专利名称：九华黄精的组培快繁方法
技术领域：
本发明涉及ー种具有药用价值的黄精属植物的组培快繁方法，特别是九华黄精的组培快繁方法。
背景技术：
九华黄精是百合科黄精属多年生宿根性草本药用植物，其根茎是传统中药，在九华山地区普遍生长。近代研究表明，黄精含有烟酸、醒类、豁液质、ニ氨基丁酸、多种皂苷和黄精多糖等成分，作为中药使用具有补脾润肺、益气养阴、強壮筋骨等作用。近年来，黄精已被广泛应用于治疗冠心病、高血压、糖尿病、肺結核、再生障碍性贫血等疾病，取得了较好的疗效。随着黄精的药用价值和保健价值越来越被人们所认识，黄精原料的需求量也越来越大，从而导致对野生黄精的大量掠夺性采集加剧，使自然资源迅速枯竭。因此，保证黄精原料来源、实行产业化种植的重要性越来越明显。而由于黄精生产上多采用分根繁殖，其繁殖系数低，种根茎用量大，不便栽植管理与推广，故黄精种苗问题成了人工大面积种植的瓶颈。利用植物组织培养技术建立黄精快速繁殖体系是生产优质黄精种苗的有效途径。其关键技术之ー在于黄精根茎上不定芽的増殖数量和质量，不同激素组合及其浓度对此影响很大。尽管国内已有黄精组织培养研究的报道，但黄精种苗繁殖率低，无法进行エ业化生产的问题仍然没有得到有效解决。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种九华黄精的组培快繁方法，该方法克服了九华黄精根状茎繁殖率低、生长年限长的缺陷，达到了繁殖系数高，速度快、技术稳定、可在短时间内提供大量优质黄精种苗的目的。为了实现本发明的目的，本发明采用的技术方案为一种九华黄精的组培快繁方法，包括下列培养阶段I)不定芽的诱导阶段取幼嫩黄精根状茎，先进行消毒获得无菌材料，再将其接种于诱导培养基上，培养28-32天，培养温度为25±1°C，光照时间为10_12h/天，光照强度为16001x，获得丛芽，所述的诱导培养基组成为MS基本培养基+3. 0-5. Omg/L6-BA+0. 3-0. 5mg/L 2，4_D+6_8g/L 琼脂 +28_32g/L 蔗糖，其 pH5. 5-6. O ；2)丛芽增殖阶段将步骤I)所得丛芽切成保留一个顶芽或侧芽的茎段，分别接种于增殖培养基上，培养38-42天，培养温度为25± 1°C，光照时间为10_12h/天，光照強度为16001x，所述的增殖培养基的组成为MS基本培养基+0. 5-0. 7mg/L 6-BA+0. 1-0. 2mg/LIAA+0. 1-0. 2mg/L NAA+6_8g/L 琼脂 +28_32g/L 蔗糖，ρΗ5· 5-6. 0 ；3)试管苗培养生根阶段将所得的单个健壮不定芽从基部剪下，接种于生根培养基上，培养22-26天，培养温度为25±1°C，光照时间为10_12h/天，光照强度为16001x，培养出生根试管苗，所述的生根培养基组成为1/2MS基本培养+0. 5-0. 7mg/L NAA+6_8g/L琼脂 +28-32g/L 蔗糖，ρΗ5· 5-6. O ；4)炼苗移栽阶段当试管苗生根后，将培养试管苗的培养瓶塞打开后，置于40001χ左右的光照下炼苗3-4d，取出生根试管苗，洗净培养基，移栽到混和土中，并盖上有机玻璃盖子，移栽后7d内要保持没有直射光照射、温度在20°C以上、湿度在90%以上的环境条件，7d后去盖，即可得到优质黄精种苗，所述的混和土由蛭石、黒土和珍珠岩按比例混合而成，三者的混合比例为蛭石黒土珍珠岩=(10-14) (I. 5-2. 5) I的混和土。所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是步骤I)中获得无菌材料的具体操作为I)取幼嫩黄精根状茎，洗掉泥土，用刀切取带芽根茎于洗洁精水溶液中浸泡
5-6min,然后用自来水冲洗干净；2)再用75%こ醇擦洗黄精根状茎表面，再次用自来水冲洗；3)再在超净工作台中先用75%こ醇浸泡O. 5min，再用灭菌水冲洗；再用升汞浸泡lOmin，灭菌水冲洗；最后用无菌滤纸吸干水份，用刀切去伤ロ坏死部分，接种在诱导培
