专利名称：病毒灭活剂的制作方法
病毒灭活剂
技术领域：
本发明涉及病毒灭活剂，特别是涉及对诺罗病毒及A型流感病毒有灭活效果的病毒灭活剂。
背景技术：
一直以来，以醇作为主剂的组合物作为除菌剂广泛使用，再者，作为对诺罗病毒有灭活效果的组合物，公开有例如，向酿造用醇配合葡萄水果种子提取液和植酸的组合物(专利文献I)、向乙醇配合碱性物质和表面活性剂的组合物(专利文献2)、及向乙醇配合有机酸盐和桉树提取物的组合物(专利文献3)等。另一方面，近年公开、在贝壳煅烧钙、氧化钙及作为其水和物的氢氧化钙中有抗菌性(专利文献4)、公开了向此贝壳煅烧钙配合有机酸盐的食品的制菌剂(专利文献5)、向煅烧钙配合多元醇脂肪酸酯及乙醇的食品用除菌剂(专利文献6)等。但是，贝壳煅烧钙等的对诺罗病毒的灭活效果尚不明。现有技术文献专利文献专利文献I:特开2007-320924号公报专利文献2:特开2008-189645号公报专利文献3:特开2009-179577号公报专利文献4:特开平11-222796号公报专利文献5:特开平11-290044特号公报专利文献6:特开2002-272434号公报
发明内容发明要解决的技术课题本发明鉴于上述事实，以提供煅烧钙等的明显有病毒灭活效果，特别是有诺罗病毒灭活效果的新颖的病毒灭活剂作为课题。解决课题的技术方案本发明人为了解决上述课题而重复锐意研究的结果，发现配合氢氧化钙的水溶液或水分散体不仅有诺罗病毒灭活效果，再者也有A型流感病毒灭活效果，从而完成本发明。S卩，本发明的要旨如下。〔I〕诺罗病毒灭活剂，其特征在于，其是配合氢氧化钙而成的水溶液或水分散体；〔2〕A型流感病毒灭活剂，其特征在于，其是配合氢氧化I丐而成的水溶液或水分散体；〔3〕上述〔I〕或〔2〕所述的病毒灭活剂，其为代替氢氧化钙，或者与该氢氧化钙一同，配合氧化钙和/或煅烧钙而成；〔4〕上述〔I〕 〔3〕之任一项所述的病毒灭活剂，其是再配合乙醇及乳酸钠而成；〔5〕上述〔4〕所述的病毒灭活剂，其中氢氧化钙、氧化钙及煅烧钙之中，配合的成分的合计的配合比例是O. 01 30重量％、乙醇的配合比例是5 30重量％、乳酸钠的配合比例是I 30重量％ ；〔6〕上述〔I〕 〔5〕之任一项所述的病毒灭活剂，其中所述氢氧化钙、氧化钙及煅烧钙的平均粒径均为O. I 10 μ m ;〔7〕食品，其用上述〔I〕 〔6〕之任一项所述的病毒灭活剂进行病毒灭活处理而得到；〔8〕上述〔7〕所述的食品，其中所述食品是鲜鱼贝类。发明效果通过本发明，提供有诺罗病毒灭活效果和A型流感病毒灭活效果的病毒灭活剂。
图I是PCR产物的电泳图。图2是PCR产物的电泳图。图3是示对被金黄色葡萄球菌污染的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。图4是示对被沙门氏菌污染的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。图5是示对被0-157污染的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。图6是示对被副溶血性弧菌污染的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。图7是示对被大肠杆菌污染的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。图8是示对浸溃到人工海水的生牡蛎进行除菌处理之时的，生牡蛎的活菌数的经时变化的图。实施方式本发明的病毒灭活剂是将氢氧化钙配合到水而得到的水溶液或水分散体，有诺罗病毒灭活效果、A型流感病毒灭活效果及猫杯状病毒灭活效果，再者对一般食中毒菌有除菌效果。作为本发明的配合成分，也可代替氢氧化钙，或者与氢氧化钙一同，使用例如，使氧化钙或煅烧钙等的与水反应而生成氢氧化钙的成分的I种以上。