专利名称：：蜡蚧轮枝菌速释分散片及其制备方法
技术领域：
：本发明属于生物防治领域的一种真菌微生物农药生产加工技术，特别是涉及具体的蜡阶轮枝菌杀虫杀菌微生物农药。
背景技术：
：蜡蚧轮枝菌从1861年发现直至上世纪50年代国外才开始深入研究，并推广应用，至今已有十几种商品实现了工业化生产，上市流通，用于防治黄瓜和西红柿的温室白粉虱效果显著。而我国自上世纪70年代才开始研究，有试验产品的小面积应用，但未见相关的大面积田间推广应用报道，至今仍无商品登记注册，主要原因是适合工业化生产的工艺技术和剂型开发相对滞后，从而影响了其进一步商品化。-蜡蚧轮枝菌是一种寄主范围和地理分布均十分广泛的昆虫病原真菌，主要用于防治同翅目害虫如蚜虫、粉虱等，还可防治直翅目、半翅目、鳞翅目、鞘翅目等害虫，也可用于防治螨类和一些植物病原菌。其最大优点为不污染环境，对人畜、环境和天敌安全，遗传稳定性强，易生产，防治范围广，可同时杀虫又抑菌，尤其对其它生物杀虫剂无能为力的刺吸式害虫防治效果最明显，并且可在防治对象中产生病原流行病而达到长期防治的效果，具有较高的开发价值和广阔的开发前景。但其防治害虫是以分生孢子或菌丝体在害虫体内繁殖而杀虫的，所以其应用时对环境因素尤其是温度、湿度要求较高，防治效果也易受紫外线影响，而且其一般制剂保存期太短，为了克服蜡蚧轮枝菌的上述缺点，充分发挥其优点，通过剂型加工和添加助剂是较为简单易行的措施。但是蜡蚧轮枝菌是活的生物体，它对外界环境(温度、湿度、光照等)较为敏感，其剂型加工比化学杀虫剂更为复杂，因此，新型环保剂型的开发研究就显得更为重要，它也是蜡蚧轮枝菌进一步商品化生产所必需的过程。目前，国内关于其剂型及其助剂研究依然处于探索阶段，相关研究主要是做成可湿性粉剂，但其容易造成粉尘污染，剂量可控性差，从而造成浪费以及对生产者和使用者的安全系数降低，而且现有技术生产的可湿性粉剂主要有效成分为其孢子、菌丝体和培养基的混合物，单位体积中有效成分含量太低，这些都间接地提高了农用成本，限制了其大规模推广应用。另外，在现有工艺技术条件下，其可湿性粉剂生产中主成分的干燥工艺是一个成本很高的生产环节，限制了其进一步大规模工业化生产。
发明内容本发明目的在于提供一种易于加工生产，成本较低，使用、贮运方便，保质期长，不污染环境，毒力强，杀虫又防菌的蜡蚧轮枝菌速释分散片。本发明的另一个目的在于提供蜡蚧轮枝菌速释分散片的制备方法。本发明蜡蚧轮枝菌速释分散片由重量百分含量为60%—85%的主药和15%一40%的助剂组成，主药为蜡蚧轮枝菌干孢子粉或者蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液，助剂包括表面活性剂、孢子保护剂、紫外保护剂、增效剂、崩解剂、填充剂、润湿剂和润滑剂。本发明蜡蚧轮枝菌速释分散片制备方法为所有固体助剂均预先过100目筛，液体助剂过滤去渣，称取重量百分含量为60%—85%的主药，在混合机中先后加入重量百分含量为1_5%表面活性剂、重量百分含量为0.l—O.2%孢子保护剂、重量百分含量为0.01-0.02%紫外保护剂、重量百分含量为0.2-1%增效剂、重量百分含量为3.33-10%崩解剂和重量百分含量为7.79—17.58%填充剂，充分搅拌混匀60分钟，再加入重量百分含量为0.4_0.6%润湿剂，继续搅拌混匀30分钟，制成均匀的湿材(捏之成团，压之即散为度)，过20目筛制成湿颗粒，20-22'C相对无菌的条件下干燥24-48小时，至干颗粒含水量为重量百分含量5-6%，再将重量百分含量为1.67-5%崩解剂加入干颗粒中，称颗粒总重量后，加入重量百分含量为颗粒总重量0.5-0.6%的润滑剂充分混匀30分钟，进入压片机用2-3吨的压力压成预想形状的片剂，即得成品；表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