专利名称：一株饲用屎肠球菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物菌株，特别是涉及一株屎肠球菌菌株及其冻干菌剂与其在制备饲料及饲料添加剂中的应用。
背景技术：
屎肠球菌(Enterococcus faecium)属肠球菌属，是人及动物肠道中正常菌群的一部分。屎肠球菌对动物肠粘膜的粘附力很强，可在动物肠粘膜上形成一层保护性生理屏障， 阻止致病菌的定植入侵。屎肠球菌还能产生维生素、氨基酸、促生长因子、乳酸乙酸等动物生长所需的营养物质；同时能产生乳糖菌素、伊短菌素、嗜酸菌素及杆菌肽等抑制致病菌生长繁殖的物质。屎肠球菌作为一种饲用益生菌，可应用到动物的营养补充中，并可作为一种抗生素替代品使用。冻干菌剂是由真空冷冻干燥法制成的，即将已加入保护剂的菌液预先冷冻，然后在真空条件下使其中的冰晶升华，待冰晶升华后再除去其中的部分吸附水，最终得到残水量为-4%的干制品。冷冻干燥后的微生物细胞基本没有受到破坏，活菌存活期也较长， 具有理想的速溶性和速复水性。屎肠球菌是我国农业部公布的可在饲料中添加的一种微生物。专利文献 CN101629155A,CN 1831114A.CN 1314466A.CN 101492650A、CN 1314091A、CN1016683122A、 CN 101701202A分别公开了一株屎肠球菌，但都未涉及冻干菌剂的研究；专利文献CN 101955900A中公开了一种屎肠球菌的低水分固态培养与干燥方法，但是该方法为固态发酵工艺，生产操作机械化程度低，发酵过程不易控制。
发明内容
本发明的目的是提供一株对致病菌具有抑制作用的可用于制备饲料和饲料添加剂的屎肠球菌。本发明所提供的屎肠球菌菌株(Enterococcus faecium)的名称为LAB12，该菌株已于2011年05月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为 CGMCC No. 4847。屎肠球菌(Enterococcusfaecium) LAB12 CGMCC No. 4847 是革兰氏阳性球菌， 无芽孢；在MRS琼脂平板上生长良好，4 形成直径0. 5-lmm大小圆形菌落，菌落圆整、 光滑、隆起，呈灰白色露滴样；兼性厌氧生长，生长温度范围10°C _45°C，最适生长温度 300C -400C ；生长酸碱度范围pH 4-10，最适pH值为6. 0 ；部分生化特性如表1所示表1 屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB 12CGMCC No. 4847 的部分生化特性
权利要求
1.屎肠球菌(Enterococcusffaecium) LAB12 CGMCC No. 4847。
2.根据权利要求1 所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium)LAB12 CGMCCNo. 4847, 其特征在于屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847是革兰氏阳性球菌，无芽孢；在MRS琼脂平板上生长良好，48h形成直径0. 5-lmm大小圆形菌落，菌落圆整、 光滑、隆起，呈灰白色露滴样；兼性厌氧生长，生长温度范围10°C _45°C，最适生长温度 30 0C -40 0C ；生长酸碱度范围pH 4-10，最适pH值为6.0。
3.根据权利要求1 所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium)LAB12 CGMCCNo. 4847, 其特征在于屎肠球菌(Enterococcus faecium) LABI2CGMCC No. 4847对金黄色葡萄球菌 (SA)、伤寒沙门氏菌(ST 04Hi)、猪源产肠毒素型大肠杆菌E.coli0139和猪源致病大肠杆菌(E.coli C83524、E. coli C83529)均有较强的抑制作用。
4.根据权利要求1所述的屎肠球菌(Enterococcusfaecium) LAB12 CGMCCNo. 4847，其特征在于屎肠球菌(Enterococcus faecium) LABI2CGMCC No. 4847 可耐受 pH 2. 5 合成胃液ISOmin ；最高耐受胆盐浓度为3. 0% (质量百分比浓度)。
