专利名称：一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法
技术领域：
本发明涉及生物技术与现代农业技术领域，具体涉及一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法。
背景技术：
黄连木C^i1Siacia chinensis Bunge)是一种重要的多年生木本油料植物，分布范围广，可在荒山荒地和沙地种植，适宜大面积造林，而且种子含油率高达40%以上，用黄连木种子生产的生物柴油是清洁的可再生能源，是优质的石油柴油代替品，已经被确定为未来生态能源林建设和生物质柴油产业优先发展树种。由于其被作为生物质能源树种的前景看好，目前针对黄连木的研究越来越多，但基本都是集中在栽培技术等方面，而对于其组织培养及遗传转化方面的研究较少；目前，国家对于发展生物能源林建设愈来愈重视，通过分子手段来进行遗传改良是一种较快的方式。然而，黄连木存在种子消毒不易彻底、萌芽缓慢、发芽率低等问题，因此需要一种既能较好的去除其污染又能提高发芽率的方法。通过使用一般的消毒方式效果很是不理想，因此开发一种低污染、高发芽率的方法更加显得迫在眉睫。
发明内容
黄连木无菌外植体的获得是进行组织培养及遗传转化研究的基础。然而，由于黄连木种子消毒不易彻底，特别是储存时间长或梅雨季节更是甚难，严重影响了其研究进度。 因此，发明一种不仅消毒效果好而且发芽率高，获得的无菌苗比较健壮的方法是本发明的重要特征。本发明的目的在于针对黄连木普通消毒效果不理想的问题，设计一种不但消毒效果好而且获得的无菌苗发芽率高、生长健壮的方法。为了实现上述目的本发明采用如下技术方案
一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于将去除外壳的黄连木种子经乙醇和次氯酸钠消毒处理，然后将种子浸泡在水中进行超声处理，冲洗干净后接种在种子萌发培养基上，获得无菌健壮的实生苗。所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的乙醇和次氯酸钠消毒处理是指将种子先用65-75%的乙醇处理1分钟，无菌水冲洗一次，然后用15-25%的次氯酸钠处理10分钟。所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的超声处理是指将种子浸泡在无菌水中，然后放在温度设置在18-22°C的超声仪器中处理8-12分钟，之后无菌水清洗干净。所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的萌发培养基是指:l/2MS+6-BA2. 0 mg/L+SNP15 mg/L+ 葡萄糖 20g/L+ 琼脂 8 g/L, pH 调至 5. 8-6. 0。本发明的有益效果本发明巧妙的将普通消毒与超声波处理相结合，通过他们之间的协同作用，显著降低了种子内生菌的污染率，同时提高了种子的发芽率；将消毒干净的种子接种在特定培养基上，获得了生长健壮的无菌苗。
具体实施例方式
实施例1 黄连木种子内生菌去除及快速萌发的具体操作方法如下
1、将去除外壳的黄连木种子首先用纯水清洗几次，然后用70%的乙醇处理1分钟，无菌水冲洗一次，接着用20%的次氯酸钠处理10分钟，期间不停地摇动，无菌水冲洗3-4次；
2、经冲洗干净的种子浸泡在无菌三角烧瓶中，放入超声仪器20°C超声处理10分钟，之后无菌水冲洗至干净；
3、将消毒干净的种子接种在萌发培养基1/2MS+6-BA2.0mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖 20g/L+琼脂8 g/L，一周左右即可获得无内生菌污染、发芽率高且生长粗壮的无菌实生苗。
权利要求
1.一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于将去除外壳的黄连木种子经乙醇和次氯酸钠消毒处理，然后将种子浸泡在水中进行超声处理，冲洗干净后接种在种子萌发培养基上，获得无菌健壮的实生苗。
2.根据权利要求1所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的乙醇和次氯酸钠消毒处理是指将种子先用65-75%的乙醇处理1分钟，无菌水冲洗一次，然后用15-25%的次氯酸钠处理10分钟。
3.根据权利要求1所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的超声处理是指将种子浸泡在无菌水中，然后放在温度设置在18-22°C的超声仪器中处理 8-12分钟，之后无菌水清洗干净。
4.根据权利要求1所述的黄连木内生菌去除及快速萌发的方法，其特征在于所述的萌发培养基是指l/2MS+6-BA2. 0 mg/L+SNP15 mg/L+葡萄糖20g/L+琼脂8 g/L，pH调至 5. 8-6. O0
全文摘要
本发明公开了一种黄连木种子内生菌去除及快速萌发的方法，其主要是将去除外壳的黄连木种子经乙醇和次氯酸钠消毒处理，然后将种子浸泡在水中进行超声处理，冲洗干净后接种在种子萌发培养上，获得无菌健壮的实生苗。本发明不仅解决了种子由于消毒不彻底而造成的污染及消毒时间过长而影响其发芽率的难点，更为重要的是同时提高了种子的发芽率，且实生苗生长健壮，为黄连木组织培养及遗传转化提供基础。
文档编号A01C1/02GK102498793SQ201110323130
公开日2012年6月20日 申请日期2011年10月22日 优先权日2011年10月22日
发明者侯金艳, 吴丽芳, 李明浩 申请人:中国科学院合肥物质科学研究院