、吐温-80、司盘-80、司盘-60、甘油单酯、月桂酸一酯或十六烷基硫酸钠中的一种，孢子保护剂选自L一丝氨酸、海藻酸钠、脱脂牛奶、磷酸氢二钠粉末、抗坏血酸或糖蜜中的一种，5紫外保护剂选自荧光素钠、甲基绿、罗丹明B、七叶灵、叶酸或刚果红中的一种，增效剂选自几丁质酶、氯原酸、多酚氧化酶、巯基乙醇、尿素、蛋白质抑制剂或有机酸中的一种，蛋白质抑制剂选鱼藤酮，有机酸选对氨基苯甲酸)；崩解剂选自羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯垸酮、低取代羟丙基纤维素钠或干淀粉中的一种，或者选自交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯垸酮的混合物，交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮的比例为1:2;填充剂为微晶纤维素、预胶化淀粉、木糖醇、海藻酸钠或硫酸钙中的一种，或者选自粘土和蔗糖的混合物，或者选自麦芽糖和糊精混合物，粘土和蔗糖的比例为10:1，麦芽糖和糊精的比例为l:8;润滑剂选自硬脂酸镁、滑石粉或微粉硅胶中的一种；预胶化淀粉购于曲阜市天利药用辅料有限公司。主药选择蜡蚧轮枝菌干孢子粉，其制备过程是将土豆培养基中长满的蜡阶轮枝菌孢子用无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来，在无菌的条件下常温干燥7天，粉碎，过100目筛即得；润湿剂选自吐-80或吐温-60中的一种。主药选择蜡蚧轮枝菌浓缩发酵液，其制备过程是将蜡蚧轮枝菌液体发酵物以6000转/分的速度离心20分钟，倾出上清液，沉淀物用其1.5倍体积量的上清液分三次洗出，合并这三次的洗出液，即得。主药选择蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液时，其和润湿剂的加入方式是用孔径0.lcm的喷瓶以喷雾形式将蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液和润湿剂洒入混合机中，制成均匀的湿材，润湿剂为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液的离心上清液。菌株本发明所用菌种是中国微生物菌种保藏中心提供的，菌号为CGMCG3.4431、CGMCG3.4505，通过温室白粉虱和蚜虫若龄幼虫转接复壮，即将原菌种转接于人工饲养的温室白粉虱若龄幼虫上，仔细观察，将死亡的虫体接于PDA培养基上25。C恒温培养7-10天，挑选长满白毛的虫体破碎后用无菌水稀释，进行分离纯化，毒力筛选，从中获取寄主性和毒力均较高的菌株。本发明复壮得到3株蜡蚧轮枝菌，它们的寄主专性、杀虫毒力和遗传稳定性都很强，PDA培养基上26。C恒温培养17天，平均产孢量可达1.3X10"个孢子/g，液体摇瓶26"C恒温培养17天，平均产孢量可达3.6X10"个孢子/ml。本发明选择既能使片剂快速崩解又能保证蜡蚧轮枝菌孢子活性的适宜助剂，并控制主药和助剂的粒度大小，是保证该速释分散片质量的关键。本发明所获得的成品为蜡蚧轮枝菌速释分散片，其生产工艺简单，主药用蜡蚧轮枝菌干孢子粉或其浓縮发酵液，产品平均片重1.3g/片，主药平均含量1.64X10w个孢子/片。与普通片剂相比，其崩解速度快，在水中能迅速崩解，释放有效成份，使其均匀分散于水中形成混悬液，既可喷雾于各种作物表面，也可直接将速释分散片散播于水田中，使用极为方便。本产品的毒力强，持效期长，防治范围广，可同时杀虫又防菌，尤其对温室白粉虱和灰霉菌有特效，对人畜、坏境和天敌安全、剂量可控性强，无粉尘污染、贮运方便，保质期可达2年以上(与同类产品相比延长了许多)，常温密封避阴保存即可，如果4°。保存，保质期更长。