5.根据权利要求1所述的屎肠球菌(Enterococcusfaecium) LAB12 CGMCCNo. 4847，其特征在于屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847对复达欣、先锋霉素、 苯唑青霉素、卡那霉素、头孢肟、庆大霉素和丁胺卡那霉素不敏感，对羧苄青霉素、先锋霉素 VI、先锋霉素V、氨苄青霉素、菌必治、美满霉片、青霉素、先锋必素、四环素、红霉素、新霉素、 强力霉素和氧哌嗪青霉素敏感。
6.根据权利要求1所述的屎肠球菌(Enterococcusfaecium) LAB12 CGMCCNo. 4847，其特征在于饲喂屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847后，动物肠道内大肠杆菌数量逐渐下降(P < 0. 05)。
7.一种屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847 冻干菌剂，其活性成分为屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847。
8.一种权利要求 7 所述屎肠球菌(Enterococcus faecium) LABI2CGMCC No. 4847 冻干菌剂的制备方法，包括以下步骤1)配制MC液体培养基，灭菌备用；2)配制冷冻保护液海藻糖10-100g/L、脱脂乳粉10-200g/L、蔗糖10_200g/L、甘油 10-100g/L，灭菌备用；3)将屎肠球菌(Enterococcusfaecium) LAB12 CGMCC No. 4847 接种到 MC 液体培养基中，37 士 2 °C下静置培养12-36小时；4)培养结束后，收集菌体，清洗菌体后，加入冷冻保护液，菌体与冷冻保护液的体积比 1 10-1 100，反复振荡，使冷冻保护液与菌体混合均勻，将加了冷冻保护剂的菌液装入冻干瓶中，在-40 士 2 °C预冻3-5小时；冻结完全后，使冻品温度在0 0C以下保持36-48小时， 同时打开真空泵抽取冻品中水分；待冻品水份接近抽干时，逐渐升高温度至室温以排出剩余的水分，避免冻干制品吸收空气中的水分，冻干后制品水分含量控制在0.5% -5% (质量百分含量)范围内，冻干结束后加盖密封，得到屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB 12CGMCC No. 4847 冻干菌剂。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于所述步骤1)中的MC液体培养基配方为葡萄糖5-10g/L、蛋白胨5-10g/L、木瓜蛋白胨5-10g/L、酵母提取物5_10g/L、柠檬酸二铵 l-5g/L、牛肉膏 5-10g/L、吐温 801-5g/L、K2HP04l-5g/L，ρΗ6· 0士0· 1。
10.权利要求 8 或 9 所述的屎肠球菌(Enterococcus faecium) LAB12 CGMCC No. 4847 冻干菌剂在制备饲料添加剂或兽药中的应用，可取代抗生素。
全文摘要
本发明一株饲用屎肠球菌及其冻干菌剂与应用，公开了饲用屎肠球菌(Enterococcus faecium)LAB12 CGMCC No.4847，是革兰氏阳性球菌，无芽孢，在MRS琼脂平板上生长良好，48h形成直径0.5-1mm大小圆形菌落，菌落圆整、光滑、隆起，呈灰白色露滴样；兼性厌氧生长，生长温度范围10℃-45℃，最适生长温度为30℃-40℃，生长酸碱度范围为pH 4-10，最适pH值为6.0。由该菌株制成的冻干菌剂无毒无害，耐胃液，耐胆盐，对多种有害菌有很强的抑制作用，且保质期长，可广泛应用到禽、畜养殖业中以增强动物抗病能力，有望成为饲用抗生素的替代物。
文档编号A23K1/16GK102304483SQ201110230809
公开日2012年1月4日 申请日期2011年8月12日 优先权日2011年8月12日
发明者付生慧, 唐泽华, 张东晓, 方莉玉, 梁运祥, 沈中艳, 游伟, 赵述淼, 雷红升 申请人:北京金泰得生物科技股份有限公司