专利名称：大鲵精液保藏剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鱼类的制种方法，特别是涉及一种大鲵精液保藏剂的制备方法，该技术属于生物技术领域。
背景技术：
大鲵俗称娃娃鱼，为我国所特产，属濒危动物，被国家列为二类重点保护野生动物。通过近些年的大规模养殖，大鲵种质资源退化严重，生长速度显著下降，各种疾病频发。开展大鲵优良家系的选育，对于提高经济效益等具有重要意义。由于种鲵的价格昂贵，人工繁育大鲵，环境、设备要求高、技术难度大，因此要养殖 商品大鲵和经验不足的养殖户，一定要到有水生野生动物驯养繁殖和经营利用许可证的正规繁育场获取大鲵苗种。为了提高大鲵的成活率，应当选择孵化出苗3个月、体长5厘米以上的大鲵幼苗。大鲵幼苗在运输过程中，温度与大鲵的活动、耗氧量等有着密切的关系。采用充氧运输时，在40乘40的袋中，6-12厘米的幼苗，最多不能超过60尾。运输大鲵幼苗不如运输大鲵精液进行配种，因此，开发大鲵精液保藏剂特别具有经济价值。
发明内容
本发明旨在提供一种大鲵精液保藏剂的制备方法。大鲵精液的保藏剂，这种保藏剂的成分为
NaCl 30 — 60 mmol/L, NaH2PO4 2 — 5 mmol/L, Na2HPO4 4 — 10 mmol/L ；NaHCO3 2 — 5mmol/L, Na2CO3 4 — 10 mmol/L, FeCl3 6 — 12 mmol/L, CaCl2 8 — 16 mmol/L, MgCl2 16 —32 mmol/L, ZnCl2 16 — 32 mmol/L, MnCl2 1 — 2 mmol/L,依地酸二钠 2 — 5 mmol/L,维生素 C 2 — 5 mmol/ L,维生素 D 2 一 5 mmol/ L,维生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇 100 —200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。
氯化钠30 — 60 mmol/L,磷酸二氢钠2 — 5 mmol/L,磷酸氢二钠4 一 10 mmol/L ;碳酸氢钠 2 — 5 mmol/L,碳酸钠 4—10 mmol/L,氯化铁 6—12 mmol/L,氯化I丐 8 — 16 mmol/L,氯化镁16 - 32 mmol/L,氯化锌16 — 32 mmol/L,氯化锰I 一 2 mmol/L,依地酸二钠2 —5 mmol/L,维生素 C 2 一 5 mmol/ L,维生素 D 2 一 5 mmol/ L,维生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇100 - 200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。将以上成分按照比例称量，并用水溶解，定容。2.本发明的一种保藏大鲵精液的特殊方法是
O选取性腺成熟的大鲵雄鱼，采集成熟精液；
2)用权利要求I的保藏剂稀释大鲵精液；