对温室白粉虱的防治效果达98%以上，对灰霉菌的防效也可达85%以上，持效期延长至15天以上。具体实施例方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例1-5主药为蜡蚧轮枝菌干孢子粉主药选择蜡蚧轮枝菌干孢子粉，其制备过程是将土豆培养基中长满的蜡蚧轮枝菌孢子用无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来，在无菌的条件下常温干燥7天，粉碎，过IOO目筛即得。首先设计配方并确定要制备的产品总量，按表一所列配方量备料，所有固体助剂均预先过IOO目筛，称取主药，在混合机中先后加入表面活性剂、孢子保护剂、紫外保护剂、增效剂、2/3的崩解剂和填充剂，充分搅拌混匀60分钟，再加入润湿剂，继续搅拌混匀30分钟，制成均匀的湿材(捏之成团，压之即散为度)，过20目筛制成湿颗粒，20-22。C相对无菌的条件下干燥24-48小时，至干颗粒含水量为重量百分含量5-6%，再将剩余1/3的崩解剂加入干颗粒中，称颗粒总重量后，加入润滑剂充分混匀30分钟，进入压片机用2-3吨的压力压成预想形状的片剂，即得成品；表一、主药为蜡蚧轮枝菌干孢子粉的速释分散片配方量<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注释表中各分散片均预制备80千克，PPVP---交联聚乙烯吡咯烷酮，CCMC-Na-—交联羧甲基纤维素钠，CMC-Na-—羧甲基纤维素钠、PVP—-聚乙烯吡咯烷酮。实施例6-10:制备主药为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液。主药选择蜡阶轮枝菌浓縮发酵液，其制备过程是将蜡蚧轮枝菌液体发酵物以6000转/分的速度离心20分钟，倾出上清液，沉淀物用其1.5倍体积量的上清液分三次洗出，合并这三次的洗出液，即得。首先设计配方并确定要制备的产品总量，按表二所列配方量备料，所有固体助剂均预先过100目筛，液体助剂过滤去渣；在混合机中先后加入表面活性剂、孢子保护剂、紫外保护剂、增效剂、2/3的崩解剂和填充剂，充分搅拌混匀60分钟;用孔径0.lcm的喷瓶以喷雾形式将蜡阶轮枝菌浓缩发酵液和润湿剂洒入混合机中，制成均匀的湿材，润湿剂为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液的离心上清液。继续搅拌混匀30分钟，制成均匀的湿材(捏之成团，压之即散为度)，过20目筛制成湿颗粒，20-22'C相对无菌的条件下干燥24-48小时，至干颗粒含水量为重量百分含量5_6%，再将剩余1/3的崩解'剂加入干颗粒中，称颗粒总重量后，加入润滑剂充分混匀30分钟，进入压片机用2-3吨的压力压成预想形状的片剂，即得成品；表二、主药为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液的速释分散片配方量<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注释表中各分散片均预制备80千克，PPVP-—交联聚乙烯吡咯垸酮，CCMC-Na-—交联羧甲基纤维素钠，CMC-Na—-羧甲基纤维素钠、PVP-—聚乙烯吡咯烷酮。以上实施例中，实施例5和9制得产品崩解时限短，保质期长，防效好，与其它实施例产品相比较好，所以被下面的实施例采用。实施例ll:配方为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液(主药)68kg、润湿剂为主药的离心上清液重量百分含量为1%，填充剂为淀粉重量百分含量是13.5%、润滑剂是硬脂酸镁重量百分含量为0.5%，制备方法同实施例l，制得产品平均片重1.38g/片，主药平均含量0.33Xl(T个孢子/片。