专利名称：一种转基因花生组培苗壮苗、生根的方法
技术领域：
本发明涉及一种花生培苗方法，尤其是一种转基因花生组培苗壮苗、生根的方法。
背景技术：
利用组织培养方法进行花生扩繁具有以下优势首先，可短时间大量繁殖，对繁育稀缺品种以及目前的花生转基因工作具有十分重要的意义；其次，占用空间小，不受地区、 季节限制；另外，培养条件人为可控，条件均一，便于稳定地进行培养生产。生根环节是整个花生组培过程的关键一环，承接了前期的诱导分化环节与后期的移栽环节。组培苗生根的优劣直接决定了后期移栽的成活率。而生根的好坏又直接受前期分化苗质量的影响，若苗短小、细弱，生根质量也差。因此必须经过壮苗。壮苗与增殖系数的提高相互制约，若单纯追求增殖系数，分化苗势必短小、细弱，若单纯追求苗的质量，又影响增殖系数，使分化苗减少。必须通过选择适宜的细胞分裂素和生长素的种类及不同浓度配比，以实现增殖和壮苗的双重目的。目前就花生组培来说，还没有一套行之有效的壮苗、 生根方法，现有方法无法同步实现增殖与壮苗的目的，且生根率低，生根质量差，严重影响后期移栽的成活率。因此，建立一套高效的壮苗、生根体系是目前条件下提高花生组织培养效率的关键。
发明内容
本发明提供了一种壮苗效果好、生根率高、生根质量好的转基因花生组培苗壮苗、 生根的方法。实现本发明目的的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，包括如下步骤
(1)将已经诱导分化出丛生芽的花生组培苗转移到壮苗培养基A上20天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基A的组分为MS培养基，所用激素为细胞分裂素6-BA ；
(2)将长至I.5cm以上的组培苗分成单株，移至壮苗培养基B上2(T25天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基B的成分为MS培养基，所用激素为0. 4 mg/L的细胞分裂素6-BA 和0. lmg/L的生长素NAA ；
(3)待苗长至2.5 4cm，移至生根培养基生根，所述生根培养基的成分为1/2 MS培养基，所用激素为生长素IBA和NAA，浓度分别为3mg/L和0. 3mg/L。本发明进一步提供了上述花生组培苗壮苗、生根方法的优选技术方案
作为优选，所述步骤(I)中的培养基A的工作浓度从恢复培养基和诱导培养基的3mg/ L降至lmg/L,培养基厚度为I. 5cm。作为优选，所述将已经诱导分化出丛生芽的花生组培苗转移到壮苗培养基A上时，将生长较好的芽用无菌手术刀分成单株，并切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分， 底部茎端没入培养基2-3mm培养，将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。作为优选，所述步骤(2)中的培养基B的厚度为I. 5cm。作为优选，所述选取长至I. 5cm以上的组培苗单株移至壮苗培养基B上，切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基2-3mm培养。作为优选，所述步骤(3)中的生根培养基的厚度为H 5cm。作为优选，所述将经过壮苗长至2. 5 4cm高的组培苗移至生根培养基上15 30天， 待生出3条以上的根，根长超过2cm，肉质茎超过两个节间，即可进行炼苗、移栽。作为优选，所述步骤(3)的生根培养到15天后，若生根情况仍达不到要求，需要在原培养基上层再倒0. 6^1cm厚生根培养基，新加培养基需用水浴凉至34 36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入。作为优选，所述步骤(I)和步骤(2)所用光照强度均为4000LX，生根阶段光照强度调整到5000Lx。本发明的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法的有益效果如下
本发明的花生组培苗壮苗、生根的方法，获得的花生组培苗长势旺盛，生根率达到 100%，且不定根粗壮、毛细根发达，有效提高了移栽成活率。解决了花生组培苗生根难、生根差的问题，社会效益和科研价值显著。
具体实施例方式实施例I
将经诱导分化的51株花生花育26丛生芽转移到壮苗培养基A上培养20天，转移时，将生长较好的芽分成单株，并用无菌手术刀切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基疒3_培养，而将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。壮苗培养基A的组分为MS培养基中添加lmg/L细胞分裂素6-BA(恢复、诱导培养基中浓度为3mg/L)，PH=5. 8。 10天更换一次培养基，将丛生芽中生长较好的再次分成单株培养。经过壮苗培养基A培养后，将长至I. 5cm以上的转基因苗单株移至壮苗培养基B上25天，同样切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基2 3_培养，10天更换一次培养基。壮苗培养基B的成分为MS培养基中添加0. 4 mg/L细胞分裂素6_BA、0. lmg/L生长素NAA，PH=5. 8。 待苗长至2. 5 4cm，移至生根培养基生根。生根培养基的成分为1/2MS培养基，PH=5. 8，所用激素为生长素IBA和NAA，浓度分别为3mg/L和0. 3mg/L。经过壮苗，249株组培苗进入生根阶段，生根率为100%，并且至移至生根培养基25 天，99%的组培苗全部生出3条以上的根，根长超过2cm，且不定根比较粗壮，毛细根发达，达到移栽要求，移栽成活率达到92%以上。而普通组培苗壮苗、生根的方法，只有46%的组培苗生出3条以上的根，根长一般在f I. 5厘米之间。不定根较弱，毛细根不发达，及时能够移栽，移栽成活率也低于50%。实施例2
