专利名称：肝损伤模型的建立方法
技术领域：
本发明涉及一种实验方法，即一种肝损伤模型的建立方法。
背景技术：
建立肝损伤模型是肝病研究中常用的动物实验方法。目前，肝损伤模型的建立方法很多，例如灌注四氯化碳(CCL4)、D_半乳糖胺(D-galactosamine，D-GalN)、猪血清、高度白酒等。研究发现，上述造模方法均与蒙医基础理论不太吻合。蒙医理论认为，肝脏位于右侧上腹，横隔之下，希拉之总位，五元中之火元素精华所藏之处，是变色希拉之所舍，也是病变希腊窜行之道。肝的生理功能是通过分热能和变色希拉之作用，使水谷之精华生化为血液，同时把肝内生成的血液之槽泊一胆汁输送之胆囊。胃位于膈下上腹部，上接食道，下通小肠，希拉之总位，也是病变巴达干窜行之道，五元中之土元素精华之槽泊聚集于胃中。另外消化三能一磨碎巴达干、消化希拉和调火赫依共存于胃内。食物借司命赫依之作用被咽进胃内，而后为磨碎巴达干所腐熟成甘味泡沫状乳糜，此时巴达干亦得滋养；其次被消化希 拉所溶解转化为酸味，此时亦能滋养希拉；最后被调火赫依分解成苦味的精华和槽泊，同时赫依亦能得到滋养。因此，蒙医理论把肝损伤归因于胃血症，认为肝病的发病机理是犹豫邪热伤肝致使水谷精华不能化生为血，却恶血激增溢于胃，即“胃血症而引起肝损伤”。基于上述认识，蒙医在肝损伤治疗中采用了一系列独特的治疗方法和用药原则，并且具有良好的治疗效果。显然，我们在蒙医理论的基础上进行肝损伤研究的时候，如果不是采用胃血症的方法，而是采用其他方法来建立肝损伤模型，在理论上难以自圆其说，其治疗方法和用药原则的考量也会遇到障碍。因此，我们希望有一种与蒙医理论一致的肝损伤模型的建立方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种与蒙医有关肝损伤形成的理论相一致的肝损伤模型的
建立方法。上述目的是由以下技术方案实现的提供一种肝损伤模型的建立方法，其特点是将实验动物进行胃幽门结扎，造成胃液在胃中滞留，进而形成肝损伤模型。所说的胃幽门结扎的过程是把实验大鼠适应性饲养2—4天后，禁食24h，此间不禁水，每只大鼠按3mg/kg的给药标准先用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在大鼠肚皮胃幽门处剪成小口，找到胃幽门后用缝合线结扎，然后缝合腹腔，造成胃液在胃中滞留，致溃疡因素增强，胃壁防御因素相对减弱，导致溃疡形成，肝损伤的各项指标随之产生。所说的缝合腹腔后到肝损伤模型形成需要14-16小时。所说的肝损伤模型的验证方法是术后大鼠单笼饲养，禁食禁水14_16h，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，打开腹腔取肝脏，称重，计算肝脏指数，取一部分肝脏，固定于10%甲醛，做病理备用，再从腹主动脉取血，水浴36 37°C保温30min，取出4°C冰箱放置30min,离心 IOmin (3000r/min),分取血清，测定血清中的 AST、ALT、CHE、NO、NOS 含量。
本发明的有益效果是所建模型的各项表征与肝损伤的指标相吻合，能够代表肝损伤的实际过程，模型的形成过程符合蒙医理论，为蒙医蒙药有关肝病的治疗研究带来了方便，在蒙药以及蒙医方剂作用机制研究方面有着不可替代的作用，对于蒙医传统理论与现代医学的结合，发挥民族医药的优势，解除肝病患者的痛苦，具有重要的意义。
具体实施例方式本发明的实施方式是把实验动物开腹，将胃幽门结扎后缝合腹部，即可形成肝损伤模型。具体做法是将大鼠适应于环境2—4天后，做手术之前禁食不禁水24h，每只大鼠先用10%水合氯醛腹腔注射(给药标准为3mg/kg)麻醉，在大鼠肚皮胃幽门处剪成小口，找到胃幽门后用缝合线结扎，然后缝合腹腔。关腹后14-16小时肝损伤模型形成，通过检验有关指标，确定肝损伤模型是否建立。为证明上述方法的效果，本研究进行了大量的实验，实验结果证明采用胃幽门结扎能够形成肝损伤，其稳定性和可复现性均满足肝损伤治疗研究的需求。下面仅介绍一个实验例I.