液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，在1层无菌滤纸上将消毒后的种子 平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为65%，在温度5 。C下培养55天，发芽期间观察记载发芽情况，当70%种子的胚根突破种子1/2以上长 度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例16:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入70%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1. 2%的HgCI溶液中浸泡15min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将消毒后的种子平铺于无菌发芽 床中，种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为65%,在温度6'C下培养50 天，发芽期间观察记载发芽情况，当75%种子的胚根突破种子1/2以上长度时即可，所 得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例17:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入65%酒精消毒30s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1. 1%的HgCI溶液中浸泡25min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，在3层无菌滤纸上将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为75%，在温度 15。C下培养15天，发芽期间观察记载发芽情况，当60%种子的胚根突破种子1/2以上 长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。 实施例18:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入55%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1. 2%的HgCI溶液中浸泡20min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将消毒后的种子平铺于无菌发芽 床中，种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为65%，在温度2(TC下培养 20天，发芽期间观察记载发芽情况，当65%种子的胚根突破种子1/2以上长度时即可， 所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例19:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入55%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为1. 2%的HgCI溶液中浸泡20min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将消毒后的种子平铺于2层无菌 滤纸发芽床中，种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为65%，在温度20 。C下培养10天，发芽期间观察记载发芽情况，当65%种子的胚根突破种子1/2以上长 度时即可，如果种子出芽率达不到预定值，可再延长5天，所得可作为下一步进行组 织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例20:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入70%酒精消毒30s， 沥干至无滴液现象后置入重量百分比浓度为0. 9%的HgCI溶液中浸泡30min，沥干至无 滴液现象后用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，将消毒后的种子平铺于3层无菌 滤纸发芽床中，种子之间无上下叠加情况为宜，保持环境相对湿度为75%,在温度15 。C下培养15天，发芽期间观察记载发芽情况，当60%种子的胚根突破种子1/2以上长 度时即可，如果种子出芽率达不到预定值，可再延长5天，所得可作为下一步进行组 织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例21:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入75%酒精消毒25s， 沥干至无滴液现象后置入体积百分比浓度为15%的HA溶液浸泡15min，沥干至无滴液 现象后用2倍重量的无菌水冲洗3遍，沥干至无滴水情况，取无菌滤纸3层平铺作为发芽床，将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境 相对湿度60%，在温度5'C下培养70天并随时观察记载发芽情况，当有80%以上种子的 胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或 移裁等的材料。 实施例22:
选种选择干净、饱满、整齐一致的种子，将所选种子浸入55%酒精消毒35s， 沥干至无滴液现象后置入体积百分比浓度为13%的&02溶液浸泡12min，沥干至无滴液 现象后用3倍重量的无菌水冲洗3遍，沥干至无滴水情况，取无菌滤纸2层平铺作为 发芽床，将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境 相对湿度55%，在温度8。C下培养50天并随时观察记载发芽情况，当有80%以上种子的 胚根突破种子1/2以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或 移裁等的材料。
实施例23:
选择干净、饱满、整齐一致的种子；将所选种子浸入70%酒精消毒25s，沥干至 无滴液现象后置入体积百分比浓度为15。/。的HA溶液浸泡18min，沥干至无滴液现象后 用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，铺1层无菌滤纸作为发芽床，将消毒后的种 子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为70%，在温度 l(TC下培养45天，发芽期间观察记载发芽情况，当2/3以上和种子的胚根突破种子1/2 以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
实施例24:
选择干净、饱满、整齐一致的种子；将所选种子浸入55X酒精消毒30s，沥干至 无滴液现象后置入体积百分比浓度为12。/。的H202溶液浸泡20min，沥干至无滴液现象后 用无菌水冲洗干净，沥干至无滴水情况，铺3层无菌滤纸作为发芽床，将消毒后的种 子平铺于无菌发芽床中，种子之间无上下叠加情况，保持环境相对湿度为65%,在温度 6'C下培养50天，发芽期间观察记载发芽情况，当2/3以上和种子的胚根突破种子1/2 以上长度时即可，所得可作为下一步进行组织培养、实生苗种植或移裁等的材料。
权利要求
1、一种新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征是通过如下技术方案实现的选种选择干净、饱满、整齐一致的种子；消毒将所选种子浸入50～80％酒精25～35s后，沥干后置入体积百分比浓度为10～15％的H2O2溶液浸泡10～20min，用无菌水冲洗干净，沥干；置床培养将消毒后的种子平铺于无菌发芽床中，保持环境相对湿度为25～75％，在温度2～20℃下培养7～60天。
2、 根据权利要求1所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述的置床培养 中，在2 15。C条件下培养20 60天。
3、 根据权利要求2所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述的温度条件 为4 10°C。
4、 根据权利要求1所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述的置床培养 中，取消毒后的种子，经浓度800 1200 mg/L的赤霉素溶液中浸种15 30h，用无菌 水冲洗干净，置于灭菌后的发芽床上，在15 20。C条件下培养7 15天。
5、 根据权利要求l、 2、 3或4所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述 发芽床为砂床或至少一层滤纸构成的滤纸床中的一种。
6、 根据权利要求l、 2、 3或4所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述 的消毒程序中的H202溶液由重量百分比浓度为3 8。/。的NaC10水溶液或重量百分比浓度 为0. 8 1. 2%的HgCI溶液替换。
7、 根据权利要求5所述的新疆阿魏无菌苗培育方法，其特征在于所述的消毒程序 中的HA溶液由重量百分比浓度为3 8%的NaClO水溶液或重量百分比浓度为0. 8 L2M的HgCI溶液替换。
全文摘要
本发明公开了一种阿魏育苗方法，特别是一种新疆阿魏无菌苗培育方法，主要通过选种、消毒和置床培养程序实现。与现有技术相比，本发明突破了传统阿魏育苗的限制，大大提高了种子的发芽率，能够实现阿魏育苗的规模化，特别是可采用室内培养新疆阿魏无菌苗，可以在一年四季提供种苗，而且可以保证拥有较嫩的培养组织及避免消毒剂对幼嫩组织的直接伤害，提高培养成功率，实现新疆阿魏的规模化组培快繁体系，有效地保护新疆野生药物资源，维持生物多样性，为医药业，特别是中药、民族药的市场需求提供稳定、可持续利用的药材资源，具有重要的意义。
文档编号A01C1/00GK101480123SQ20091011322
公开日2009年7月15日 申请日期2009年2月13日 优先权日2009年2月13日
发明者凯撒·苏莱曼, 林 姜, 军 朱, 李晓瑾, 明 梁, 王果平, 石明辉, 贾新岳, 贾晓光, 阿依别克·热河木都拉 申请人:新疆维吾尔自治区中药民族药研究所