特性比较用转篮法测其崩解时限，温度控制在24-25°C，稀释平板法测其常温保存一、二年后的活菌数。按实施例9制备蜡蚧轮枝菌速释分散片，平均片重1.3g/片，主药平均含量1.64Xl(T个孢子/片。表三、蜡蚧轮枝菌速释分散片与普通片剂的主要特性比较<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结果表明本发明实施例9效果优于实施例11。蜡蚧轮枝菌速释分散片对温室白粉虱和灰霉病的田间防治效果及保质期内的防治效果试验。在栽培一品红的温室里，选取温室白粉虱和灰霉病危害严重的二年生且己经开花的一品红植株360株，平均分成12个长方形小区，六个为试验药品(LAJ分散片1和LAJ分散片2)小区，三个为病虫害阳性对照小区，三个为空白对照小区，四组小区之间加保护行，每个小区30株，每小区随机取10株，每株选三片(从植株上、中、下三个位置选取)虫数较多并且有灰霉菌病斑的叶片记录叶片面积、基础病斑面积和基础虫数并挂牌标记，然后，同时喷施实验药品、对照药品和清水，从叶片两面喷施，以叶片滴水为度。施药后的前两天遮阴、保湿，并于施药后第二、四、六、八天观察记录活虫数、病斑面积及其有无药害。保质期内的药效试验方法同上。试验结果见表四、表五。表四、蜡蚧轮枝菌速释分散片对温室白粉虱的田间防治效果药名稀释倍数校正防治效果(％)保质期内的校正防治效果(％)第3天第5天第7天第15天0.5年l.O年2.0年LAJ分散片1100ml水/片80.2398.6696.6790.8590.0586.70'78.54LAJ分散片2100ml水/片79.3198.0096.8892.5091.3084.8380.59阿.啶虫眯200086.6889.8081.6964.3085.5685.7380.70注:该实验所用药片规格为平均片重1.3g/片，有效成分平均含量1.64X1(T个孢子/片；保质期内防效用当时施药五天后的校正防治效果说明；LAJ分散片1代表按实施例9制备的蜡阶轮枝菌速释分散片，LAJ分散片2代表按实施例5制备的蜡阶轮枝菌速释分散片。表五、蜡蚧轮枝菌速释分散片对灰霉病的田间防治效果药名稀释倍数相对防治效果％'保质期内的相对防治效果％0.5年■l.O年2.0年LAJ分散片1100ml水/片85.1183.5680.6660.3LAJ分散片2100ml水/片84.3383.9681.2068.70.嘧霉胺100096.3390.8191.6690.77注:该实验所用药片规格为平均片重1.3g/片，有效成分平均含量1.64X10"个孢子/片；病情调査在施药后第九天进行；保质期内防效用当时施药九天后的防治效果说明；LAJ分散片1代表按实施例9制备的蜡蚧轮枝菌速释分散片，LAJ分散片2代表按实施例5制备的蜡蚧轮枝菌速释分散片。从表四和表五实验结果看，蜡蚧轮枝菌速释分散片可同时防治一品红上的温室白粉虱和灰霉病，对温室白粉虱的防治效果可达98%以上，且持效期长，比其阳性对照效果好。对灰霉病的防治效果虽然没有相应的阳性对照强势，但其相对防治效果也可达85%以上。在保存两年后，对防治对象仍有较好的防效。本发明生物药效果好，无毒性，完全可以替代有毒性的化学药阿.啶虫眯或嘧霉胺。本发明制备的蜡蚧轮枝菌速释分散片，一般为20片用20-30升水溶解，进行作物表面喷雾或直接撒入水田里，用于粮食、蔬菜、花卉、水果及林业上数百种害虫和多种病害的防治，尤其适用于设施农业内常见又难治的温室白粉虱、各种蚜虫等刺吸式害虫和灰霉病、白粉病等的防治。