专利名称：一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂的开发，属于生物制品技术领 域，是由地衣芽孢杆菌及植物纤维酶解产物--低聚木糖配伍而成的，可作为添加剂用于水 产饲料中。
背景技术：
抗生素类等药物添加剂能够有效地刺激动物生长、提高饵料利用率、降低死亡率 等作用，已广泛用于水产养殖饵料添加剂中。但由于缺乏相关的药效学、药动学、毒理学方 面等的研究，滥用抗生素的现象十分普遍，导致出现“耐药性”、“抗药性”现象，导致鱼体内 菌群失调，破坏机体微生物平衡，抵制或杀死敏感细菌，引起菌群紊乱，使机体易发感染性 疾病。此外，用药以后，药物可以多种形式随粪、尿等排泄物进入养殖水体，从而对水体大量 的水生生物产生毒副作用。因此，从天然物质中寻找理想的无毒、无残留、高效、在提高动物 免疫力、提高水产品质量、降低环境污染等方面发挥了很大作用的多功能绿色饲料添加剂 正日益受到关注并已应用于养殖生产。目前，已研发的渔用饲料添加剂品种很多，如活菌 制剂(生物益生素)、寡糖(化学益生素)、酸化剂、酶制剂、活性肽、益生脂、氨基酸等，这些 添加剂及活性物质在动物体内具有抗菌、免疫、促生长、助消化、降低污染作用，同时又没有 药物残留，有的还可作为抗生素替代品在畜禽养殖中应用已很广泛，并在生产上都表现出 很好应用的效果。本项发明——新型渔用微生态复合促生长饲料添加剂是由地衣芽孢杆菌，植物纤 维酶解产物一低聚木糖配伍而成。芽孢杆菌属革兰氏染色阳性，是一类好气性细菌。地衣 芽孢杆菌所形成的芽孢不仅具有很强的抗逆性，能耐受水产饲料加工过程的高温高压，而 且还具有在动物肠道中易繁殖及生长快等特点。该菌株在生长繁殖过程中具有很强的分泌 蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的能力，能补充动物本身消化酶分泌不足，促进动物对饲料营养物 质的消化吸收，从而促进生长。地衣芽孢杆菌能够同其他菌体竞争营养或粘附位点，产生抑 菌物质，抑制病原菌的生长，降低病原菌的数量，对鱼虾肠道菌群的影响与抗生素具有相近 的效果。地衣芽孢杆菌还可提高水产动物机体免疫力，提高鱼虾血细胞的数量、酚氧化酶 和超氧化物歧化酶的活性。此外已有研究表明芽孢杆菌饲料添加剂还能够降解和转化水体 中有机物，分解残留饵料、动植物残体，减少或消除水体中氨氮、硫化氢、亚硝酸盐等有害物 质，改善水质。地衣芽孢杆菌作为水产动物益生菌，在肠道内具有较好的定植能力，而且无 明显的宿主特异性。低聚木糖是在畜牧生产中使用较多的寡糖类添加剂，在动物肠道中不仅能抑制有 害菌在肠上皮的定植生长，而且能为有益菌的生长繁殖提供作用底物，提高益生菌作用的 稳定性。与其他功能性寡糖相比，低聚木糖具有独特的优点1)基本不被动物体消化分解， 可全部到达大肠，供双歧杆菌利用。2)对双歧杆菌有高选择性增殖效果。3)极高的酸稳定 性。4)与食物的配伍性好，能促进钙的吸收。本实验室已就饲料中添加不同水平梯度的低 聚木糖进行了相关的研究。结果表明添加低聚木糖能够提高异育银鲫的生长性能和肠道消
3化酶活性，其中以0. 01%的添加比例增重效果较好，若添加过量，生长和蛋白酶活性出现下 降趋势。可能是当低聚木糖浓度过高时，抑制了肠道有益菌的活性，造成消化酶(特别是肠 道蛋白酶)活性降低，而蛋白酶是鱼类的主要消化酶，所以鱼体从肠道所能吸收的营养物 质减少，生长速度相应减慢。本项发明将地衣芽孢杆菌及低聚木糖复配，保证了鱼虾肠道菌群的效性，有助于 维持肠道内的微生态平衡，能够促进营养物质的消化吸收和鱼的生长。技术问题本发明的目的是提供“一种新型渔用微生态复合促生长饲料添加剂”，克服当前抗 生素、促生长剂类等药物添加剂在水产饲料中的滥用，尤其对提高水产动物对饲料营养成 分的消化吸收率、促进水产动物生长及改善养殖水体水质提供了一种工艺简便、成本低廉、 绿色环保型生物产品，可用于大规模工业化生产，为水产饲料提供一种新型促生长饲料添 加剂。技术方案一种新型渔用微生态复合促生长饲料添加剂，要由由含菌量2 X IOki个/g的地衣 芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)菌剂和低聚木糖(Xylo-oligosaccharides)按质量比 1 1比例配伍而成。其组成为含菌量2X101(I个/g的地衣芽孢杆菌菌剂10%，低聚木糖 10%，沸石粉50%，棒土 20%，玉米粉10%。该添加剂以质量比0. 的添加量添加在虾或 鱼用饲料中。复配工艺是将地衣芽孢杆菌和低聚木糖先加到沸石粉中混合，再加棒土、玉米 粉充分混合，然后置于干燥、低温处贮存备用。