实验仪器及材料I. I仪器AUY120电子天平(日本岛津公司)；TG16—WS台式高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)；HH — W600数显三用恒温水箱(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司型号T6新世纪)；全自动生化分析仪(意大利奔腾)；电子天平(型号YB1201，精确度0. lg)，购自上海海康电子仪器厂；lml注射器；剪刀；镊子。I. 2试剂、药品及制备AST、ALT、CHE、URE、TP试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)，批号20111203。NO、N0S、试剂盒(南京建成生物生物工程研究所)，批号20111212。CH0、TG、LDL-C试剂盒(南京建成生物生物工程研究所)，批号20120311。I. 3试验动物SD大鼠，由吉林大学实验动物中心提供，生产许可证号SCXK (辽)2011-0023。2 实验方法与结果2. I实验方法买来的大鼠适应于环境2— 4天后，按体重随机分为正常组和模型组，每组12只。手术之前24h禁食不禁水，模型组每只大鼠先用10%水合氯醛腹腔注射(给药标准为3mg/kg)麻醉，然后打开腹腔结扎幽门关腹。术后大鼠单笼饲养，禁食禁水14-16h后腹腔注射10%水合氯醛麻醉。打开腹腔取肝脏，称重，计算肝脏指数，取一部分肝脏，固定于10%甲醛，做病理备用。再从腹主动脉取血，水浴36 37°C保温30min，取出4°C冰箱放置30min，离心IOmin (30001'/111111)，分取血清，测定血清中的451\41^、0^、勵、勵5含量。2. 2实验结果2. 2. I幽门结扎法对大鼠血清AST、ALT、CHE、URE含量的影响测定之前把血清稀释14倍，按照试剂盒说明测定的结果见表I。表I幽门结扎法大鼠血清AST、ALT、CHE、URE含量的影响(X土S)权利要求
1.一种肝损伤模型的建立方法，其特征在于将实验动物进行胃幽门结扎，造成胃液在胃中滞留，进而形成肝损伤模型。
2.根据权利要求I所述的肝损伤模型的建立方法，其特征在于所说的胃幽门结扎的过程是把实验大鼠适应性饲养2—4天后，禁食24h，此间不禁水，每只大鼠按3mg/kg的给药标准先用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，在大鼠肚皮胃幽门处剪成小口，找到胃幽门后用缝合线结扎，然后缝合腹腔，造成胃液在胃中滞留，致溃疡因素增强，胃壁防御因素相对减弱，导致溃疡形成，肝损伤的各项指标随之产生。
3.根据权利要求2所述的肝损伤模型的建立方法，其特征在于所说的缝合腹腔后到肝损伤模型形成需要14-16小时。
4.根据权利要求2所述的肝损伤模型的建立方法，其特征在于所说的肝损伤模型的验证方法是术后大鼠单笼饲养，禁食禁水14-16h，然后腹腔注射10%水合氯醛麻醉，打开腹腔取肝脏，称重，计算肝脏指数，取一部分肝脏，固定于10%甲醛，做病理备用，再从腹主动脉取血，水浴36 37°C保温30min,取出4°C冰箱放置30min,离心IOmin (3000r/min),分取血清，测定血清中的AST、ALT、CHE、NO、NOS含量。
全文摘要
本发明涉及一种方法，即一种肝损伤模型的建立方法。其特点是将实验动物进行胃幽门结扎，造成胃液在胃中滞留，进而形成肝损伤模型。其有益效果是肝损伤模型的形成过程符合蒙医关于肝损伤的理论，为蒙医蒙药有关肝病的治疗研究带来了方便，在蒙药以及蒙医方剂作用机制研究方面有着不可替代的作用，对于蒙医传统理论与现代医学的结合，发挥民族医药的优势，解除肝病患者的痛苦，具有重要的意义。
文档编号A61D1/00GK102727322SQ201210238680
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月11日 优先权日2012年7月11日
发明者乌恩其, 乌日罕, 代秀平, 海晶晶, 王欢, 王秀兰 申请人:内蒙古民族大学