将经诱导分化的47株花生花育17丛生芽转移到壮苗培养基A上培养20天，转移时，将生长较好的芽分成单株，并用无菌手术刀切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基疒3_培养，而将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。壮苗培养基A的组分为MS培养基中添加lmg/L细胞分裂素6-BA(恢复、诱导培养基中浓度为3mg/L)，PH=5. 8。 10天更换一次培养基，将丛生芽中生长较好的再次分成单株培养。经过壮苗培养基A培养后，将长至I. 5cm以上的转基因苗单株移至壮苗培养基B上20天，同样切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基2 3_培养，10天更换一次培养基。壮苗培养基B的成分为MS培养基中添加0. 4 mg/L细胞分裂素6_BA、0. lmg/L生长素NAA，PH=5. 8。 待苗长至2. 5 4cm，移至生根培养基生根。生根培养基的成分为1/2MS培养基，PH=5. 8，所用激素为生长素IBA和NAA，浓度分别为3mg/L和0. 3mg/L。经过壮苗，225株组培苗进入生根阶段，生根率为100%，并且至移至生根培养基20 天98%的组培苗生出3条以上的根，根长超过2cm，且不定根比较粗壮，毛细根发达，达到移栽要求。而普通组培苗壮苗、生根的方法，只有46%的组培苗生出3条以上的根，根长一般在f I. 5厘米之间。不定根较弱，毛细根不发达，及时能够移栽，移栽成活率也低于50%。上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神前提下，本领域普通工程技术人员对本发明技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明的权利要求书确定的保护范围内。
权利要求
1.一种转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，包括如下步骤(1)将已经诱导分化出丛生芽的花生组培苗转移到壮苗培养基A上20天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基A的组分为MS培养基，所用激素为细胞分裂素6-BA ；(2)将长至I.5cm以上的组培苗分成单株，移至壮苗培养基B上20-25天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基B的成分为MS培养基，所用激素为O. 4 mg/L的细胞分裂素6-BA 和O. lmg/L的生长素NAA ；(3)待苗长至2.5 4cm，移至生根培养基生根，所述生根培养基的成分为1/2 MS培养基，所用激素为生长素IBA和NAA，浓度分别为3mg/L和O. 3mg/L。
2.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述步骤(1)中的培养基A厚度为I.5cm。
3.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述将已经诱导分化出丛生芽的花生组培苗转移到壮苗培养基A上时，将生长较好的芽用无菌手术刀分成单株，并切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基2 3_培养，将一些尚未成型的芽分成几个芽丛培养。
4.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述步骤(2)中的培养基B的厚度为1.5cm。
5.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述选取长至I. 5cm以上的组培苗单株移至壮苗培养基B上，切除底部与培养基接触形成的黑褐色部分，底部茎端没入培养基2 3mm培养。
6.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述步骤(3)中的生根培养基的厚度为2 2.5cm。
7.根据权利要求I所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述将经过壮苗长至2. 5 4cm高的组培苗移至生根培养基上15 30天，待生出3条以上的根，根长超过2cm，肉质茎超过两个节间，即可进行炼苗、移栽。
8.根据权利要求7所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述步骤(3)的生根培养到15天后，若生根情况仍达不到要求，需要在原培养基上层再倒O. 6 lcm厚生根培养基，新加培养基需用水浴凉至34 36°C，将组培瓶倾斜沿瓶壁缓缓倒入。
9.根据权利要求f8任一所述的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，其特征在于所述步骤(I)和步骤(2)所用光照强度均为4000LX，生根阶段光照强度调整到5000LX。
全文摘要
本发明提供了一种壮苗效果好、生根率高、生根质量好的转基因花生组培苗壮苗、生根的方法，包括如下步骤(1)将已经诱导分化出丛生芽的花生组培苗转移到壮苗培养基A上20天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基A的组分为MS培养基，所用激素为细胞分裂素6-BA；(2)将长至1.5cm以上的组培苗分成单株，移至壮苗培养基B上20-25天，10天更换一次培养基，所述壮苗培养基B的成分为MS培养基，所用激素为0.4mg/L的细胞分裂素6-BA和0.1mg/L的生长素NAA；(3)待苗长至2.5-4cm，移至生根培养基生根，所述生根培养基的成分为1/2MS培养基，所用激素为生长素IBA和NAA，浓度分别为3mg/L和0.3mg/L。
文档编号A01H4/00GK102577981SQ201210079420
公开日2012年7月18日 申请日期2012年3月23日 优先权日2012年3月23日
发明者和亚男, 杨庆利, 杨珍, 潘丽娟, 王冕, 王通, 禹山林, 迟晓元, 陈娜, 陈明娜 申请人:山东省花生研究所