权利要求1、一种蜡蚧轮枝菌速释分散片的制备方法，其特征在于它包括下列步骤由重量百分含量为60％-85％的主药和15％-40％的助剂组成，主药为蜡蚧轮枝菌干孢子粉或者蜡蚧轮枝菌浓缩发酵液，助剂包括表面活性剂、孢子保护剂、紫外保护剂、增效剂、崩解剂、填充剂、润湿剂和润滑剂；所有固体助剂均预先过100目筛，称取重量百分含量为60％-85％的主药，在混合机中先后加入重量百分含量为1-5％表面活性剂、重量百分含量为0.1-0.2％孢子保护剂、重量百分含量为0.01-0.02％紫外保护剂、重量百分含量为0.2-1％增效剂、重量百分含量为3.33-10％崩解剂和重量百分含量为7.79-17.58％填充剂，充分搅拌混匀60分钟，再加入重量百分含量为0.4-0.6％润湿剂，继续搅拌混匀30分钟，制成均匀的湿材，过20目筛制成湿颗粒，20-22℃相对无菌的条件下干燥24-48小时，至于颗粒含水量为重量百分含量5-6％，再将重量百分含量为1.67-5％崩解剂加入干颗粒中，称颗粒总重量后，加入重量百分含量为颗粒总重量0.5-0.6％的润滑剂充分混匀30分钟，进入压片机用2-3吨的压力压成预想形状的片剂，即得成品；表面活性剂选自十二烷基硫酸钠、吐温-80、司盘-80、司盘-60、甘油单酯、月桂酸一酯或十六烷基硫酸钠中的一种，孢子保护剂选自L-丝氨酸、海藻酸钠、脱脂牛奶、磷酸氢二钠粉末、抗坏血酸或糖蜜中的一种，紫外保护剂选自荧光素钠、甲基绿、罗丹明B、七叶灵、叶酸或刚果红中的一种，增效剂选自几丁质酶、氯原酸、多酚氧化酶、巯基乙醇、尿素、蛋白质抑制剂或有机酸中的一种，蛋白质抑制剂选鱼藤酮，有机酸选对氨基苯甲酸；崩解剂选自羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙基纤维素钠或干淀粉中的一种，或者选自交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮的混合物，交联羧甲基纤维素钠和交联聚乙烯吡咯烷酮的比例为1∶2；填充剂为微晶纤维素、预胶化淀粉、木糖醇、海藻酸钠或硫酸钙中的一种，或者选自粘土和蔗糖的混合物，或者选自麦芽糖和糊精混合物，粘土和蔗糖的比例为10∶1，麦芽糖和糊精的比例为1∶8；润滑剂选自硬脂酸镁、滑石粉或微粉硅胶中的一种。2、根据权利要求1所述的蜡蚧轮枝菌速释分散片的制备方法，其特征在于主药为蜡蚧轮枝菌干孢子粉，制备过程是将土豆培养基中长满的蜡蚧轮枝菌孢子用无菌高岭土洗脱，并连同菌苔剥离下来，在无菌的条件下常温干燥7天，粉碎，过100目筛即得；润湿剂选自吐-80或吐温-60中的一种。3、根据权利要求1所述的蜡蚧轮枝菌速释分散片的制备方法，其特征在于主药为蜡蚧轮枝菌浓縮发酵液，制备过程是将蜡蚧轮枝菌液体发酵物以6000转/分的速度离心20分钟，倾出上清液，沉淀物用其1.5倍体积量的上清液分三次洗出，合并这三次的洗出液，即得；蜡蚧轮枝菌浓缩发酵液和润湿剂的加入方式是用孔径0.lcm的喷瓶以喷雾形式将蜡蚧轮枝菌浓缩发酵液和润湿剂洒入混合机中，制成均匀的湿材，润湿剂为蜡阶轮枝菌浓縮发酵液的离心上清液。4、根据权利要求2或3所述制备方法制得的蜡蚧轮枝菌速释分散片。全文摘要本发明公开了一种蜡蚧轮枝菌速释分散片及其制备方法，以蜡蚧轮枝菌浓缩发酵液或其干孢子粉为主要有效成分，还添加增效剂、表面活性剂、保护剂、崩解剂、润湿剂、填充剂和润滑剂。其制备方法为先将2/3崩解剂及其它助剂与蜡蚧轮枝菌按一定比例量加入混合机中混合均匀，再加入适量润湿剂拌成湿材，过20目筛制成湿颗粒，在相对无菌的条件下常温干燥24-48小时后，将剩余的1/3崩解剂加入干颗粒并称重，加入占颗粒重0.5-0.6％的润滑剂充分混合均匀后，进入压片机用适当压力压成大片，即得成品。该产品生产工艺简单、原料来源广泛，易于工业化生产，其在水中能迅速崩解释放有效成份，起效速度快、无粉尘污染，防治范围广，可同时杀虫又抑菌。文档编号A01N63/04GK101658186SQ20091011746公开日2010年3月3日申请日期2009年9月16日优先权日2009年9月16日发明者刘锦霞,张建军,娜李,晶李,杜文静,杨兰廷,武建荣,沈思远,韩融冰申请人:甘肃省科学院生物研究所