专利名称：花生转基因瓶苗的炼苗方法
技术领域：
本发明涉及转基因花生组织培养技术领域，特别是涉及一种花生转基因瓶苗的炼苗方法。
背景技术：
花生是重要的油料作物和经济作物，由于其种质资源有限，在栽培生产中易受多种病虫害以及干旱等不利因素的影响，导致产量和品质下降。现代转基因技术的发展对提高花生抗性、改良花生品质，实现花生品种改良，发挥重要的作用。目前应用于花生的转基因技术以依赖组织培养的农杆菌介导法和基因枪法为主。同多数豆科作物一样，花生的遗传转化技术难度大、转化率低。由于花生自身特点以及技术限制，目前的花生遗传转化效率最高也只能达到4-5%，且以花生组织培养为基础的遗传转化前期周期长，前期外植体制备以及筛选的工作量非常大。因此，后期提高阳性苗的成活率至关重要。炼苗是制约后期移栽成活率的关键一环。由于花生转基因瓶苗一直生长在无菌、 营养供给充足、光照、温度适宜以及100%的相对湿度环境中，并有适宜的植物激素以调节生长代谢等生理需要，且由于花生瓶苗本身肉质茎比较娇嫩，茎叶水分含量大，所以对外界环境的适应能力差，稍有不慎便会造成大量死苗，使已花费的劳动付之东流。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种花生转基因瓶苗的炼苗方法，其解决现有条件下转基因花生组培苗炼苗易污染、适应性差、移栽难的问题。本发明是通过下述技术方案来解决上述技术问题的一种花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，其包括以下步骤选择达到炼苗要求的花生转基因瓶苗，然后将花生转基因瓶苗移至炼苗房炼苗，花生转基因瓶苗装在组培瓶中，通过控制开组培瓶时间、开组培瓶程度与炼苗房光照、温度、湿度，使花生转基因瓶苗逐渐适应外界环境。优选地，所述达到炼苗要求的花生转基因瓶苗符合以下条件肉质茎超过两个节间，叶色正常，有3条以上的根，根长2cm以上。优选地，所述组培瓶为瓶盖带有可控膜样通气口的螺口瓶。优选地，所述花生转基因瓶苗使用培养基，培养基仍为生根阶段所用的生根培养基。优选地，所述炼苗房炼苗需14-15天，炼苗房炼苗可分为四个阶段第一阶段，打开组培瓶瓶盖处膜样通气口 3天；第二阶段，微开组培瓶盖4天；第三阶段，半开盖4天；第四阶段，完全敞开培养3天。
优选地，所述第四阶段完全敞开培养时，可视组培瓶内培养基消耗情况补充生根培养基，该补充操作在超净工作台进行，补充的生根培养基需用水浴凉至34-36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入，之后在超净工作台放置3小时，使培养基表面干燥再移入炼苗房继续炼苗。优选地，所述炼苗第一阶段室内湿度保持在75-80%，温度为28°C，光照强度设为 4000Lx ;炼苗后三个阶段室内湿度仍保持在75-80%，温度为25°C，光照强度设为3000Lx。本发明的积极进步效果在于本发明可提高花生移栽成活率进而提高花生遗传转化效率。
具体实施例方式下面通过具体实施例进一步说明本发明的技术方案，本发明包括但不限于以下实施方式。根据现有技术对本发明所进行的不脱离本发明实质内容的改变，仍属于本发明的保护范围。本发明花生转基因瓶苗的炼苗方法包括以下步骤选择达到炼苗要求的花生转基因瓶苗，然后将花生转基因瓶苗移至炼苗房炼苗，花生转基因瓶苗装在组培瓶中，通过控制开组培瓶时间、开组培瓶程度与炼苗房光照、温度、湿度，使花生转基因瓶苗逐渐适应外界环境。其中，达到炼苗要求的花生转基因瓶苗符合以下条件肉质茎超过两个节间，叶色正常，有3条以上的根，根长2cm以上。组培瓶为瓶盖带有膜样通气口的螺口瓶，使炼苗过程的污染几率小于2%，且大幅降低了污染程度。花生转基因瓶苗使用培养基，培养基仍为生根阶段所用的生根培养基。实施例I
将肉质茎超过两个节间，叶色正常，30株根长为2cm以上的花生转基因瓶苗移至炼苗房进行炼苗，该批苗是通过农杆菌侵染获得的SAD基因超量表达苗，花生转基因瓶苗有3条以上的根。炼苗房炼苗需14-15天，炼苗房炼苗可分为四个阶段第一阶段，打开组培瓶瓶盖处膜样通气口 3天；第二阶段，微开组培瓶盖(小于1/4)4天；第三阶段，半开盖4天；第四阶段，完全敞开培养3天。炼苗第一阶段室内湿度保持在75-80%，温度为28°C，光照强度设为 4000Lx (Lx为照度单位，中文名称“勒克斯”)；炼苗后三个阶段室内湿度仍保持在75-80%， 温度为25°C，光照强度设为3000LX，以减少叶片的蒸腾作用。在第四阶段完全敞开培养时， 可视组培瓶内培养基消耗情况补充生根培养基，比如由于培养基消耗及水分蒸发，在组培瓶中补充5_左右的生根培养基，该补充操作在超净工作台进行，补充的生根培养基需用水浴凉至34-36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入，之后在超净工作台放置3小时，使培养基表面干燥再移入炼苗房继续炼苗。经过14天炼苗，30株暴露在外界环境中的花生转基因瓶苗均叶色正常、长势旺盛，且只有一株发生少量霉菌污染根部培养基的情况，完全符合移栽要求。实施例2