稀释的时候按照，大鲵精液稀释液以“I - 3” “15 - 45”的比例稀释；稀释的时候温度为10-15°C。螺旋藻多糖从螺旋藻提取出的生理活性多糖，无毒。性状无色的或淡黄色粉末。溶于水，不溶于醇和油脂。质量指标外观无色的或淡黄色粉末。螺旋藻多糖通过抑制机体内自由基氧化反应，降低脂质过氧化作用，减少组织脂褐质的形成，可以达到减缓机体衰老的作用。 螺旋藻多糖能增强骨髓细胞增殖活力、促进DNA修复合成作用，有良好抗辐射功能和降低放疗、化疗副作用，对电离辐射损伤具有明显的防护效果。螺旋藻多糖能提高机体非特异性的细胞免疫功能，而且能促进机体转异性体液免疫功能，提高低御病菌、病毒入侵的能力。螺旋藻多糖能促进胸腺、脾腺等免疫器官生长，促进免疫血清蛋白合成，消除免疫抑制剂对免疫系统的抑制作用。一种螺旋藻多糖的提取方法包括而不限于将螺旋藻原料浸入水中，搅匀后放 在-15°C的冰中冷冻72小时，取出快速融冻，离心过滤，藻渣提取螺旋藻多糖；滤渣中加入Na2 C O 3溶解成溶液，离心过滤，弃去滤渣，保留滤液.调节滤液P H至中性，浓缩，喷雾干燥即成。本发明的大鲵育种群体培育和生殖调控
将大鲵育种群体建立育种档案，在人工养殖条件下集中饲养培育，达到2-3月龄。育种群体的年培育温度控制在12-24°C，采用正常日照，繁殖季节水温控制在10-15°C，光照时间6-8h，光照强度800-12001UX，连续照射O. 5-1月，水流交换量为2_3m3/h，
亲鱼在非繁殖季节利用市售铒料饲喂，
繁殖季节利用添加5%蚯蚓的市售铒料饲喂。经过以上培育达到性成熟，产出成熟卵子和精子。精液采集和运输
选择性成熟的雄鱼，采用腹部挤压法采集精液，将雄鱼泄殖孔周围擦干，用玻璃吸管吸取乳白的精液，不要吸取排出的黄色尿液。将采集的精液全部盛入20ml的干燥的玻璃瓶中，将装有精液的玻璃瓶置于冰上。精液在运送途中避免光线直射。长途运输的大鲵精液用于配种的方法
O选取性腺成熟的大鲵雄鱼和雌鱼，分别采集成熟精液和卵子；
2)用本发明的保藏剂稀释大鲵精液。稀释的时候按照，大鲵精液稀释液以(I — 3)ml (15 -45) ml的比例稀释；稀释的时候温度为10-15°C。将稀释的大鲵精液与卵粒均匀混合，卵粒与精液体积比为(15 — 30)ml : (O. I —
O.5) ml，搅拌后10-15°C静置5_20min，加入适量10_15°C溪流水人工受精。3)大鲵鱼苗的获得将受精卵移至10_15°C溪流水中孵化，按照常规大鲵苗种生产方法管理，培育大鲵鱼苗。大鲵鱼苗的培养方法
在4个Im3水缸中，分别进行饲养，早期用微流水，每天交换量O. 3m3，保持水质清新，每天早晚各I次除去池底沉淀。第I个水缸中放养初孵仔鱼数量在4000尾左右，不投放颗粒饲料
第2个水缸中放养伏底鱼苗(体长Icm) 2000尾，颗粒饲料粒径80-100 μ m,
第3个水缸中放养5-10cm鱼苗1000尾，颗粒饲料粒径200-400 μ m，第4个水缸中放养20-25cm鱼苗500尾。颗粒饲料粒径800 μ m左右。第1-4个水缸的水体中，螺旋藻投喂量10-20万个/ml，轮虫投喂量10_20个/ml，卤虫投喂量5-10个/ml。
具体实施方式
具体实施例I
O选取性腺成熟的大鲵雄鱼和雌鱼，分别采集成熟精液和卵子；
2)用本发明的保藏剂稀释大鲵精液。氯化钠30mmol/L,磷酸二氢钠2mmol/L,磷酸氢二钠4 mmol/L ;碳酸氢钠2mmol/L,碳酸钠4 mmol/L,氯化铁6mmol/L,氯化|丐8 mmol/L,氯化镁16mmol/L,氯化锌16 mmol/L,氯化猛lmmol/L,依地酸二钠2 mmol/L,维生素C 2mmol/ L,维生素D 2mmol/ L,维生素E 2 mmol/ L,甘露醇100 mmol/L,螺旋藻多糖100 mmol/L,其余是水。将以上成分按照比例称量，并用水溶解，定容。稀释的时候按照，大鲵精液稀释液以(l)ml (15)ml的比例稀释；稀释的时候温度为10 °C。将稀释的大鲵精液与卵粒均匀混合，卵粒与精液体积比为(15) ml (0. l)ml，搅拌后10°C静置lOmin，加入适量10°C溪流水人工受精。3)大鲵鱼苗的获得将受精卵移至10°C溪流水中孵化，按照常规大鲵苗种生产方法管理，培育大鲵鱼苗。建立大鲵鱼苗种系进行测量，30天体长为10. 21-15. 47cm,体重为25. 56-27. 34g，生长快，存活率高达79. 3%，抗病力强，与常规育种得到30天地相比，体长长10. 8%，体重高15. 5%，存活率高12. 9%ο具体实施例2