以下，在本说明书，氢氧化钙、及氧化钙、煅烧钙等的与水反应而生成氢氧化钙的成分总称为“病毒灭活成分”。上述病毒灭活成分之中，煅烧钙是将牡蛎壳、扇贝壳、北极贝壳、卵壳或珊瑚壳等、 煅烧前的成分是碳酸钙的动物性来源的钙在600°C以上、优选在900 1200°C的温度煅烧或通电加热15 60分钟左右而得到，主成分是氧化钙。得到的煅烧钙的饱和水溶液的pH 优选在11 13的范围。煅烧钙通常使用适合于食品添加物规格的。病毒灭活成分的平均粒径不特别限定，通常是O. I ΙΟμπι。另外，病毒灭活剂中的病毒灭活成分的配合比例不特别限定，通常是O. 01 30重量％。在本发明中，为了提高病毒灭活效果或对食中毒菌的除菌效果，作为病毒灭活成分以外的其他配合成分，可配合例如，乙醇或有机酸盐。乙醇优选适合于常规食品添加物规格。病毒灭活剂中的乙醇的配合比例不特别限定，通常以5 30重量％的范围配合。
有机酸盐而言，可举出例如，柠檬酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、草酸盐、醋酸盐、蚁酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、葡萄糖酸盐等，这些可单独或适宜组合2种以上而使用。 盐而言，可举出碱金属盐等。在这些之中，也优选乳酸盐，更优选乳酸钠。病毒灭活剂中的有机酸盐的配合比例不特别限定，通常以I 30重量％的范围配合。在本发明的病毒灭活剂中，除了上述的成分之外，在不妨碍本发明的效果的范围内，可适量含有可配合到除菌剂的公知的成分。这样的成分而言，可举出防腐剂、氧化防止剂、表面活性剂、染料、香料、染料等。本发明的病毒灭活剂的pH从病毒灭活效果或对食中毒菌的除菌效果的观点来看，优选11 14,更优选11 13。本发明的病毒灭活剂，特别是诺罗病毒灭活效果和A型流感病毒灭活效果显著， 再者对一般食中毒菌除菌效果也优良。在本发明中，根据上述的配合成分的浓度，可作为各成分基本上溶解于水的水溶液型，或者作为各成分之中一部分溶解于水，一部分分散于水中的水分散型而使用。本发明的病毒灭活剂在使用时不用水稀释而直接使用也可，但在使用水分散型时，优选用水稀释而使用。在直接使用水溶液型或水分散型时，或者将这些用水稀释而使用时等、采用任何的使用方法时，病毒灭活剂中的病毒灭活成分的配合比例在实际的使用浓度均优选O. 01 5重量％。使用水溶液型时填充到喷雾容器等中，可在例如，食品工场、饮食店的厨房或家庭的厨房等，向作业者的手、腕等的皮肤、菜刀、锅等的烹调器具、皿、容器等的餐具、鲜鱼贝类、蔬菜、肉类等的生鲜食品、加工食品等、有上述病毒的附着的担忧的部分喷雾而使用。另外，使用水分散型时，使用时可用水稀释，在上述例示的适用对象物之中，将可携带病毒的浸溃而使用。
实施例以下，根据试验例等更详细地说明本发明，但本发明不以任何方式受这些的限定。I.对猫杯状病毒的灭活效果的验证A.试验概要配合氢氧化钙、乙醇、乳酸钠，将余部作为水将下述配方的水分散体(本发明品)作为待测样品，在(财)日本食品分析中心，对于对猫杯状病毒的本发明品的灭活效果实施验证试验。即，由于诺罗病毒自体不被稳定的培养，在本试验中，从形态的特征或基因组的结构，将作为诺罗病毒的近亲的猫杯状病毒作为代替病毒使用。试验的详细如下。B.试验方法〔I〕待测样品水分散体(本发明品)
氢氧化钙12. 8重量％乙醇19. 7重量％乳酸钠9. 9重量％水57. 6重量％
〔2〕试验病毒
猫杯状病毒F-9ATCC VR-782 (猫杯状病毒)
〔3〕使用细胞
CRFK细胞(大日本制药公司)
〔4〕使用培养基
细胞增殖培养基
(I)向Eagle MEM培养基“二 ^ 4 ”(I)(日水制药公司)加10%胎牛血清。
(2)细胞维持培养基