将肉质茎超过两个节间，叶色正常，17株根长为2cm以上的花生转基因瓶苗移至炼苗房进行炼苗，该批苗是通过农杆菌侵染获得的KAS II基因超量表达苗，花生转基因瓶苗有3条以上的根。炼苗房炼苗需14-15天，炼苗房炼苗可分为四个阶段第一阶段，打开组培瓶瓶盖处膜样通气口 3天；第二阶段，微开组培瓶盖(小于1/4) 4天；第三阶段，半开盖5天；第四阶段，完全敞开培养3天。炼苗第一阶段室内湿度保持在75-80%，温度为28°C，光照强度设为4000Lx ;炼苗后三个阶段室内湿度仍保持在75-80%，温度为25°C，光照强度设为3000Lx， 以减少叶片的蒸腾作用。在第四个阶段完全敞开培养时，由于培养基消耗及水分蒸发，在组培瓶中补充5_左右的生根培养基，该操作在超净工作台进行，新加培养基需用水浴凉至 34-36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入，之后在超净工作台放置3小时，使培养基表面干燥再移入炼苗房继续炼苗。经过15天炼苗，25株暴露在外界环境中的花生转基因瓶苗均叶色正常、长势旺盛，且没有发生培养基污染的情况，完全符合移栽要求。通过炼苗房四个炼苗阶段，避免了传统转基因花生组培苗直接暴漏在大田环境中造成的污染，使转基因组培苗逐渐适应环境，根系和植株生长旺盛，从而提高花生移栽成活率进而提闻花生遗传转化效率。本领域的技术人员可以对本发明进行各种改型和改变。因此，本发明覆盖了落入所附的权利要求书及其等同物的范围内的各种改型和改变。
权利要求
1.一种花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，其包括以下步骤选择达到炼苗要求的花生转基因瓶苗，然后将花生转基因瓶苗移至炼苗房炼苗，花生转基因瓶苗装在组培瓶中，通过控制开组培瓶时间、开组培瓶程度与炼苗房光照、温度、湿度，使花生转基因瓶苗逐渐适应外界环境。
2.如权利要求I所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述达到炼苗要求的花生转基因瓶苗符合以下条件肉质茎超过两个节间，叶色正常，有3条以上的根，根长 2cm以上。
3.如权利要求I所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述组培瓶为瓶盖带有可控膜样通气口的螺口瓶。
4.如权利要求I所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述花生转基因瓶苗使用培养基，培养基仍为生根阶段所用的生根培养基。
5.如权利要求4所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述炼苗房炼苗需 14-15天，炼苗房炼苗可分为四个阶段第一阶段，打开组培瓶瓶盖处膜样通气口 3天；第二阶段，微开组培瓶盖4天；第三阶段，半开盖4天；第四阶段，完全敞开培养3天。
6.如权利要求5所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述第四阶段完全敞开培养时，可视组培瓶内培养基消耗情况补充生根培养基，该补充操作在超净工作台进行，补充的生根培养基需用水浴凉至34-36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入，之后在超净工作台放置3小时，使培养基表面干燥再移入炼苗房继续炼苗。
7.如权利要求5所述的花生转基因瓶苗的炼苗方法，其特征在于，所述炼苗第一阶段室内湿度保持在75-80%，温度为28°C，光照强度设为4000Lx ;炼苗后三个阶段室内湿度仍保持在75-80%，温度为25°C，光照强度设为3000Lx。
全文摘要
本发明公开了一种花生转基因瓶苗的炼苗方法，其包括以下步骤选择达到炼苗要求的花生转基因瓶苗，然后将花生转基因瓶苗移至炼苗房炼苗，花生转基因瓶苗装在组培瓶中，通过控制开组培瓶时间、开组培瓶程度与炼苗房光照、温度、湿度，使花生转基因瓶苗逐渐适应外界环境。本发明解决花生转基因瓶苗炼苗易污染、适应性差、移栽难的问题，提高了转基因花生移栽的成活率。
文档编号A01H4/00GK102599058SQ201210079548
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月23日 优先权日2012年3月23日
发明者和亚男, 杨庆利, 杨珍, 潘丽娟, 王冕, 王通, 禹山林, 迟晓元, 陈娜, 陈明娜 申请人:山东省花生研究所