O选取性腺成熟的大鲵雄鱼和雌鱼，分别采集成熟精液和卵子；
2)用本发明的保藏剂稀释大鲵精液。氯化钠60 mmol/L,磷酸二氢钠5 mmol/L,磷酸氢二钠10 mmol/L ;碳酸氢钠5mmol/L,碳酸钠10 mmol/L,氯化铁12 mmol/L,氯化|丐16 mmol/L,氯化镁32 mmol/L,氯化锌32 mmol/L,氯化猛 2 mmol/L,依地酸二钠 5 mmol/L,维生素 C5 mmol/ L,维生素 D 5 mmol/L，维生素E 5 mmol/ L，甘露醇200 mmol/L，螺旋藻多糖200 mmol/L，其余是水。将以上成分按照比例称量，并用水溶解，定容。稀释的时候按照，大鲵精液稀释液以(2) ml (40) ml的比例稀释；稀释的时候温度为15°C。将稀释的大鲵精液与卵粒均匀混合，卵粒与精液体积比为(30) ml (0. 5)ml，搅拌后15°C静置20min，加入适量15°C溪流水人工受精。3)大鲵鱼苗的获得将受精卵移至15°C溪流水中孵化，按照常规大鲵苗种生产方法管理，培育大鲵鱼苗。建立大鲵鱼苗种系进行测量，30天体长为12. 19-17. 67cm,体重为24. 39-29. 21g，生长快，存活率高达79. 3%，抗病力强，与常规育种得到30天地相比，体长长
12.1%，体重高16. 7%，存活率高13. 1%。权利要求
1.大鲵精液的保藏剂，这种保藏剂的成分为 氯化钠30 — 60 mmol/L,磷酸二氢钠2 — 5 mmol/L,磷酸氢二钠4 一 10 mmol/L ;碳酸氢钠 2 — 5 mmol/L,碳酸钠 4—10 mmol/L,氯化铁 6—12 mmol/L,氯化I丐 8 — 16 mmol/L,氯化镁16 - 32 mmol/L,氯化锌16 — 32 mmol/L,氯化锰I 一 2 mmol/L,依地酸二钠2 —5 mmol/L,维生素 C 2 一 5 mmol/ L,维生素 D 2 一 5 mmol/ L,维生素 E 2 一 5 mmol/ L,甘露醇100 - 200 mmol/L，螺旋藻多糖100 — 200 mmol/L，其余是水。
2.本发明的大鲵精液的保藏剂的制备方法，将权利要求I的成分按照比例称量，并用水溶解，定容。
3.本发明的一种保藏大鲵精液的特殊方法，其特征是 (O选取性腺成熟的大鲵雄鱼，采集成熟精液； (2)用权利要求2的保藏剂稀释大鲵精液；稀释的时候按照，大鲵精液稀释液以“I 一3” “15 — 45”的比例稀释；稀释的时候温度为10-15°C。
全文摘要
本发明涉及一种大鲵精液保藏剂，其成分包括氯化钠，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠；碳酸氢钠，碳酸钠，氯化铁，氯化钙，氯化镁，氯化锌，氯化锰等，其余是水。本方法发明工艺简单，成本低，可操作性强，大大提高大鲵的繁育率。
文档编号A01N1/02GK102742569SQ20121027767
公开日2012年10月24日 申请日期2012年8月7日 优先权日2012年1月15日
发明者李国 申请人:李国