向Eagle MEM培养基“二 ^ (I)(日水制药公司)加2%胎牛血清。
〔5〕病毒悬浮液的制备
(I)细胞的培养
使用细胞增殖培养基，将使用细胞在组织培养用瓶内单层培养。
(2)病毒的接种
单层培养后，从瓶内除去细胞增殖培养基，接种试验病毒。接下来，加细胞维持培养基而在37°C的碳酸气体温育器(CO2浓度5%)内培养I 5天。
(3)病毒悬浮液的制备
培养后，使用倒置相差显微镜观察细胞的形态，确认细胞发生形态变化(细胞变性效果)。接下来，将培养液离心分离(3，000r/min，10分钟)，将得到的上清液作为病毒悬浮液。
〔6〕试验操作
使用纯化水而制备待测样品的2%悬浮液而作为试验液。向试验液Iml添加病毒悬浮液O. 1ml、混合之后，以80 90r/min振荡着室温保存,6及24小时后,将试验液使用细胞维持培养基稀释100倍。
再有，以纯化水作为对照的试验液同样地进行试验。但是，在开始时就进行测定。
〔7〕病毒感染价的测定
使用细胞增殖培养基，将使用的细胞在组织培养用微板(96孔)内进行单层培养之
后，除去细胞增殖培养基而加各O. Iml细胞维持培养基。接下来，将试验液的稀释液O. Iml 接种到各4孔，在37°C的碳酸气体温育器(CO2浓度5%)内培养4 7天。培养后，使用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化(细胞变性效果)的有无，根据Reed-Muench法算出50% 组织培养感染量(TCID5tl)而换算成每试验液Iml的病毒感染价。结果显示于表I。表I
试验病毒对象Ioh TCIDsc/ml**开始时6小时后24小时后猫杯状病毒#_#品8.5<2.5<2.5I8,58.27.8
TCID50 :半数组织培养感染剂量，50%组织培养感染量* I :每试验液Iml的TCID5tl的对数值开始时测定作用开始后立即的对照的TCID5tl，作为开始时。对照纯化水作用条件室温、振动保存〈2. 5:检测不到从表I知，本发明品在6小时以内完全地灭活3. I X IO8TCID5cZml的猫杯状病毒。2.对诺罗病毒的灭活效果的验证(I)配合氢氧化钙、乙醇、乳酸钠，将余部作为水将下述配方的水溶液(本发明品) 作为待测样品，在1^ ^ 3*株式会社食品检查中心，对于本发明品的对诺罗病毒的灭活效果实施验证试验。〈待测样品水溶液(本发明品)>
权利要求
1.诺罗病毒灭活剂，其特征在于，其是配合氢氧化钙而成的水溶液或水分散体。
2.A型流感病毒灭活剂，其特征在于，其是配合氢氧化钙而成的水溶液或水分散体。
3.权利要求I或2所述的病毒灭活剂，其为代替氢氧化钙，或者与该氢氧化钙一同，配合氧化钙和/或煅烧钙而成。
4.权利要求I 3之任一项所述的病毒灭活剂，其是再配合乙醇及乳酸钠而成。
5.权利要求4所述的病毒灭活剂，其中在氢氧化钙、氧化钙及煅烧钙之中，配合的成分的合计的配合比例是O. 01 30重量％、 乙醇的配合比例是5 30重量％、乳酸钠的配合比例是I 30重量％。
6.权利要求I 5之任一项所述的病毒灭活剂，其中氢氧化钙、氧化钙及煅烧钙的平均粒径均为O. I 10 μ m。
7.食品，其用权利要求I 6之任一项所述的病毒灭活剂进行病毒灭活处理而得到。
8.权利要求7所述的食品，其中所述食品是鲜鱼贝类。
全文摘要
本发明提供煅烧钙等的明显有病毒灭活效果，特别是有诺罗病毒灭活效果的新颖的病毒灭活剂。包括将氢氧化钙、氧化钙及煅烧钙之中1种以上配合到水中而得到的水溶液或水分散体。上述成分之外、可配合乙醇和有机酸盐。
文档编号A01N31/02GK102612320SQ20108005078
公开日2012年7月25日 申请日期2010年11月9日 优先权日2009年11月10日
发明者小谷博秀, 山下泰治, 川上大雄 申请人:株式会社川上