有益效果本项发明由地衣芽孢杆菌及低聚木糖以1 1配伍而成的新型渔用微生态复合促 生长饲料添加剂。(1)维持动物肠道菌群的平衡，抑制肠道致病菌；可促进肠道中双歧杆菌、乳酸菌 的生长，同时，双歧杆菌、乳酸菌等也能增强机体免疫力。(2)芽孢杆菌可产生多种酶类，如蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等，且一些酶是动物体 本身不具有的酶，可有效提高水生动物的饲料利用率。(3)低聚糖有利于芽孢杆菌在鱼虾消化道中尽快的萌发、繁殖，形成优势菌群，进 而提高对饲料的利用效率，促进其对营养物质的消化吸收，改善鱼、虾的肠道微生态，促进 健康生长。(4)不产生任何内外毒素，使用安全，无毒副作用，无药物残留，无污染，是一种具 有很高生态环境保护价值的新方法。
图1地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对异育银鲫肠道菌群数量的影响(lgCFUg—1)
具体实施例方式1地衣芽孢杆菌在异育银鲫饲料中适宜添加量的研究所选用地衣芽孢杆菌制剂(购自美国雅来大药厂)，含菌量为2 X IOki个地衣芽孢 杆菌/g。在异育银鲫基础日粮中分别添加0、100、200、300和400mg · kg—1地衣芽孢杆菌。各组饲料逐级混和均勻，再加水拌勻，用小型绞肉机制成颗粒，自然晾干后放入-20°C冰箱 中储藏备用。异育银鲫驯化15d后投喂试验日粮，以鱼体重的2% 4%投喂。待投喂试验 日粮30d时，测定鱼体生长性能、肠道及肝脏组织消化酶活性和肠道食糜酶活性。根据以上 指标综合评定地衣芽孢杆菌适宜添加量。结果表明，在异育银鲫日粮中添加地衣芽孢杆菌 可促进了鱼体生长和消化酶活性，对异育银鲫的最适添加量为200-300mg · kg—1。见表1和 2。表1.地衣芽孢杆菌对异育银鲫增重率与饵料系数的影响 注同一列小写字母不同者差异显著(P < 0. 05)，同一列小写字母相同者差异不 显著(P > 0.0)，下同表2.地衣芽孢杆菌对异育银鲫消化酶活性影响(Ug—1) 2低聚木糖在异育银鲫饲料中适宜添加量的研究所选用低聚木糖由江苏康维生物有限公司提供，含低聚木糖35%。在异育银鲫基 础日粮中分别添加0、50、100和200mg · kg—1低聚木糖。各组饲料逐级混和均勻，再加水拌 勻，用小型绞肉机制成颗粒，自然晾干后放入-20°C冰箱中储藏备用。异育银鲫驯化15d后 投喂试验日粮，以鱼体重的2% 4%投喂。待投喂试验日粮30d时，测定鱼体生长性能及 肠道食糜酶活性。根据以上指标综合评定低聚木糖适宜添加量。结果表明，在异育银鲫日 粮中添加低聚木糖能够提高异育银鲫的生长和肠道食糜消化酶活性，其中对异育银鲫的最 适添加量IOOmg · kg-1。见表3、4。表3.低聚木糖对异育银鲫增重率与饵料系数的影响
注同一列小写字母不同者差异显著(P < 0. 05)，同一列小写字母相同者差异不 显著(P > 0.0)，下同表4.低聚木糖对异育银鲫消化酶活性影响(Ug—1)
3地衣芽孢杆菌及低聚木糖复配及协同效应的研究3. 1地衣芽孢杆菌及低聚木糖复配对异育银鲫生长性能的影响选用异育银鲫为试验对象，试验分为三组，分别为对照组I，投喂基础日粮，试验 组II为基础日粮中添加200mg -kg-1地衣芽孢杆菌，试验组III为基础日粮中添加IOOmg -kg"1 地衣芽孢杆菌和IOOmg · kg"1低聚木糖，待投喂试验日粮30d时，通过测定生长性能及肠 道中菌群数量来验证该饲料添加剂的促生长作用。结果表明，在异育银鲫饲料中分别添加 IOOmg · kg—1地衣芽孢杆菌和低聚木糖可显著提高鱼虾的生长性能及肠道菌群数量。见表 5、6及图1。表5地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对异育银鲫增重率的影响
表6地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对异育银鲫组织消化酶活性的影响(Ug—1) 3. 2地衣芽孢杆菌及低聚木糖复配对黄颡鱼生长性能的影响选用黄颡鱼为试验对象，试验分为三组，分别为对照组I，投喂基础日粮，试验组 II为基础日粮中添加IOg · kg—1中草药，试验组III为基础日粮中添加IOOmg · kg—1地衣芽孢 杆菌和IOOmg -kg"1低聚木糖，待投喂试验日粮60d时，通过测定生长性能，组织中消化酶活 性来验证该饲料添加剂的促生长作用。结果表明，在黄颡鱼饲料中分别添加IOOmg Ag4地 衣芽孢杆菌及低聚木糖可显著提高鱼虾的生长性能、组织消化酶活性。见表8和9。