养基上。所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是所述的诱导、増殖、生根阶段的培养温度均为25°C，光照时间为12h/天，光照强度为16001x。所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是步骤4)所述的混合土中添加有铁矿尾矿，混合土各组分的重量比例为蛭石黒土 珍珠岩铁矿尾矿=(10-14) (I. 5-2. 5) I (2-3)。铁矿尾矿的化学成分分析为(％)
权利要求
1.一种九华黄精的组培快繁方法，其特征是包括下列培养阶段 1)不定芽的诱导阶段取幼嫩黄精根状茎，先进行消毒获得无菌材料，再将其接种于诱导培养基上，培养28-32天，培养温度为25±1°C，光照时间为10-12h/天，光照强度为16001x，获得丛芽，所述的诱导培养基组成为MS基本培养基+3. 0-5. 0mg/L6-BA+0. 3-0. 5mg/L 2，4-D+6-8g/L 琼脂 +28_32g/L 蔗糖，其 pH 5. 5-6. 0 ； 2)丛芽增殖阶段将步骤I)所得丛芽切成保留一个顶芽或侧芽的茎段，分别接种于增殖培养基上，培养38-42天，培养温度为25±1°C，光照时间为10-12h/天，光照强度为16001x,所述的增殖培养基的组成为MS基本培养基+0. 5-0. 7mg/L 6-BA+0. 1-0. 2mg/LIAA+0. 1-0. 2mg/L NAA+6_8g/L 琼脂 +28_32g/L 蔗糖，pH 5. 5-6. 0 ； 3)试管苗培养生根阶段将所得的单个健壮不定芽从基部剪下，接种于生根培养基上，培养22-26天，培养温度为25±1°C，光照时间为10-12h/天，光照强度为16001x，培养出生根试管苗，所述的生根培养基组成为1/2MS基本培养+0. 5-0. 7mg/L NAA+6_8g/L琼脂+28-32g/L 蔗糖，pH 5. 5-6. 0 ； 4)炼苗移栽阶段当试管苗生根后，将培养试管苗的培养瓶塞打开后，置于40001x左右的光照下炼苗3-4d，取出生根试管苗，洗净培养基，移栽到混和土中，并盖上有机玻璃盖子，移栽后7d内要保持没有直射光照射、温度在20°C以上、湿度在90%以上的环境条件，7d后去盖，即可得到优质黄精种苗，所述的混和土由蛭石、黑土和珍珠岩按比例混合而成，三者的混合比例为蛭石黑土 珍珠岩=(10-14) (1. 5-2. 5) 1的混和土。
2.根据权利要求I所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是步骤I)中获得无菌材料的具体操作为 1)取幼嫩黄精根状茎，洗掉泥土，用刀切取带芽根茎于洗洁精水溶液中浸泡5-6min，然后用自来水冲洗干净； 2)再用75%乙醇擦洗黄精根状茎表面，再次用自来水冲洗； 3)再在超净工作台中先用75%乙醇浸泡0.5 min，再用灭菌水冲洗；再用升汞浸泡lOmin，灭菌水冲洗；最后用无菌滤纸吸干水份，用刀切去伤口坏死部分，接种在诱导培养基上。
3.根据权利要求I所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是所述的诱导、增殖、生根阶段的培养温度均为25°C，光照时间为12h/天，光照强度为16001x。
4.根据权利要求I所述的九华黄精组培快繁方法，其特征是步骤4)所述的混合土中添加有铁矿尾矿，混合土各组分的重量比例为蛭石黑土 珍珠岩铁矿尾矿=(10-14)(I. 5-2. 5) 1 :(2-3)。
全文摘要
本发明提供了一种九华黄精的组培快繁方法，以黄精根状茎为外植体，经过不定芽的诱导阶段，丛芽增殖阶段，生根阶段和炼苗移栽阶段，调配和优选各培养阶段的培养基配方和培养条件，形成了每年扩繁速度为106倍的组培技术，实现了九华黄精的组织培养和快速稳定繁殖，可以有效解决九华黄精的优质种苗供应问题。
文档编号A01H4/00GK102630562SQ20121008505
公开日2012年8月15日 申请日期2012年3月28日 优先权日2012年3月28日
发明者陈伟民 申请人:青阳县九华黄精产业化协会