表8地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对黄颡鱼生产性能的影响 表9地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对黄颡鱼胃组织消化酶活性的影响
「00441- 3. 3地衣芽孢杆菌及低聚木糖复配对日本沼虾生长性能和肠道消化酶活性的影响选用黄颡鱼为试验对象，试验分为四组，分别为对照组I，投喂基础日粮，试验组 II为基础日粮中添加15g · kg-1中草药，试验组III为基础日粮中添加600mg · kg-1复合酶， 试验IV为基础日粮中添加IOOmg · kg—1地衣芽孢杆菌和IOOmg · kg—1低聚木糖，待投喂试验 日粮40d时，通过测定生长性能及组织消化酶活性验证该饲料添加剂的促生长作用。结果 表明，增重率高低顺序依次为合生素组>复合酶组>中草药组>基础日粮组。在日本沼虾 基础日粮种添加0. 该复合制剂可显著提高日本沼虾的生长性能和胃和肝胰脏消化酶活 性，见表10和11。表10地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对日本沼虾生产性能的影响 表11地衣芽孢杆菌与低聚木糖复配对日本沼虾胃、肝胰脏组织消化酶活性的影 响 4微生态复合促生长剂对网箱养殖鲤鱼生长性能的影响微生态复合促生长剂配方和制备过程将所用棒土、沸石粉和玉米粉等原料粉碎， 过60目筛后充分混合。在把地衣芽孢杆菌和低聚木糖添加上述混合物中，所用地衣芽孢杆 菌和低聚木糖同上，并充分混合，然后包装，置于阴凉干燥处保存备用。复合制剂配方见附 件1。室外网箱养殖鲤鱼投喂基础饲料及含有0. 该微生态复合饲料添加剂的饲料， 待投喂试验日粮30d时，通过测定生长性能验证该饲料添加剂的促生长作用。结果表明，地 衣芽孢杆菌及低聚木糖以1 1的比列复配，在鲤鱼基础日粮中添加0.1%该复合制剂可显 著提高鱼虾的生长性能、减低饵料系数。见表12。由此可见，使用复合微生态添加剂鲤鱼的 增重率比不用的提高10%左右，而饵料系数降低10左右。表12微生态复合促生长剂对网箱养殖鲤鱼生产性能的影响 根据以上试验结果总结微生态复合添加剂配方 本研究微生态复合促生长剂可替代抗生素添加在渔用饲料中，每吨饲料的添加成 本为25元左右。在生产上完全可行，添加本产品的饲料不需额外添加其它促生长剂或药 物，所以不增加饲料成本，并且它的使用无药物残留，可改善水质，提高水产品品质，增加水 产品价格，在鱼虾生病时可减少用药量和用药成本，为饲料生产者和养殖户提高经济效益， 该产品的应用还能够降低水体污染，保护水体环境，有利于渔业可持续发展，产生较大的社 会效益。研究成果已在江苏、安徽、山东、上海等地区的饲料企业中应用与推广，取得了较大 的经济效益、社会效益和环境效益。
权利要求
一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂，主要由含菌量2×1010个/g的衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)菌剂和低聚木糖以质量比1∶1配伍，再复配以载体。
2.根据权利要求1所述一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂，其质量比组成为含菌 量2 X IO10个/g的地衣芽孢杆菌菌剂10 %，低聚木糖10 %，沸石粉50 %，棒土 20 %，玉米粉 10%。
3.权利要求1或2所述一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂的应用，其特征是，该添 加剂以质量比0. 的添加量添加在虾或鱼用饲料中。
4.权利要求1或2所述饲料添加剂的复配工艺，其特征是，把地衣芽孢杆菌和低聚木糖 先加到沸石粉中混合，再加棒土、玉米粉充分混合，置于干燥、低温处贮存备用。
全文摘要
本发明涉及一种渔用微生态复合促生长饲料添加剂，属于生物制品技术领域，由地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)和低聚木糖(Xylo-oligosaccharides)1∶1配伍再复配以特定载体，以0.1％的添加量添加在鱼用饲料和虾饲料中。该产品成本低廉、绿色环保，克服了当前抗生素等药物添加剂的滥用、抗药性等问题，可用于大规模工业化生产，为水产饲料提供一种新型促生长饲料添加剂。
文档编号A23K1/16GK101878858SQ20101020707
公开日2010年11月10日 申请日期2010年6月23日 优先权日2010年6月23日
发明者刘文斌, 徐维娜, 方星星, 谢国驷, 郭文汉 申请人:南京农业大学